大鼠中缝隐核增强dPAG诱导的vPAG的c－Fos表达及对vPAG神经元放电的影响

本实验通过Ｐｏｓ免疫细胞化学、电生理及微量注射法对中缝隐核（ＮＲＯ）的交感抑制作用的相关途径进行探讨。实验在成巴比妥钠或α－氯醛糖和氨基甲酸乙脂麻醉的Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）大鼠上进行。同时予以ＮＲＯ，中脑导水管周围灰质背侧部（ｄＰＡＧ）方波脉冲串刺激，诱导中脑和延髓的ｃ－Ｆｏｓ表达。刺激ＮＲＯ过程中，基础血压升高（Ｐ＜０．０５），刺激ｄＰＡＧ引起的防御性升压反应则减少（Ｐ＜０．０１）；中脑导水管周围灰质腹侧部（ｖＰＡＧ）、巨细胞旁外侧核（ＰＧＬ）的Ｆｏｓ样免疫阳性反应（ＦＬＩ）细胞计数分别为６６．５±８．３和１０．８±１．５（刺激ＮＲＯ＋ｄＰＡＧ组），较单独刺激ｄＰＡＧ组明显增加，Ｐ值分别小于０．０１和０．００１；单或双脉冲刺激中缝隐核在ｖＰＡＧ可以记录到相关单位，其中８４％为兴奋单位，抑制单位占１６％。双侧ｖＰＡＧ内微量注射利多卡因（每侧２μｇ／０．１μｌ），基础血压无明显变化，而刺激ＮＲＯ引起的降压反应幅度减小（Ｐ＜０．０１），提示，延髓腹外侧区（ＶＬＭ）、ＮＲＯ存在不同功能分化的神经元；ＮＲＯ可能有向ｖＰＡＧ的兴奋性投射，此投射可加强ＮＲＯ的交感抑制效应。

中缝隐核投射至中脑导水管周围灰质腹侧部的递质分析

实验在戊巴比妥钠麻醉大鼠上进行。双侧中脑导水管周围灰质腹侧部（ｖＰＡＧ）微量注射１μｇ／μｌ肾上腺素（每侧０．１μｌ），刺激中缝隐核（ＮＲＯ）引起的降压反应明显增强，但该效应可被ｖＰＡＧ预先注射心得安所阻断，而注射酚妥拉明对上述效应无明显影响；ｖＰＡＧ内单独微量注射１μｇ／μｌ心得安（每侧０．１μｌ），可部分阻断ＮＲＯ降压反应，而注射１μｇ／μｌ酚妥拉明（每侧０．１μｌ）无明显影响；双侧ｖＰＡＧ微量注射１０μｇ／μｌ吗啡或０．１ｍｏｌ／Ｌ５－ＨＴ（每侧０．１μｌ），基础血压无明显变化，ＮＫＯ的降压反应幅度减小（Ｐ＜０．０５）。提示，ＮＫＯ对ｖＰＡＧ的兴奋作用的可能递质为肾上腺素，通过β受体介导；吗啡或５－ＨＴ则可减弱ＮＲＯ对ｖＰＡＧ的兴奋性投射作用。

中缝隐核对兔奥迪氏括约肌肌电活动的影响

实验用电生理学和微量注射法观察了兔中缝隐核（ＮＲＯ）对奥迪氏括约肌肌电活动的影响。动物禁食但自由饮水，１８～２４ｈ后用乌拉坦（１．０ｇ／ｋｇ）静脉麻醉，用双极康铜丝电极引导奥迪氏括约肌肌电。发现ＮＲＯ内微量注射谷氨酸（３４０ｍｍｏｌ／Ｌ，０．１μｌ）ｓ可使奥迪氏括约肌肌电活动加强，与在ＮＲＯ内微量注射生理盐水或者将谷氨酸（３４０ｍｍｏｌ／Ｌ，０．１μｌ）注射到 ＮＲＯ以外的地方相比，具有显著差异（Ｐ＜０．０１）； ＮＲＯ内微巨注射 Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｄ－ａｓｐａｒｔａｔｅ（ＮＭ－ＤＡ）受体阻断剂氯胺酮（１８０ｍｍｏｌ／Ｌ，０．１μｌ），可消除谷氨酸的效应，而将微量非 ＮＭＤＡ受体阻断剂 ＣＮＱＸ（２ｍｍｏｌ／Ｌ，０．１μｌ）注入ＮＲＯ，可使奥迪氏括约肌肌电加强，且不能阻断谷氨酸的作用；将微量ＧＡＢＡ（１ｍｏｌ／Ｌ，０．１μｌ）注射到ＮＲＯ内，可明显抑制奥迪氏括约肌肌电的发生。外周应用Ｍ－受体阻断剂阿托品（０．２ｍｇ／ｋｇ）或双侧颈部迷走神经切断，可阻断微量谷氨酸注射到 ＮＲＯ内所引起的效应；静脉注射α－受体阻断剂酚妥拉明（１．５ ｍｇ／ｋｇ）、心得安（１．５ｍｇ／ｋｇ）或自Ｔ３－４处切断脊髓。

L-精氨酸对持续电刺激中缝隐核膈神经放电的影响

目的:研究L-精氨酸(L-Arginine,L-Arg)对持续电刺激中缝隐核(nucleus raphe obscurus,NRO)时膈神经放电的影响。方法:持续长时电刺激(5 min)成年家兔NRO,以膈神经放电为观察指标来观察其对呼吸的影响;将浓度为0.5、1.0、1.5、2.0mol·L^(-1)的L-Arg微量注射于NRO后,再持续电刺激NRO,观察和比较膈神经放电的变化。结果:持续长时电刺激NRO可导致膈神经放电的长时程增强,L-Arg不能引发膈神经放电的长时程增强,但可使持续刺激NRO时膈神经放电长时程增强的时间延长。结论:NRO对膈运动呼吸神经元的突触可塑性有重要作用,L-Arg参与NRO对呼吸节律的调整,表现为L-Arg可以维持但不能启动膈神经放电的长时程增强。

兔中缝隐核对血压的调节作用及其外周途径

目的 探讨中缝隐核对家兔血压的调节作用及其外周途径。方法 采用中缝隐核内微量注射以及外周受体阻断的方法观察家兔血压的变化。结果 实验发现将微量兴奋性氨基酸谷氨酸钠注射到中缝隐核内可以使基础血压升高 ,而将微量γ 氨基丁酸注射到中缝隐核内却可以降低基础血压。外周应用酚妥拉明或者在脊髓T3～T4节段切断可以阻断微量谷氨酸钠注射到中缝隐核内所引起的升压效应。而外周应用心得安、阿托品或者双侧颈部迷走神经切断却不能阻断微量谷氨酸钠注射到中缝隐核内所引起的升压效应。结论 中缝隐核在生理情况下具有一定的紧张性活动 ,该活动可能在维持血压的稳定方面具有重要作用 ,这一作用的外周途径是通过交感神经及 α

大鼠延髓背角和脊髓背角内PKCγ阳性神经元向中缝隐核的投射

目的研究大鼠延髓背角和脊髓背角浅层内蛋白激酶Cγ亚单位（PKCγ）阳性神经元向中缝隐核（NRO）的投射。方法应用荧光金（FG）逆行追踪和PKCγ免疫荧光组织化学染色相结合的双标记方法,观察大鼠延髓背角和脊髓背角内PKCγ阳性神经元向中缝隐核的投射。结果将FG注入NRO,在延髓背角和脊髓背角的Ⅰ-Ⅲ层内可见FG逆标神经元;PKCγ阳性神经元主要分布于延髓背角和脊髓背角的Ⅱ层内侧部及Ⅱ、Ⅲ层交界处,Ⅰ、Ⅲ层内较少;延髓背角Ⅰ层和脊髓背角Ⅰ-Ⅲ层可观察到FG逆标并呈PKCγ阳性的双标神经元。结论延髓背角和脊髓背角浅层向NRO投射的神经元为PKCγ阳性神经元,其在向NRO传递信息的通路中可能发挥重要作用。

中缝隐核至导水管腹侧部投射途径的儿茶酚胺递质定量分析

研究脑内交感抑制系统中中缝隐核（NRO）至中脑导水管周围灰质腹侧部（VPAG）通路的地茶酚胺递质定量。采用推挽灌流结合高效液相一电化学检测法观察连续电刺激NRO3Omin，vPAG中野上腺素（A）、去甲肾上腺素（NA）释放的变化。结果：刺激NRO10～30min，vPAG灌流液中A含量明显增加（尸＜0．O5）；刺激NRO10～20min，vPAG中NA含量也增加（P＜005）。在上述基础上，于刺激NRO前双侧侧脑室注射5－HT2受体拮抗剂ketanserin（100μg／10μl），给药后电刺激NRO10～3Omin内样品中A、NA含量无明显变化（P＞005），ketanserin阻断了刺激NRO引起的A、NA释放增加的效应。结论：NRO至vPAG投射的递质是ANA；5－HT能神经元参与NRO至vPAG的反馈效应，可能由5－HT2受体参与介导。

中缝隐核至导水管腹侧部途径的儿茶酚胺中间神经元定位分析

研究脑内交感抑制系统中中缝隐核（ＮＲＯ）至中脑导水管周围灰质腹侧部（ｖＰＡＧ）多突触通路的儿茶酚胺中间神经元定位。方法在戊巴比妥钠麻醉的大鼠，应用原位杂交组织化学法检测电刺激激活ＮＲＯ对酪氨酸羟化酶（ＴＨ）ｍＲＮＡ表达的影响，同时采用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）逆行标记与免疫组化双标法以观察投射至ｖＰＡＧ的脑干儿茶酚胺能神经元分布。结果激活ＮＲＯ１８～２０ｈ后引起脑干延髓头端腹外侧区（ｒＶＬＭ）、孤束核（ＮＴＳ）、蓝斑（ＬＣ）、中缝背核的ＴＨｍＲＮＡ的表达增加；ＨＲＰ／ＴＨ双标细胞分布于ｒＶＬＭ（Ｃ１）、ＮＴＳ、ＬＣ、黑质网带、室周灰质等区。结论ＮＲＯ至ｖＰＡＧ途径的肾上腺素、去甲肾上腺素神经元主要位于ｒＶＬＭ的Ｃ１区、ＮＴＳ、ＬＣ。

电和L-谷氨酸钠刺激兔中缝隐核对膈神经放电的影响

实验在45只麻醉、自主呼吸、断双侧颈迷走神经的家兔上进行。电刺激或微量注射L-谷氨酸钠于中缝隐核(Nucleus raphe obscurus,NRO),观察到:(1)长串电脉冲刺激NRO(50—200μA,波宽0.3ms,100Hz,4—6s),出现膈神经放电被抑制的反应,被抑制的程度与刺激强度、刺激频率间存在相关性。(2)吸气期用短串电脉冲(100—200μA,波宽0.3ms,50—100Hz,5—20个脉冲)刺激NRO,可提前终止膈神经放电,产生吸气切断效应。吸气切断时间具有刺激落位和刺激强度依赖性。(3)NRO内微量注射细胞体兴奋剂谷氨酸钠(1mol/L,1μl),注药期间出现膈神经放电抑制,注药后为吸气时程(Ti)缩短和呼气时程(Te)延长。

电刺激大鼠中缝隐核引起减压反应的机理

电刺激大鼠中缝隐核(RO)引起的减压反应,可被双侧延髓头端腹外侧区(RVL)内预先注射赛庚啶或荷包牡丹碱、静脉注射酚妥拉明或甲基阿托品衰减,但心得安(i,v.)无明显效应。结果提示,该反应可能部分通过RO的5-HT能投射纤维作用于RVL内的GABA能中间神经元,抑制RVL-交感兴奋神经元,使交感缩血管神经活动减弱而实现。心迷走中枢兴奋也参与此反应。

5-羟色胺样、P-物质样、脑啡肽样反应阳性神经元胞体在大鼠中缝核簇内的分布

作者对9只200~300g大鼠(7只在处死前24~48h经侧脑室或小脑延髓池注入Colchicine 100~200μg)用PAP法研究了Serotonin(5-HT)样、Substance P(SP)样、Leucine-Enkephalin(Leu-Enk)样和Methionine-Enkephalin(Met-Enk)样反应阳性神经元胞体在大鼠中缝核簇内的分布。上述4种抗血清均为美国INC公司产品。

刺激中脑防御反应区诱导延髓PGL、NRO的c－Fos表达

为从形态学上明确中缝隐核（ＮＲＯ）、巨细胞旁外侧核（ＰＧＬ）与防御反应的关系，并分析为防御性心血管活动激活的ＮＲＯ神经元的性质，本实验采用免疫细胞化学Ｆｏｓ诱导显示ＡＢＣ－ＤＡＢ法及Ｆｏｓ＋５－ＨＴ双标法，分别观察电刺激中脑导水管周围灰质背侧部（ｄＰＡＧ）、改变刺激强度或表达时间诱导的ＮＲＯ、ＰＧＬ的Ｆｏｓ样免疫阳性反应（ＦＬＩ）细胞及刺激ｄＰＡＧ诱导的ＮＲＯ的Ｆｏｓ＋５－ＨＴ双标细胞的分布。实验在戊巴比妥钠麻醉的Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）大鼠上进行。结果显示，刺激ｄＰＡＧ所诱导的ＮＲＯ、ＰＧＬ的ＦＬＩ细胞数均较对照组明显增加（Ｐ＜０．００１），并与刺激电流的强度有一定的依从关系，而刺激后间隔３ｈ灌流的Ｆｏｓ表达程度显著高于间隔１ｈ者；在刺激ｄＰＡＧ诱导中缝隐核Ｆｏｓ表达并在ＡＢＣ－ＤＡＢ法显示的基础上，再以免疫组化法作５－ＨＴ抗体标记，结果ＮＲＯ未见双标细胞，提示ＮＲＯ、ＰＧＬ神经元参与了防御性心血管活动，一定强度的刺激可能导致ＮＲＯ、ＰＧＬ内神经元功能长时程的改变；参与防御性心血管活动的ＮＲＯ神经元可能为非５－ＨＴ神经元。

GAD67-GFP基因敲入小鼠5-羟色胺与γ-氨基丁酸共存神经元在脑内的分布

目的:采用免疫荧光组织染色方法,以GAD67-GFP基因敲入小鼠为实验动物,系统地观察了小鼠脑干内5-羟色胺(5-HT)与γ-氨基丁酸(GABA)的共存情况,为中枢神经系统内5-HT与GABA共存神经元的分布提供形态学证据。方法:应用免疫荧光组织染色技术,对GAD67-GFP基因敲入小鼠脑干内5-HT与GABA免疫荧光双重染色,观察双重标记神经元在5-HT细胞群(B1-B9)中的分布情况并计数。结果:在所有脑干的5-HT细胞群中,双重标记神经元在中缝大核区域内所占的比率最高,平均为10.0%,其次是中缝苍白核和中缝隐核,分别为1.8%和1.4%。中缝桥核与中缝背核所含的共存神经元比例小,仅0.9%和0.3%。而在其他细胞群即B4,B6和B8-9细胞组,未观察到双重标记神经元。结论:在中枢神经系统内,只有部分延髓中线核团的5-HT能神经元同时含有GABA,而中脑中线核团和脑干的其他非中线5-HT细胞群内未见这种共存神经元的存在。