人类疾病研究的新焦点:中性肽链内切酶(NEP)——NEP生理功能及其潜在调控因子研究之进展(英文)

Neprilysin(NEP)是M13锌金属蛋白酶家族的一种Ⅱ型整合细胞膜糖蛋白.自从1974年首次被定义以来,NEP作为一种神经肽的降解酶,已经被发现广泛地存在于中枢神经系统以及外周各种组织中,并具有众多组织特异性功能.其中,NEP具有两大重要生理功能:一是NEP通过抑制细胞迁移增殖并诱导细胞程序性死亡具有抗肿瘤作用,这依赖它的酶学特性以及与涉及细胞信号转导通路的关键分子直接的蛋白-蛋白间相互作用;另外,NEP具有神经保护作用,这主要通过阻止神经毒物——淀粉样蛋白Aβ在大脑中的聚集来实现.通过研究各种人类疾病的进展,目前发现这些疾病经常伴随有NEP表达的削弱和活性下降.基于这些发现,调控NEP在病理细胞中的不同水平正在逐渐被认可为具有治疗应用前景的一种策略,从而达到恢复正常的细胞功能并缓解病症的目的.现阶段的研究重点,主要在于揭示涉及NEP的表达以及活性的一些调控机制,并且获得了大量鼓舞人心的研究成果.例如,男性荷尔蒙已知是前列腺中NEP的转录调节因子.除它之外,最新研究结果还发现,女性雌激素,柳栎的水合萃取物,绿茶的一些组分,各种神经肽比如韩蛙皮素和生长激素抑制素以及淀粉样前体蛋白的胞内区,也都对NEP的表达和活性有刺激作用.

血管紧张素转化酶和中性肽链内切酶的双重抑制剂

新型血管紧张素转化酶和中性肽链内切酶的双重抑制剂 ,在作用机制上较单纯ACE抑制剂有一定的优越性。它们通过抑制ACE和NEP的活性而发挥降低血压 ,增加体内ANP水平 ,促进尿钠排泄的作用。同时还具有抑制心肌肥厚 ,改善心、肾功能等作用。因此ACE和NEP双重抑制剂为高血压和心衰的治疗开辟了一条新途径。本文简要综述其药理作用机制。

大鼠肾内中性肽链内切酶的分布

大鼠肾内中性肽链内切酶的分布重庆医科大学附属第一医院（６３００４２）秦俭，陈运贞重庆医科大学检验系涂植光心钠素（ＡｔｒｉａｌＮａｔｒｉａｒｅｔｉｃＦａｃｔｏｒ，ＡＮＦ）具有强烈的利尿、利钠及血管扩张等效应［１，２］，其生物半衰期仅数分钟［３］，然而有...

中性肽链内切酶对心衰所致胸腔积液的诊断价值

目的探讨胸腔积液中性肽链内切酶(neprilysin,NEP)浓度变化及其对心衰所致胸腔积液的诊断价值。方法 88例胸腔积液住院患者纳入研究,根据病因分为心衰组胸腔积液25例,类肺炎组胸腔积液21例,结核组胸腔积液21例及肿瘤组胸腔积液21例,酶联免疫吸附法测定胸腔积液NEP浓度。结果 (1)心衰组NEP浓度显著低于其他组(P<0.001),类肺炎组和肿瘤组NEP浓度无显著差异(P>0.05),均显著低于结核组(P<0.001)。(2)胸腔积液中NEP浓度和血清脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)含量呈负相关(r=-0.570,P<0.001)。(3)ROC曲线显示NEP浓度271 pg/mL为临界值诊断心衰所致胸腔积液灵敏度为76%,特异度为92.06%。胸腔积液NEP联合血清BNP诊断心衰所致胸腔积液灵敏度为98.1%,特异度为98.4%。结论心衰所致胸腔积液中NEP分泌降低,对诊断心衰有一定参考价值;胸腔积液NEP联合血清BNP可提高心衰诊断的灵敏度和特异度。

肝细胞癌中性肽链内切酶和二肽基肽酶Ⅳ表达水平对手术切除术后患者预后的影响

目的探讨肝癌组织中性肽链内切酶(NEP)和二肽基肽酶IV(DPPⅣ)表达水平对肝细胞癌(HCC)患者肝癌切除术后预后的影响。方法选择2008年1月~2013年7月北京第301医院肝胆外科行肝癌切除治疗的HCC患者42例,选择同时期检查的42例肝良性肿瘤患者肝组织作为对照。采用免疫组化法检测NEP和DPPⅣ。采用Kaplan-Meier法进行无复发生存(RFS)曲线和总生存(OS)曲线绘制,采用Cox比例风险回归模型进行多因素分析,确定影响RFS和OS的因素。结果 NEP和DPPⅣ蛋白均定位于HCC细胞胞浆;HCC组织NEP蛋白阳性率为78.6%(33/42),DPPⅣ蛋白阳性率为71.4%(30/42),NEP和PPⅣ蛋白双阳性率为54.8%(23/42),均显著高于正常组织【2.4%(1/42)、4.8%(2/42)和0.0%(0/42),P<0.05】;经单因素和多因素分析显示,肿瘤分化、NEP表达、DPPⅣ表达、NEP和DPPⅣ共表达、复发、癌细胞远处转移是影响HCC患者RFS和OS的独立危险因素;生存曲线显示,HCC组织NEP阳性、DPPⅣ阳性和NEP/DPPⅣ均阳性表达者RFS和OS显著缩短,预后差。结论 NEP和DPPⅣ表达水平是HCC患者预后不良的危险因素。

尿中性肽链内切酶:一种新的肾小管损伤指标

目的:建立尿中性肽链内切酶(NEP)检测方法,并应用于肾小管损伤的判断。方法:应用三明治ELISA法和荧光法检测尿NEP,对两种方法的检测效果予以评价,并比较两种方法在帮助诊断肾小管疾病中的符合率及差异性。对各种肾脏疾病患者与正常对照组尿NEP进行比较,并在各组内对尿NEP与其他代表肾小管损伤的指标进行比较。结果:两者符合率大致相等,在各组中两种方法检测结果的差异无显著性。在急性肾小管损伤组中,尿NEP明显高于正常对照组;在慢性肾小管损伤组、马兜铃酸肾病组、慢性肾功能衰竭组,尿NEP均明显低于正常对照组,且尿NEP与尿微量蛋白呈不同程度的负相关;在单纯肾小球疾病组,尿NEP与正常对照组差异无显著性,与尿微量蛋白不相关。结论:尿NEP在肾脏疾病的不同病程中出现双向的变化,当结合其他尿微量蛋白检测时,可以帮助判断肾小管损伤处于急性期还是慢性期,从而有助于选择治疗方案和评估预后。

酶联免疫吸附法测定尿中性肽链内切酶及其临床意义

目的:建立尿中性肽链内切酶(NEP)检测的酶联免疫吸附(ELISA)法,探讨该检测的临床意义。 方法:将研究组分为对照组(n=100) 、单纯肾小球疾病组(n=31)、急性肾小管损伤组(n=44)、慢性肾小管损伤组(n=48)、马兜铃酸肾病组(n=13)、慢性肾功能衰竭(CRF)组(n=13)。收集各组患者晨尿,用ELISA法测得尿NEP的浓度,并用相应尿肌酐值予以标化。同时检测各组患者的尿微量蛋白。 结果:急性肾小管损伤组尿NEP明显高于正常对照组(P=0.0001), 慢性肾小管损伤组、马兜铃酸肾病组、CRF组尿NEP均明显低于正常对照组(P均< 0.01),而单纯肾小球疾病组尿NEP与正常对照组无差异(P =0.3027)。急性组尿NEP与尿NAG呈正相关,与其他几种尿微量蛋白间无相关性。在其他几组内,尿NEP与肌酐清除率(Ccr)呈正相关,与尿微量蛋白呈负相关。在肾小球疾病组内尿NEP与尿微量蛋白无明显相关性。 结论:本研究首次建立了尿NEP检测的ELISA法,并用于临床研究。对尿NEP的检测,提供了一种快速、非损伤性测量手段,籍此帮助诊断近端肾小管损伤及判断病程。

松墨天牛中性肽链内切酶2基因的鉴定与表达

为了探讨M13家族中的中性肽链内切酶2基因在昆虫中的表达特性,以松墨天牛为研究对象,从cDNA文库中筛选到松墨天牛中性肽链内切酶2基因,命名为MaNep2(GenBank:KU245762)。该序列长为2 471bp,其中编码序列为2 280bp,共编码759个氨基酸。由此预测的蛋白质二级结构主要由α-螺旋与无规则卷曲组成,其次是延伸链与β-转角。MaNep2基因编码蛋白定位于细胞质,为跨膜蛋白,跨膜区长度为23个氨基酸(C^(25) LTLSTAVAFVIGISLVVALATV^(47)),并存在一个低复杂度区域:I^(423) SAGSLSIASGAL^(435)。通过DNAMAN软件比对发现MaNep2与山松甲虫和赤拟谷盗同源性最高,为82%,且存在4个保守结构域序列:NAFY(553-556)、HEITH(594-598)、ENIAD(656-660)、CXXW(756-759);用MEGA4.0构建系统发育树,显示松墨天牛与山松甲虫处在同一分支。qPCR分析表明:MaNep2的表达与松墨天牛的变态发育相关,各虫态不间断表达,幼虫期表达表现先上升后下降,化蛹期间表达表现为先下降后上升,羽化期间表达表现为先上升后下降,并在初羽化的成虫中表达量达到最大值;幼虫和成虫头部表达量最高,且在马氏管中均有表达;成虫的足、翅、触角和卵巢中也都有表达。

黄野螟中性肽链内切酶基因表达的时空动态

从黄野螟(Heortia vitessoides Moore)转录组文库中成功筛选到具有完整ORF框的黄野螟中性肽链内切酶基因(NEP)序列,命名为HvNEP(登录号:MH298329)。该序列ORF框长2 310 bp,共编码769个氨基酸。同源比对分析结果表明,HvNEP蛋白氨基酸序列与棉铃虫(Helicoverpa armigera Hubner)NEP蛋白氨基酸序列的同源性最高,达79%。RT-qPCR结果显示,HvNEP在黄野螟成虫中表达量最高,为卵(对照)的113.77倍。HvNEP在黄野螟不同组织间存在表达差异,幼虫阶段在头部表达量最高,为体壁(对照)的5.28倍。成虫阶段,HvNEP在翅中表达量最高,为腹(对照)的11.06倍,在足中最低(0.11倍)。分析黄野螟NEP时空表达动态发现,HvNEP可能与昆虫行为的调控及神经系统的完善有关。在60 ng/μl和120 ng/μl的20-羟基蜕皮激素(20E)胁迫下,HvNEP表达量均高于对照,表明HvNEP作为蜕皮激素的次级应答基因,其表达受20-羟基蜕皮激素调节。

卵巢肿瘤中ET-1和NEP的表达及其相关性

目的探讨内皮素-1(ET-1)和中性肽链内切酶(NEP)在卵巢肿瘤组织中的表达及其相关性。方法应用免疫组化法检测56份卵巢癌、19份良性卵巢肿瘤和17份正常卵巢组织中ET-1和NEP的表达,并分析其相关性。结果ET-1在卵巢肿瘤中的表达率高于正常卵巢组织(P<0.05)和卵巢良性肿瘤(P<0.05)。在卵巢癌组织中,ET-1阳性表达率在不同病理类型、病理分级和手术病理分期的病例间差异无统计学意义(P>0.05)。NEP在良性卵巢肿瘤和卵巢癌中的阳性表达率高于正常卵巢组织(P<0.05)。在卵巢癌组织中,NEP阳性表达率在不同病理类型、病理分级和手术病理分期的病例间差异有统计学意义(P<0.05)。结论NEP在卵巢癌组织中可能无法降解ET-1的活性。

中性肽链内切酶(CD10)生理功能研究进展

中性肽内切酶(Neutral Endopeptidase,NEP),属于M13锌金属蛋白酶家族的一种Ⅱ型整合细胞膜糖蛋白,在许多组织中有广泛的表达。同时,NEP作为一种神经肽的降解酶,已经被发现广泛地存在于中枢神经系统以及外周各种组织中。NEP通过水解疏水性氨基酸侧链,使神经肽失活。而这些神经肽参与生命调节的多重代谢活动,对生命系统的正常有序运转有重要的作用。其中P物质为一种神经肽,是造血系统网络的成员之一,同时也可以诱发炎症反应,从而,NEP可以间接参与造血系统和呼吸系统的代谢活动。而心钠素是调节血压维护心肌功能的重要调节因子,NEP通过调节心钠素的浓度来调节血压,最终参与心血管系统的代谢。由于NEP具有广泛的组织特异性,决定了NEP在多个系统的调节中都具有重要意义。因此就NEP在造血系统,心血管系统和呼吸系统的功能做一综和评述。

尿中性肽链内切酶的检测及其在诊断肾小管损伤中意义

目的 建立尿中性肽链内切酶(NEP)浓度的检测方法并结合临床,探讨它与肾小管损伤的关系。方法 将研究组分为对照组(n=100),单纯肾小球疾病组(n=31)、急性肾小管损伤组(n=44)、慢性肾小管损伤组(n=48)、马兜铃酸肾病组(n=13)、慢性肾功能衰竭(CRF)组(n=13)。收集各组患者晨尿,用荧光光谱分析法测得尿NEP的浓度,并用相应尿肌酐值予以标化。同时检测各组患者的尿微量蛋白。结果 急性肾小管损伤组尿NEP明显高于正常对照组(P=0.0001),慢性肾小管损伤组、马兜铃酸肾病组、CRF组尿NEP均明显低于正常对照组(P均<0.01),而单纯肾小球疾病组尿NEP与正常对照组无差异(P=0.142 5)。在急性组尿NEP与尿NAG成正相关,与其他几种尿微量蛋白间无相关性。在其他几组内,尿NEP与Ccr成正相关,与尿微量蛋白成负相关。在肾小球疾病组内尿NEP与尿微量蛋白无明显相关性。结论 本研究在国内率先建立了尿NEP的检测方法,并用于临床研究。对尿中NEP的检测,提供了一种快速、非损伤性测量手段,籍此帮助判断近端肾小管损伤,结合其他小管损伤的指标可以帮助判断病程。

CNP/NPR-B效应轴与NPR-C/NEP清除途径在大鼠梗阻肾脏的表达

目的研究C-型利钠肽(CNP)/B-型利钠肽受体(NPR-B)效应轴与C-型利钠肽受体(NPR-C)/中性肽链内切酶(NEP)清除途径在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾脏的表达情况。方法原位杂交、荧光定量PCR、免疫组化和Western blot检测UUO大鼠术后24 h、72 h、1周、2周、3周、1个月、2个月和3个月时肾脏CNP、NPR-B、NPR-C、NEP及IV型胶原mRNA和蛋白的表达情况。结果 CNP主要表达于肾小管上皮细胞,在梗阻后即刻显著增加,随疾病进展增幅逐渐衰减。CNP高表达主要归因于UUO早期NPR-B表达上调。结论 NEP和NPR参与肾小管间质纤维化病程中CNP表达调控;NPR-C和NEP表达渐增是导致CNP增幅降低的可能原因。

酶联免疫吸附试验测定尿中性肽链内切酶及其临床意义

中性肽链内切酶(neutral endopeptidase,NEP,EC 3.4.24.11)是一种含锌金属的肽酶(Ⅱ型完整膜蛋白),在人肾组织中含量最丰富.该酶大量位于近端肾小管上皮刷状缘膜上,由于其相对分子质量较大(94 000),不能自由通过肾小球基底膜,主要是由近端肾小管排出,生理状态下只少量地排入尿液.当肾小管损伤时,其在尿中的排出量发生变化,尿NEP的量实际反映了残余的肾小管刷状缘的比例[1].由于至今仅有少数国外实验室用荧光光谱分析法检测尿NEP,且操作复杂,需特殊仪器,因此尿NEP的测定尚未能普及于临床.本研究采用双抗体夹心ELISA检测尿NEP,意在明确ELISA检测尿NEP的临床意义.

可溶性人基质裂解素2和中性肽链内切酶与呼吸系统疾病的研究进展

可溶性人基质裂解素2（soluble suppression of tumorigenicity-2,s ST2）及中性肽链内切酶（neprilysin,NEP）作为新的生物标记物,近年备受关注。研究认为s ST2、NEP在心力衰竭中的应用价值与前体脑钠肽（N-terminal prohormone B-type natriuretic peptide,NT-Pro BNP）相当。

肺癌组织中NEP、APN的表达变化及意义

目的观察肺癌组织中中性肽链内切酶(NEP)、氨基肽酶N(APN)的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组织化学法检测73例肺癌组织、26例肺良性肿瘤、20例正常肺组织中的NEP、APN。结果肺癌组织中NEP、APN阳性表达率分别为32.88%、41.11%,肺良性肿瘤组织中分别为88.46%、15.38%,正常肺组织中分别为95.00%、5.00%;肺癌组织中NEP、APN阳性表达率与肺良性组织、正常肺组织比较,P均<0.01。NEP、APN表达与肺癌的临床分期、组织分化程度及有无淋巴结转移有关(P均<0.05)。结论肺癌组织中NEP表达降低、APN表达增高,二者在肺癌中的发生、发展中发挥一定作用。