EGCG对H_2O_2诱导的螺旋神经节细胞MnSOD基因表达的影响

目的 :探讨表没食子儿茶素没食子酸盐 (EGCG)在双氧水 (H2 O2 )诱导耳蜗螺旋神经节细胞 (SGCs)氧化损伤中对线粒体抗氧化酶基因 MnSOD基因表达的影响。方法 :培养离体SGCs,采用半定量RT PCR方法检测加入不同浓度H2 O2 和 /或EGCG后螺旋神经元MnSOD基因的表达情况。以经典抗氧化剂维生素C作对照。结果 :随着H2 O2 浓度提高 ,MnSOD基因的表达亦随之升高 ;在H2 O2 浓度大于 10 0 μmol/L时MnSOD基因表达明显上调 (P <0 .0 5 ) ,10 0 μg/mlEGCG能明显抑制H2 O2 诱导的MnSOD基因表达 (P <0 .0 5 )。结论 :EGCG可能通过清除氧自由基 ,提高MnSOD酶活性 ,抑制H2 O2

芡实提取物对SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用及体外抗氧化活性研究

目的观察芡实80%乙醇、乙酸乙酯、正丁醇提取物对过氧化氢(H2O2)诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用及其体外抗氧化活性。方法采用体外细胞培养的方法,建立SH-SY5Y神经细胞H2O2损伤模型。用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒法检测以上不同浓度芡实提取物对H2O2诱导损伤的SH-SY5Y神经细胞活力的影响,计算抑制率。用体外抗氧化实验方法检测芡实3种提取物清除DPPH、ABTS自由基及还原铁的能力。结果芡实80%乙醇、乙酸乙酯、正丁醇提取物在含生药量10～30mg/mL浓度范围内,均表现出明显的抑制H2O2对SH-SY5Y神经细胞氧化损伤的作用(P<0.05,P<0.01),且对DPPH、ABTS自由基及三价铁离子有很好的清除作用及还原能力,其中芡实正丁醇提取物的作用最强。结论芡实具有保护SH-SY5Y神经细胞免受H2O2氧化损伤的作用,有着很好的抗氧化活性,其中正丁醇提取物的抗氧化活性最强。

普伐他汀抑制重组人CD40配体诱导的U937诱导型细胞环氧合酶的表达

目的 探讨重组人CD40 配体(rhCD40L)对培养的人单核细胞(U937)表达诱导型环氧合酶(COX 2)的作用和普伐他汀对其的影响。方法 体外培养U937 细胞,分别以浓度为0. 05、0. 10、0. 20、0.40μg/ml的rhCD40L刺激24 h;以0. 40μg/ml的rhCD40L 分别刺激3、6、12、24 h。再将0. 40μg/ml 的rhCD40L与终浓度分别为1×10-2、1×10-3、1×10-4 mmol/L的普伐他汀共同刺激24 h。采用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)检测COX 2 mRNA的表达。结果 0.4μg/ml的rhCD40L刺激后3 h,可诱导COX 2 mRNA表达,随着rhCD40L浓度和作用时间增加,COX 2 mRNA表达明显增加(P<0.01),呈时效和量效的关系。0.4μg/ml的rhCD40L与普伐他汀共同刺激24 h后,COX 2 的表达明显被抑制。结论 rhCD40L可以时间和浓度依赖的方式诱导COX 2的表达,普伐他汀可抑制此作用。

CLIC4-RNAi对H_2O_2诱导的U251损伤细胞中线粒体膜电势的影响

作为细胞内氯通道家族成员之一的细胞内氯通道4（CLIC4）也称之线粒体细胞内氯通道（mtCLIC）,是细胞内氯通道家族中唯一在线粒体上表达的氯通道,最近大量研究表明CLIC4也参与了细胞凋亡过程。本实验通过过氧化氢（H2O2）复制神经胶质瘤（U251）细胞损伤模型,检测线粒体膜电势的改变,探讨CLIC4-RNAi对H2O2诱导的U251损伤细胞的线粒体膜电势的影响及其相关机制。

中断BMSCs向神经细胞诱导分化的细胞的恶变研究

目的:通过中断BMSCs的正常分化过程,探索肿瘤发生与干细胞分化受阻的关系。方法:全骨髓贴壁培养法获取BMSCs,β-巯基乙醇法诱导BMSCs分化为神经细胞,同时,在加入诱导培养基后的不同时间中断诱导,正常培养至第四代及之后。通过免疫组化检测、软琼脂克隆形成实验和CTX免疫抑制小鼠成瘤实验等鉴定和分析中断神经诱导细胞的分化特性和恶性转变趋势。结果:通过免疫组化检测中断神经诱导细胞逐渐表达了神经丝蛋白(NF);通过软琼脂集成形成实验,中断神经诱导40h组的细胞表现了比其他组较强的克隆形成能力,并在细胞病理学HE染色实验和细胞CTX免疫抑制小鼠成瘤实验证明中断神经诱导40h组的细胞发生了病理性恶变和获得致瘤性。结论:中断BMSCs的正常分化的培养,细胞有转化为肿瘤细胞的趋势。

急性脑梗死患者血清HIF-1α、sCD40L、CCL3水平与梗死部位、神经功能缺损的相关性

目的探讨急性脑梗死患者血清低氧诱导因子1α(HIF-1α)、可溶性白细胞分化抗原40配体(sCD40L)、趋化因子CC基序配体3(CCL3)水平与梗死部位、神经功能缺损的相关性。方法选择2015年1月至2018年1月武汉钢铁(集团)公司第二职工医院接诊的80例急性脑梗死患者为研究对象,设为观察组,并选择同期体检健康者65例作为对照组,分析血清HIF-1α、sCD40L、CCL3与梗死部位、神经功能缺损的相关性。结果观察组患者血清HIF-1α、sCD40L、CCL3水平显著高于对照组(P<0.05);皮层下梗死组患者血清HIF-1α、sCD40L、CCL3水平显著高于皮层梗死组患者(P<0.05);重度神经功能缺损患者血清HIF-1α、sCD40L、CCL3水平显著高于轻度、中度神经功能缺损患者(P<0.05);将梗死部位、神经功能缺损作为因变量,将血清HIF-1α、sCD40L、CCL3分别作为自变量,相关性分析结果显示,血清HIF-1α、sCD40L、CCL3和梗死部位、神经功能缺损之间均呈正相关(P<0.05)。结论在急性脑梗死患者中HIF-1α、sCD40L、CCL3的表达和病情严重程度之间存在着密切关系,可促使疾病进展。

局灶性脑缺血海马神经元淀粉样β蛋白及其蛋白前体的表达

目的观察人脑缺血后淀粉样β蛋白140(Aβ140)与其淀粉样β蛋白前体(βAPP)在海马CA1区神经元的表达。方法收集43例因脑缺血而梗死的尸检标本,按缺血时间(发病至死亡时间)分为缺血2～6h、7～24h、25～48h、49～72h、73～96h、97～144h组和145～168h组。选取因其他疾病死亡(非脑缺血)尸检标本2例为对照组。采用HE染色方法观察神经细胞损伤情况;免疫组织化学染色检测Aβ140与βAPP在海马CA1区神经元的表达,在镜下对免疫组织化学染色阳性细胞计数,实验结果应用SPSS11.5统计软件进行分析。结果与对照组(2.88个±0.18个/高倍视野)相比,缺血2～6h组Aβ140表达增加(22.44个±2.79个/高倍视野),在73～96h达高峰(36.30个±2.67个/高倍视野),以后有所回落,但仍高于对照组。缺血7～24h组βAPP阳性细胞数量(28.11个±2.03个/高倍视野)显著低于2～6h组(33.30个±0.42个/高倍视野),缺血24h后阳性细胞数量增多,73～96h组达高峰(32.32个±1.36个/高倍视野),96h以后下降,但仍高于对照组(25.90个±1.55个/高倍视野)。24h后βAPP的增加与Aβ140的增加呈显著正相关。结论人脑缺血后Aβ表达增加,并与βAPP协同加重脑缺血性损伤。

Genome-wide distribution of histone H3 acetylation in all-trans retinoic acid induced neuronal differentiation of SH-SY5Y cells

With chromatin immunoprecipitation (ChIP) and promoter DNA microarray analyses (ChIP-on-chip), we analyzed the variations of acetylation on histone H3 in all-trans retinoic acid (RA) induced neuronal cell differentiation. Neuroblastoma SH-SY5Y cells were treated with RA for 24 h and the acetylation on histone H3 in the promoter region of the genes was detected. Results showed that, after treatment, the level of acetylation on histone H3 elevated in 597 genes in the genome, and reduced in the other 647 genes compared with those of the control. In summary, we have successfully adopted a high throughput technique to detect and analyze variations of acetylation of histone H3 in human genome at the early phage of RA induced neuronal differentiation of the SH-SY5Y cells.

金耳醇提物体外抗氧化和PC12损伤修复作用的比较研究

采用化学发光法和H2O2诱导PC12氧化损伤修复模型,对三种金耳菌丝体醇提物的抗氧化活性及PC12细胞氧化损伤的修复作用进行研究与比较。结果显示:三种醇提物均有良好的抗氧化活性,其中YK抗氧化活性最高,对H2O2清除率的IC50为28.66μg/mL,YK在相同浓度下对H2O2自由基的清除作用高于对超氧自由基的清除作用;三种醇提物对H2O2诱导的PC12细胞氧化损伤都有修复作用,其中YK修复效果最好,当浓度为10μg/mL,50μg/mL和200μg/mL时,修复率分别为30.8%,40.6%和56.1%,呈现明显的浓度依赖性。