微小RNA-518b对肝癌细胞株增殖凋亡及侵袭的影响及其机制

目的研究微小RNA(miRNA,miR)-518b对肝癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响.方法实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-518b在肝癌和正常肝细胞株的表达.HepG2细胞株分成miR-518b过表达组(miR-518b组)、阴性对照组(miR-Con组)及空白对照组(Blank组).噻唑蓝(MTT)测定增殖,流式细胞术测定凋亡,Transwell测定侵袭.分光光度比色法测定半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspawe-9活性,蛋白质印迹法(Westernblot)测定Rap1b蛋白表达,计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验.结果miR-518b在肝癌细胞株中表达下调.转染后72、96h,miR-518组吸光度(A)490nm低于miR-Con组(0.66±0.07比0.94±0.08,t=3.291,P<0.05)及(0.86±0.07比1.47±0.10,t=3.943,P<0.01),凋亡率高于miR-Con组及Blank组[(21.4±3.2)%比(7.5±1.2)%比(6.8±1.1)%,t=13.287,P<0.05].miR-518b组Caspase-3、Caspase-9相对活力高于miR-Con组和Blank组(2.10±0.20比1.02±0.04比1.04±0.05,t=16.287,P<0.05),(2.20±0.20比1.03±0.03比1.04±0.03,t=16.298,P<0.05).3组Caspase-8相对活力差异无统计学意义(t=8.288,P>0.05).miR-518b组侵袭细胞数少于miR-Con组和Blank组(74±10比151±15比153±12,t=17.276,P<0.05),Rap1b表达量低于miR-Con组和Blank组(0.38±0.03比1.03±0.06比1.05±0.04,江19.642,P<0.05).结论miR-518b在肝癌细胞株中下调表达,过表达miR-518b可抑制增殖和侵袭,诱导凋亡,其机制与Caspase-3、Caspase-9上调及Rap1b下调表达有关.

微小RNA-518b在乳腺浸润性导管癌中的表达及其功能

目的观察miR-518b在乳腺癌中的表达，以及对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖、细胞周期、凋亡和侵袭能力的影响。方法运用定量逆转录聚合酶链反应（PCR）检测乳腺癌及正常组织中miR-518b的表达量，结合临床病理资料，分析其异常表达与各病理因素的相关性。并运用噻唑蓝（MTr）比色法了解其增殖，流式细胞仪分析细胞的周期、凋亡，Transwell实验观察其对细胞侵袭能力的影响。结果乳腺癌组织中miR-518b表达水平为2．751585±5．856351，正常组织中为7．334841±9．843424，癌组织中miR-518b表达明显低于正常组织（P〈0．01）。miR-518b在乳腺癌中的表达异常与淋巴结转移相关（P〈0．01），与病理分期、肿瘤大小、原癌基因人类表皮生长因子受体2（HER-2）、雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、pS3无明显相关性。在48h浓度为150nmoVL时，miR-518b对乳腺癌细胞的抑制作用最明显，抑制率为59．9％。与空对照组和负对照组比较，G0／G1期细胞未见明显增多（75．52±1．78）％，S期无明显减少（9．52±0．91）％，早期凋亡细胞比例未见明显升高（2．60±0．06）％（P〉0．05）。Transwell实验结果显示随着miR-518bmimics浓度的增加，穿出小室膜肿瘤细胞大致呈递减趋势，并与对照组差异明显（P〈0．01）。结论miR-518b在乳腺癌患者中异常表达，癌组织中的表达明显低于正常组织，miR-518b对乳腺癌细胞株的增殖和侵袭能力有明显抑制作用，其在肿瘤发生发展中可能担任着抑癌基因的角色。