葡萄球菌中毒性休克毒素的分离纯化及其体外抗肝癌活性分析

采用固体膜进行TSST 1的产毒培养,然后从金葡菌产毒产物中经CM纤维素离子交换层析、SephadexG 75、SephacrylS 200三步纯化,成功地获得了纯度为95.3%的毒素,SDS PAGE呈现单一条带,与其对应抗血清有免疫学特异反应,不含核酸、糖和其它肠毒素等物质.与同类方法相比,该方法步骤少、快速、简便.对其体外抗肝癌活性进行了分析,首次证明即使TSST 1的浓度为10-8g L仍然对人肝癌细胞有显著抑制作用.

金黄色葡萄球菌肠毒素和中毒性休克毒素的分析

采用反向间接血凝法和双向免疫琼脂扩散试验,检测131株金葡菌的肠毒素和TSST-1并对其青霉素和甲氧西林耐药性作了测定。获得产毒株120株,产毒率为91.6%,Ⅰ型肠毒素为16.7%,Ⅱ型的为11.7%,Ⅲ型以上的占55%、TSST-1为16.7%。发现对青霉素的耐药株占92.3%,耐甲氧西林的占43.2%,产肠毒素的菌株耐青霉素为90.9%,耐甲氧西林43.3%。产TSST-1株耐青霉素为95.9%,耐甲氧西林为50%。对检测金葡菌肠毒素的临床意义进行了讨论。

中毒性休克毒素-1的结构-功能分析

中毒性休克毒素－１的结构－功能分析尚继栋雷祚荣（军事医学科学院微生物流行病研究所，北京１０００７１）Ｔｏｄｄ等于１９７８年首次介绍了中毒性休克综合征（ＴＳＳ），认为此病是由金黄色葡萄球菌引起的。１９８１年从ＴＳＳ相关的金葡菌株中分离到与发病密切相关的...

葡萄球菌中毒性休克毒素的分离纯化与性质分析

葡萄球菌中毒性休克毒素（ＴＳＳＴ－１）是引起毒性休克症（ＴＳＳ）的主要病原，同时又是超抗原家族的重要成员之一，对于肿瘤的免疫治疗有着潜在的药用价值。获得纯度高、活性好ＴＳＳＴ－１是开展该项研究工作的关键。产毒培养后经ＣＭ离子纤维素层析、ＳｅｐｈｄｅｘＧ－７５和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００凝胶过滤简便有效的三步程序，成功地获得了高纯度的中毒性休克毒素。对其理化和免疫学性质分析的实验证明，纯化毒素纯度大于９５％，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上呈现单一条带，与其对应型抗血清有免疫学特异反应，不含核酸、糖和其它各型肠毒素等物质。提纯毒素对其致病机理和体内外免疫学调节作用的研究有重要意义。

金黄色葡萄球菌中毒性休克毒素-1的研究进展

中毒性休克毒素-1(TSST-1)是噬菌体Ⅰ群金黄色葡萄球菌产生的外毒素,属于致热原性超抗原家族,其感染机体后可引起发热、脱屑型皮疹及休克,造成多器官功能紊乱,甚至引起中毒性休克综合征,对患者的健康构成严重威胁。TSST-1的研究在金黄色葡萄球菌感染的临床诊断、治疗及预后判断方面都具有重要价值。该文概述了TSST-1的表达调控、致病机制以及与临床疾病的相关性,并对未来靶向TSST-1的抗毒力治疗进行了展望。

金黄色葡萄球菌肠毒素和中毒性休克毒素-1检测的研究进展

研究表明 ,金黄色葡萄球菌产生的肠毒素和中毒性休克毒素 1是极强的致病因子 ,它们在介导感染性休克及器官损害中可能具有一定意义。本文简要评论了肠毒素和中毒性休克毒素 1传统检测方法 。

金黄色葡萄球菌中毒性休克综合征毒素-1 PCR检测方法的建立与初步应用

试验旨在建立敏感、特异快速检测金黄色葡萄球菌超抗原中毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)的PCR方法。根据TSST-1毒素基因(tst基因)的序列,设计合成了特异性引物,优化了PCR方法的引物浓度、退火温度及DNA模板量,测定了方法的灵敏度与特异性,并应用所建立的PCR方法检测了67株金黄色葡萄球菌分离株中的tst基因。结果表明,建立的PCR方法的最佳退火温度为55℃、引物浓度为0.4μmol/L,检测灵敏度为20 pg DNA,与表皮葡萄球菌、猪链球菌、四联球菌、沙门氏菌和大肠杆菌等均不发生交叉反应。在67株金黄色葡萄球菌分离株中,13株携带tst基因,其中鸡源分离株中携带tst基因的菌株约占9.1%(1/11),牛源分离株中携带tst基因的菌株约占21.4%(12/56)。本研究建立的PCR方法能够快速、特异、敏感地检测金黄色葡萄球菌超抗原TSST-1毒素基因,为动物源性食品中TSST-1的检测及产TSST-1毒素菌株的流行病学调查提供重要技术支持。

金黄色葡萄球菌毒素基因的检测及临床应用

目的:了解医院获得性金黄色葡萄球菌(HA-SA)和社区获得性金黄色葡萄球菌(CA-SA)所携带肠毒素、表皮剥脱性毒素(ETs)、中毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)及杀白细胞素基因(PVL)的特点。方法:应用PCR法检测肠毒素A、B、C、D、E基因,ETs A、B基因,TSST-1以及PVL。结果:116株金黄色葡萄球菌中,85株为HA-SA,检出肠毒素A基因6株,肠毒素C基因1株,肠毒素D基因1株,PVL2株;31株为社区获得性金黄色葡萄球菌,检出肠毒素A基因1株,肠毒素B基因1株,肠毒素D基因1株,PVL7株;所有菌株均未检测到肠毒素E、ETs A、B和TSST-1基因。CA-SA PVL检出率显著高于HA-SA,两者比较差异有统计学意义(P<0.005),而肠毒素、ETs和TSST-1基因检出率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:金黄色葡萄球菌可分泌多种毒素,在分离金黄色葡萄球菌的同时,应注意其毒素检测。

皮肤软组织及创伤感染金黄色葡萄球菌分离株的毒素基因检测

目的了解皮肤软组织及创伤感染的金葡菌携带的杀白细胞素(Panton—Valentine Leukocidin,PVL)基因、表皮剥脱性毒素(ETs)基因、中毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)的tst基因的特点。方法对连续收集的皮肤软组织感染中分离的90株金葡菌,采用多重PCR同时检测金葡菌特异性16SrRNA基因、mecA基因、PVL基因,采用PCR法检测TSST-1及EtsA、B基因。结果金葡菌mecA基因阳性47株(占金葡菌52.2%)为耐甲氧西林金葡菌(MRSA)。有1株MRSA的EtsB基因阳性,1株MRSA的TSST-1阳性,有7株金葡菌携带PVL基因,其中3株为mecA基因阳性株(MRSA)。结论金葡菌可分泌多种毒素,携带PVL毒素的金葡菌常可以引起严重的侵袭性感染,尤其对产毒的MRSA感染引起足够的重视,是防控的重点。

金葡菌肠毒素B对家兔脏器功能的影响

金葡菌肠毒素Ｂ对家兔脏器功能的影响施志国于勇姚咏明于燕陆连荣常国友马诺山（解放军三零四医院创伤外科中心，北京１０００３７）革兰氏阳性菌感染引起的脓毒性休克在临床上时有发生，革兰氏阳性菌外毒素，如金葡菌中毒性休克毒素Ⅰ和肠毒素等都可以引起这类严重的休克...

缺氧微环境对TSST-1诱导的抗CEA^+结肠癌LoVo细胞免疫治疗的调控

目的:研究缺氧微环境对靶向性表达的超抗原中毒性休克综合征毒素-1(toxic shock syndrome toxin-1,TSST-1)激活人外周血淋巴细胞(peripheral bloodlymphocyte,PBL)对CEA^+结肠癌LoVo细胞杀伤作用的调控。方法:包装、收集前期构建的缺氧反应元件(hypoxia-response elements,HRE)和癌胚抗原启动子CEAp联合调控的逆转录病毒载体pLEGFP-N1-5HRE-CEAp-TSST-1-1inker-CD80TM(简称pLEGFP-N1-5HCTC),感染CEA^+LoVo细胞及CEA^-宫颈癌HeLa细胞,获取稳定表达跨膜型超抗原TSST-1-linker-CD80TM蛋白(TC融合蛋白)的肿瘤细胞。用缺氧模拟试剂CoC1_2模拟缺氧微环境,RT-PCR和WesterRblotting分别检测缺氧调控下TSST-1的表达水平。将健康人PBL与pLEGFP-N1-SHCTC感染后的肿瘤细胞共培养,~3H-TdR掺入法检测缺氧调控下PBL的增殖能力,MTT法检测缺氧调控下PBL对肿瘤细胞的杀伤效应。结果:pLEGFP-N1-5HCTC病毒成功感染CEA^+LoVo细胞(5HCTC/LoVo),RT-PCR和Western blotting证实,缺氧可上调5HCTC/LoVo细胞中TSST-1mRNA和蛋白的表达,CEA^-HeLa细胞在常氧和缺氧条件下均无TSST-1的表达。缺氧可上调5HCTC/LoVo细胞诱导的人PBL的增殖(7.3×10~3 vs 3.1×10~3cpm,P<0.05),缺氧环境下PBL对5HCTC/LoVo细胞的杀伤率明显高于常氧环境(82.69%vs53.50%,P<0.01);CEA^-HeLa细胞不能刺激PBL增殖,PBL对其也无抑制作用。结论:缺氧微环境可显著上调靶向性表达的超抗原TSST-1诱导的对CEA^+LoVo细胞的杀伤作用。

慢性荨麻疹患者血清金黄色葡萄球菌超抗原特异性IgE检测及其意义

目的检测慢性荨麻疹(CU)患者血清金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)超抗原肠毒素A(SEA)、肠毒素B(SEB)和中毒性休克综合征毒素(TssT-1)的特异性IgE(sIgE),分析该超抗原sIgE与慢性荨麻疹相关性,探讨其发病机制。方法采用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测63例慢性荨麻疹患者和60例正常对照组血清金葡菌超抗原SEA、SEB和TssT-1的sIgE水平,分别进行金葡菌超抗原(SEA、SEB、TssT-1和SEA/SEB/TssT-1)sIgE比较,并将其浓度与病情程度评分(UAS)进行相关性分析。结果 CU患者血清中金葡菌超抗原(SEB、TssT-1和SEA/SEB/TssT-1)sIgE水平均高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);金葡菌超抗原(SEA、SEB和SEA/SEB/TssT-1)sIgE水平分别与CU病情轻中重度和荨麻疹活动评分(Urticaria activity score,UAS)呈正相关(P<0.05)。结论慢性荨麻疹患者血清中金葡菌肠毒素A、肠毒素B和TssT-1 sIgE水平升高,可能与其慢性病程及严重程度有关。

金黄色葡萄球菌分泌超抗原在动物体内外免疫作用机制的研究进展

目的介绍金黄色葡萄球菌分泌的超抗原在动物体内外与免疫系统的作用关系。方法以国内外大量文献资料为依据,对金黄色葡萄球菌分泌的中毒性休克综合征毒素1(TSST-1)、肠毒素A、肠毒素B三种超抗原刺激机体免疫反应的情况作出归纳和总结。结果金黄色葡萄球菌分泌的超抗原通过与体内的免疫系统成分作用,刺激细胞因子过度释放,构成细胞因子网络而诱发疾病。结论对金黄色葡萄球菌分泌的超抗原的研究有助于揭示其诱发疾病的病因以及确定正确的治疗和预防方案。

社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌毒力因子研究

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）作为医院感染相关性致病菌，一直以来受到人们的广泛关注，社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Community-acquired MRSA，CA-MRSA）作为其中一种分型，主要引起皮肤及软组织感染，感染类型包括疖、痈、毛囊炎、蜂窝织炎等，严重时可以引起脓毒症，甚至坏死性肺炎等。