中空纤维离心超滤-HPLC法测定注射用两性霉素B脂质体的包封率

目的建立新型的中空纤维离心超滤法分离脂质体中游离药物,并结合HPLC法用于注射用两性霉素B脂质体的包封率的表征。方法采用新型中空纤维微量离心超滤（HF-CF-UF）装置,在离心力的作用下,利用中空纤维超滤膜分离游离药物和包封药物。色谱条件：色谱柱为Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-20 mmol·L-1乙二胺四乙酸二钠（体积比38∶62）,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为405 nm,柱温为30℃。结果两性霉素B质量浓度在0.670-21.4 mg·L-1内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 7）,回收率均在97%以上,RSD不大于2%。结论中空纤维离心超滤装置基本保持了脂质体处方的原始的、稳定的存在环境（物理化学环境）,最大限度地减少了脂质体的泄露,结果准确且简便快速,为脂质体包封率的表征提供了一种新方法。

中空纤维离心超滤-HPLC法测定盐酸伊立替康脂质体的包封率

目的:建立测定盐酸伊立替康脂质体包封率的方法。方法:采用改进的中空纤维离心超滤法(HFCF-UF)分离脂质体和游离药物;采用高效液相色谱法测定脂质体中盐酸伊立替康的含量,色谱柱为Diamonsil C_(18),流动相为甲醇-乙腈-磷酸盐缓冲液(称取磷酸二氢钾6.8 g溶于800 mL水中,加入三乙胺10 mL,以磷酸调pH至4.0,加水定容至1 000 mL)(55∶5∶45,V/V/V),流速为1.0mL/min,检测波长为254 nm,柱温为25℃,进样量为20μL。结果:盐酸伊立替康检测质量浓度线性范围为2.55~40.8μg/mL(r=0.999 2);定量限为0.64μg/mL;中间精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2%;超滤提取回收率为96.9%~100.2%(RSD=1.0%,n=9),空白加样回收率为95.5%~100.5%(RSD=1.7%,n=9)。包封率的平均值为94.85%(RSD=1.1%,n=3)。结论:该方法操作简便、准确,精密度、稳定性、重复性好,适用于盐酸伊立替康脂质体包封率的测定。

中空纤维离心超滤-高效凝胶排阻色谱法测定青霉素V钾中蛋白杂质

建立了一种采用中空纤维离心超滤(HFCF-UF)-高效凝胶排阻色谱法(HPSEC)对青霉素V钾中的残留蛋白进行检测的方法。样品用HFCF-UF进行富集,采用HPSEC进行分析,色谱柱为TSK gel Super SW2000凝胶色谱柱(300×4.6mm,4μm),流动相为0.06mol/L NaCl-0.02mol/L NaH_2PO_4(pH=7.0),流速为0.3mL/min,紫外检测波长为220nm,柱温为室温。对照品牛血清白蛋白(BSA)在1.0~100.0μg/mL内线性关系良好(R2=0.999),回收率均大于87%,检测限为3.03ng/mL,经HFCF-UF富集处理后,富集倍数(EF)高达99倍。结果表明,该方法操作简便、结果准确、灵敏度高,为同类药物中的大分子蛋白检测提供了有效手段。

中空纤维离心超滤法研究乙醇对氨茶碱游离药物浓度的影响

目的探讨乙醇对氨茶碱游离药物浓度的影响。方法采用中空纤维离心超滤(HFCF-UF)前处理技术结合高效液相色谱(HPLC)法对氨茶碱游离药物浓度进行测定,并比较乙醇加入前后游离药物浓度的变化。结果加入乙醇后氨茶碱游离药物浓度增加,且血浆乙醇浓度与游离药物浓度呈线性相关关系。结论加入乙醇可能会影响血浆中的氨茶碱与血浆蛋白的结合,游离药物浓度增加,易出现毒副作用及毒性反应。

中空纤维离心超滤-高效液相色谱法测定ICU患者比阿培南的谷浓度

目的:建立一种快速、简便、低成本的比阿培南血药浓度测定方法,并对ICU患者比阿培南谷浓度进行测定。方法:建立人血浆中比阿培南浓度的测定方法,并对其验证。前瞻性地收集2023年3—8月使用比阿培南的ICU患者8例,并测定其谷浓度。结果:比阿培南标准曲线为:y=0.1796x+0.0193(r=0.9999),0.2~50μg·m L^(-1),线性关系良好,定量下限为0.2μg·m L^(-1)。低、中、高3个质量浓度(0.5、5、40μg·m L^(-1))的绝对回收率平均分别为97.40%、99.43%和93.58%,方法回收率分别为100.55%、94.81%和97.41%。3个浓度的日间精密度、日内精密度均小于5.0%,使用本方法测得8例ICU患者的比阿培南谷浓度在0.51~1.79μg·m L^(-1)。ICU患者血药浓度测定结果表明,比阿培南对大肠杆菌具有较好疗效,对奇异变形杆菌、肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌引起感染的治疗效果可能不理想。结论:该方法简便、准确、重复性高、成本低,可用于比阿培南生物样品日常测定。可针对ICU感染患者进行治疗药物监测,及时调整用药方案。

中空纤维离心超滤法检测人血浆中氨茶碱的游离药物浓度

目的：建立一个准确、简单、快速的分析人血浆中游离氨茶碱浓度的方法,并应用于临床治疗药物监测。方法：0.5 ml血浆样品经过中空纤维离心超滤（HFCF-UF）处理,以甲醇-10 mmol·L-1乙酸铵缓冲溶液（15/85,V/V）为流动相,采用Diamonsil C18色谱柱分离,流速为1.0ml·min-1,检测波长为275 nm,进样量为20μl。结果：血浆中游离氨茶碱浓度在0.25-25μg·ml-1范围内线性关系良好,最低定量限0.1μg·ml-1,日内、日间RSD分别小于1.1%和1.3%。结论：该方法简单、准确、重现性好,特别适合基层开展临床游离药物浓度的监测。该方法成功的应用于临床游离氨茶碱浓度的监测,为临床游离氨茶碱治疗药物监测提供了一个可靠的分析平台和进一步阐述游离药物浓度与药物疗效或毒性之间的关系奠定了基础。

中空纤维离心超滤-HPLC法测定茵栀黄口服液中绿原酸的含量

目的：建立测定茵栀黄口服液中绿原酸含量的方法。方法：采用高效液相色谱法，样品经中空纤维离心超滤法处理后进行测定。色谱柱为Sapphire C18柱，流动相为乙腈-0．4％磷酸溶液（15：85，v／v），检测波长为327nm，流速为1．0ml／min，进样量为20μl，柱温为25℃。结果：绿原酸检测质量浓度在7．5-120μg／ml范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系（r=0.9999）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤1．6％；平均加样回收率为98．5％，RSD=1．5％（n=6）。结论：该方法操作简便、结果准确、经济、环保，有利于更加客观、全面地评价及控制茵栀黄口服液的质量。

预饱和-中空纤维离心超滤-高效液相色谱法测定吡罗昔康凝胶含量

目的:建立中空纤维离心超滤-HPLC法用于吡罗昔康凝胶剂中吡罗昔康的含量测定。方法:基于中空纤维可截留大分子的特性,采用中空纤维离心超滤法对吡罗昔康凝胶样品进行分离,有效滤除大分子辅料,并采用自身预饱和法解决吸附问题,所得滤液直接进行色谱分析。采用C_(18)色谱柱(250 mm×4.60 mm, 5μm),流动相为甲醇-0.5%冰醋酸溶液(60∶40),流速为1.0 mL·min^(-1),检测波长为338 nm。结果:吡罗昔康在1.03～51.25μg·mL^(-1)范围内线性关系良好(r=0.999 7),回收率在97.0%～102.9%范围内,RSD%≦1.2。结论:该方法简单、快速、准确度高,可用于吡罗昔康凝胶的含量测定。

中空纤维离心超滤法测定人血浆中双氯西林的游离浓度

目的采用新型中空纤维离心超滤联合HPLC测定人血浆中双氯西林的游离浓度。方法采用中空纤维离心超滤法对血浆样品进行预处理。采用Kromasil C18色谱柱进行HPLC测定,流动相为乙腈-25 mmol·L^(-1)磷酸盐缓冲溶液(p H4.5)=40∶60,流速1.0 m L·min-1,检测波长225 nm,柱温20℃。结果双氯西林在64.0~4 096.0 ng·m L^(-1)内线性关系良好(r=0.999 9),定量限为32.0 ng·m L^(-1),回收率为98.8%~100.3%,RSD<1.3%。结论本方法简便、快速、专属性强、灵敏度高,为双氯西林的游离浓度测定提供了一种新的、可靠的分析手段。

中空纤维离心超滤-HPLC法测定盐酸环丙沙星凝胶剂的含量

目的:建立中空纤维离心超滤的样品前处理技术结合HPLC法测定盐酸环丙沙星凝胶剂的含量。方法:采用中空纤维离心超滤技术对凝胶样品进行提取分离,基于中空纤维超滤膜特异性截留大分子原理,有效滤除了样品溶液中的高分子凝胶辅料卡波姆,超滤液直接进色谱分析。采用Promosil C_(18)柱(150×4.60 mm,5μm),流动相为甲醇-水(28∶72,含0.5%的三乙胺,用磷酸调节至pH4.0),检测波长为278 nm。结果:盐酸环丙沙星在2.51~25.1μg·mL-1范围内呈良好的线性关系(r=0.999 7),样品平均回收率为101.0%,RSD小于2%。结论:所建方法简便,快速,定量准确,色谱峰形良好,可用于盐酸环丙沙星凝胶剂的含量测定。

中空纤维离心超滤-HPLC测定硫酸阿托品眼用凝胶的含量

目的建立一种凝胶剂的样品前处理方法,并结合HPLC法测定硫酸阿托品眼用凝胶中硫酸阿托品的含量。方法采用中空纤维离心超滤的前处理手段有效地除去样品溶液中羟丙甲纤维素高分子辅料后,用HPLC法测定含量。采用Phenomenexc C_(18)色谱柱(250 mm×4.60 mm,5μm),流动相为甲醇-50 mmol·L^(-1)磷酸盐缓冲溶液(35∶65,用磷酸调pH3.5),流速1.0 mL·min^(-1),检测波长217 nm。结果 10.4~52.0μg·mL^(-1)硫酸阿托品与峰面积的线性关系良好(r=0.9997),回收率为99.9%~100.6%,RSD<2%,测得硫酸阿托品含量为标示量的99.5%~100.2%。结论所用方法操作简便、结果准确,可用于硫酸阿托品眼用凝胶的含量分析。

中空纤维离心超滤结合高效液相色谱法测定5-氟尿嘧啶的血药浓度

目的:建立简单、快速的中空纤维离心超滤-高效液相色谱法(HFCF-UF-HPLC)测定人血浆中5-氟尿嘧啶血药浓度的方法。方法:将加入少量释放剂的血浆样本经中空纤维离心超滤预处理后,直接取20μL超滤液进行HPLC分析,采用Venusil MP C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:甲醇-0.01 mol·L-1磷酸二氢钾缓冲液(2∶98,V∶V),流速:1.0 mL·min^(-1),检测波长:265 nm。结果:5-氟尿嘧啶在0.05~50.1μg·mL^(-1)的范围内线性关系良好(R^(2)=0.9999),绝对回收率为99.5%~104.2%,RSD<1.8%,检测限为0.03μg·mL^(-1),定量限0.05μg·mL^(-1),室温放置24 h,循环冻融3次和冰冻3个月的稳定性良好。结论:所建立的方法避免了由于疾病所引起的血浆白蛋白水平的变化对其血药浓度测量结果的影响,为临床中5-氟尿嘧啶的血药浓度监测提供了简单、快速、灵敏的样品前处理方法。

用中空纤维离心超滤法联合HPLC-MS/MS测定人血浆中游离型氯氮平的浓度

目的建立一种测定人血浆中游离型氯氮平浓度的HPLC-MS/MS方法,并应用于临床治疗药物监测。方法以氘代氯氮平为内标,用中空纤维离心超滤法对血浆样品进行预处理。色谱柱为Waters Acquity BEN C18(2.1 mm×50.0 mm,1.7μm),流动相为0.1%甲酸水-0.1%甲酸甲醇,梯度洗脱,流速为0.5 mL·min^-1,柱温为50℃,进样量为2μL;用电喷雾离子源正离子模式将样品离子化,多反应监测模式下对氯氮平和内标进行测定。考察该方法的专属性、线性范围与定量下限、精密度与回收率、稳定性。结果氯氮平在1~500 ng·mL^-1内,线性关系良好,线性方程为y=1.30×10^-2x+1.93×10^-2(r=0.998 6),低、中、高浓度的平均回收率为92.21%~95.89%,日内、日间RSD均小于15%。结论本方法简便易行、专属性好、准确度高,可用于临床人血浆中监测游离型氯氮平的浓度。

用HFCF-UF联合HPLC法测定人血浆中伏立康唑的游离浓度

目的建立测定人血浆中伏立康唑游离浓度的高效液相色谱(HPLC)法,并用于临床治疗药物监测(TDM)。方法通过中空纤维离心-超滤(HFCF-UF)法预处理得到血浆中游离伏立康唑后,用HPLC法测定含量。色谱柱:Dia⁃monsil C18柱(250.0 mm×4.6 nm,5μm),柱温:30℃;流动相:水-乙腈=60∶40(v∶v),流速:1.0 mL·min^(-1);波长:254 nm;进样量:20μL。对该方法的专属性、线性关系、定量下限、精密度、回收率和稳定性进行考察,并用于临床血浆样品的测定。结果本研究建立的测定方法专属性良好,血浆中伏立康唑的游离浓度在0.10~10.00μg·mL^(-1)呈线性关系,标准曲线方程为y=28607x-35.93(r=0.9991),定量下限为0.10μg·mL^(-1),绝对回收率和相对回收率分别为95.73%~97.76%和96.64%~102.93%,日内和日间精密度的相对标准偏差均小于10%;血浆样品反复冻融3次或-40℃下保存7 d,处理后样品室温放置6 h稳定性良好。37份血浆样品的伏立康唑游离浓度为0.38~7.18μg·mL^(-1),血浆蛋白结合率为(50.84±14.76)%,游离浓度与总浓度之间有一定的相关性。结论HFCF-UF联合HPLC测定血浆中伏立康唑游离浓度的方法简便准确,适用于临床TDM。

用HFCF-UF联合HPLC法测定血浆中万古霉素游离浓度

目的建立人血浆中万古霉素游离浓度的测定方法,并用于临床治疗药物监测(TDM)。方法采用中空纤维离心超滤(HFCF-UF)分离血浆中的游离万古霉素,HPLC法进行浓度测定。色谱柱:Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm);柱温:30℃;流动相:甲醇-0.05 mol·L^(-1)磷酸二氢钾缓冲液(pH 3.0)=17∶83(v∶v);流速:1.0 mL·min^(-1);检测波长:236 nm;进样量:20μL;内标:去甲万古霉素。考察方法的专属性、线性关系、精密度、回收率、稳定性,并对患者的血浆样本进行测定。结果人血浆中万古霉素游离浓度在0.25~50μg·mL^(-1)呈线性关系,标准曲线方程Y=2.77×10^(-2)X-8.00×10^(-3)(R^(2)=0.9949);日内和日间精密度的RSD值均小于10%,万古霉素的相对回收率和绝对回收率分别为95.10%~101.00%和88.41%~101.20%,内标绝对回收率96.51%;血浆样本反复冻融3次或-40℃下保存7 d,处理后样本室温下放置6 h、12 h稳定性良好。20例患者的万古霉素游离浓度为0.99~38.51μg·mL^(-1),蛋白结合率为15.25%~74.46%。结论本研究所建立的HPLC方法简便易行、准确度高,适用于临床标本中万古霉素游离浓度的测定。

HPLC快速测定血液制品中的保护剂甘氨酸

目的采用HPLC法测定血液制品中保护剂甘氨酸的含量。方法采用N-羟基琥珀酰亚胺苯甲酸酯进行衍生结合中空纤维离心超滤-HPLC法快速测定甘氨酸。采用Angla Innoval C_(18)色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.05%三乙胺磷酸缓冲液(25∶75,pH5.0),流速1 mL·min^(-1),检测波长236 nm,进样量10μL。结果40~140 mg·L^(-1)甘氨酸与峰面积呈良好的线性关系(r^(2)>0.9999);几种血液制品的回收率为98.4%~101.8%,RSD<2%。结论所用方法操作简单、快速,结果准确、可靠,可为血液制品中甘氨酸的快速含量测定提供可靠的分析平台。

Determination of free ceftriaxone concentration and its application in predicting lung tissue concentration

The purpose of this study was to establish a method for determining the free concentration of ceftriaxone based on hollow fiber centrifugal ultrafiltration(HFCF-UF)technology in combination with high-performance liquid chromatography(HPLC)for free pharmacokinetic studies and the prediction of ceftriaxone concentrations in lung tissue.This method only required centrifugation for a short time,and the filtrate could be injected directly for HPLC analysis without further treatment.The specificity,linearity,precision and stability of this method were validated for quantification of free ceftriaxone.Under the optimized conditions,the absolute recoveries were more than 92.5%.The intraday and interday precision RSDs were less than 3.6%.Additionally,nonspecific adsorption(NSB)between the analyte and the ultrafiltration membrane was considered.This method was successfully applied to the analysis of the free ceftriaxone concentration in rat plasma and lung tissue.The free ceftriaxone concentration of lung tissue could be predicted by using the linear formula Cfl=Cfp(0.342 x–0.0129)(x:time).This method also provides a reliable alternative for accurate monitoring of the free ceftriaxone concentration in therapeutic drug monitoring(TDM).