应用中空纤维柱和凝胶色谱纯化鸡胚流感病毒

目的研究鸡胚尿囊腔培养流感病毒的纯化方法。方法采用中空纤维柱超滤、病毒裂解和两次Seph-arose 4FF凝胶色谱纯化流感病毒。结果通过中空纤维柱超滤可去除76.53%～93.66%卵清蛋白,再通过两次Sepharose 4FF凝胶色谱纯化,流感病毒样品总蛋白含量与血凝素含量比值小于4.5,卵清蛋白含量小于500 ng/mL,SDS-PAGE电泳和Western免疫印迹的电泳条带和血凝素特异性条带与英国国家生物制品检定所(NIBSC)的标准品一致。结论该工艺纯化的流感病毒的纯度符合《中国药典》2010版的要求。

方形中空夹层钢管超高性能钢纤维混凝土柱抗爆性能数值模拟与实验验证

建立了爆炸荷载作用下方形中空夹层钢管超高性能钢纤维混凝土(Ultra-High Performance Steel Fiber Reinforced Concrete Filled Double Skin Steel Tube,UHPSFRCFDST)柱动态响应及其损伤破坏三维有限元数值模型。首先通过模拟结果与爆炸破坏试验结果的对比分析,验证了数值模型和计算方法的有效性。进而运用参数化分析方法,研究了空心率、含钢率、内、外层钢管厚度及其强度等关键参数对UHPSFRCFDST柱抗爆性能的影响。研究结果表明,UHPSFRCFDST柱具有优越的抗爆性能,所建立的三维有限元模型能够有效地分析UHPSFRCFDST柱在爆炸荷载作用下的动态响应及其损伤破坏;在一定范围内减小空心率及提高外层钢管强度可有效提升UHPSFRCFDST柱抗爆性能;提高含钢率、减小内、外层钢管高厚比均能够显著提升UHPSFRCDST柱抗爆性能;内层钢管强度对UHPSFRCFDST柱的抗爆性能影响并不明显。

应用甲醛—赖氨酸解毒结合中空纤维超滤提高精制白喉类毒素纯度

精制白喉毒素单纯用甲醛解毒,解毒过程Lf/ml损失平均为14.81％,Lf/mg PN下降平均为13％;采用甲醛-赖氨酸解毒,解毒过程Lf/ml无损失,Lf/mg PN反而上升,平均为6.74％,纯度平均为2216Lf/mg PN。该制品经截留分子量为3万的中空纤维柱超滤后,纯度提高15.21％,平均为2540Lf/mg PN。HPLC仪分析结果表明,超滤后的特异类毒素成分由原来的78.26％增加至91.36％,非特异成分由原来的21.74％降低至8.64％。特异类毒素成分的分子量约为6.45万。

治疗用质粒DNA的纯化工艺

目的探索适合大规模生产治疗用质粒DNA的纯化工艺。方法采用中空纤维柱收菌、碱裂解,再应用中空纤维柱浓缩质粒,经分子筛、亲和、离子交换等层析分离纯化质粒DNA,并应用凝胶电泳、PCR、核酸蛋白检测仪、BCA蛋白检测试剂盒和内毒素检测试剂盒对所纯化的质粒DNA进行全面检定。结果所获得的超螺旋质粒DNA达到样品总质粒的91.2%;质粒DNA总纯度为1.8;内毒素含量小于10EU/mg;几乎检测不到蛋白质残留,未检出基因组DNA残留。各项指标均符合有关质量标准。结论所采用的纯化工艺省时省力,制备的质粒DNA纯度高,适用于大规模生产治疗用质粒DNA。

超滤法浓缩胶清橡胶性能的研究

采用中空纤维柱浓缩法制备天然橡胶胶清橡胶,并对其性能进行研究。结果表明:与未处理胶清橡胶相比,处理后胶清橡胶的丙酮溶物质量分数、塑性初值和塑性保持率均有所增大,挥发分质量分数、杂质质量分数、灰分质量分数和氮质量分数减小。与未处理胶清硫化胶相比,处理后胶清硫化胶的物理性能明显提高;随着处理孔径的增大,硫化胶的物理性能呈下降趋势。与未处理胶清橡胶相比,随着温度的升高,处理后胶清橡胶的损耗因子较小,剪切储能模量较大,表现出较好的加工性能。

提高成纤维细胞生长因子-21产率和纯度

成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)作为近期发现的新型代谢调节因子,因其具有独立于胰岛素调节糖脂代谢、增加胰岛素敏感性等作用,有望成为治疗糖尿病的新型药物。包涵体形式表达外源蛋白表达量及纯度高,但是以pET载体表达时,FGF-21以包涵体形式表达,且复性率及产率低,蛋白活性降低[1]。针对这一瓶颈问题,用SUMO载体首次以包涵体形式表达带有SUMO标签的hFGF-21,通过优化培养条件,并应用中空纤维柱膜过滤技术对菌体进行富集,对包涵体进行洗涤、变性及复性,经过亲和层析、凝胶过滤层析的纯化方法,得到了成熟的hFGF-21,在保证蛋白活性的同时增加了蛋白的产量及纯度。通过检测HepG2细胞葡萄糖吸收及2型糖尿病db/db小鼠短期及长期血糖变化鉴定其降糖生物学活性。结果表明,以包涵体形式表达hFGF-21(ihFGF-21)的表达量是可溶形式表达的hFGF-21(shFGF-21)的3倍,最终ihFGF-21的收率为20 mg/L,而shFGF-21的收率仅为6 mg/L。ihFGF-21的纯度可达到95%以上,而shFGF-21仅能达到90%左右;在细胞水平和动物水平上两者的降糖生物学活性一致。在保证hFGF-21生物学活性的前提下,与传统包涵体途径提取目的蛋白的方法相比,应用中空纤维柱膜过滤技术使hFGF-21的生产周期缩短了约1/3左右。综上所述,此法为FGF-21中试及工业化生产提供了高效、经济的策略。

哺乳动物细胞灌流培养工艺开发与优化

近年来生物药市场需求量激增,高产量、高质量、低成本的哺乳动物细胞灌流培养工艺顺势成为工业界和学术界普遍关注的热点。文中围绕灌流培养工艺特有的操作环节及工艺优化应着重关注的细节展开论述,综述了近年来在灌流培养工艺开发和优化上取得的进步和提出的策略,以期为哺乳动物细胞灌流培养技术的开发提供参考。

表达MERS-CoVS1蛋白重组狂犬病病毒rSRV9-MERSS1纯化方法的建立

建立一种可线性放大、应用于表达中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)S1蛋白重组狂犬病病毒rSRV9-MERSS1的规模化纯化方法。将收获的病毒去除细胞碎片、灭活后,分别通过3种方法(醋酸锌沉淀+Sepharose 4FF凝胶过滤层析、500 000中空纤维超滤柱+Sepharose 4FF凝胶过滤层析、500 000中空纤维超滤柱+CellufineTM Sulfate亲和层析)进行纯化,经比较筛选出一种温和、目的蛋白回收率高、纯度高的纯化方法。结果显示,500 000中空纤维超滤柱+Sepharose 4FF凝胶过滤层析回收的抗原含量最高,50 mL重组病毒原液经纯化后可得到1.82 mg蛋白,杂蛋白去除率达到97.02%,病毒纯度较高,电镜下可见到病毒囊膜刺突。结合成本等方面综合考虑,此方法优于其他2种纯化方法。本试验筛选获得了一种适用于rSRV9-MERSS1的纯化方法,为rSRV9-MERSS1规模化纯化工艺的建立与MERS新型疫苗的研制奠定了基础。