水稻中花11辐射突变体的分离与鉴定

利用伽玛射线对粳稻品种中花 11进行辐照 ,以诱导广泛的形态突变体 ,为水稻功能基因组研究提供基础材料。辐射第 1代单本移栽并实行单株收获 ;辐射第 2代 (M2 )播种 1万个家系 ,自苗期开始至成熟期各个生育阶段从中独立选获各类形态突变体 5 40个 ;经M3 复选获得包括叶、茎、穗和育性变化等各类突变体 431份。统计结果表明 ,形态性状的突变频率为 5 .1%。

拟南芥多效性基因CPR5转化水稻中花11的研究

利用根癌农杆菌介导法将拟南芥多效性基因CPR5转化水稻中花11,同时优化了其再生体系和遗传转化体系。结果表明:相比27℃、暗培养,32℃、持续光照培养可使诱导率提高到100%,且缩短了诱导周期;预分化培养后,在附加5 mg/L 6-BA和1 mg/L NAA的分化培养基上分化率和再生率可分别达到100%和90.50%。同时探索了较高转化频率的条件为A600≈0.05～0.1的农杆菌菌液浸染5 min,共培养时间为3 d,同时添加1张用AAI培养液浸湿的无菌滤纸。对部分转化植株进行PCR、Southern blot和半定量RT-PCR检测,结果表明AtCPR5基因已经整合到水稻基因组中,在所试验的转化植株中均为单拷贝,但表达程度存在差异。

利用CRIS PR/Cas9技术创制水稻中花11号dwarf1突变体

【目的】水稻异源三聚体G蛋白α亚基在植物生长与逆境应答中具有重要的生物学功能,在水稻中花11号品种中创制Gα蛋白编码基因DWARF1(D1)的突变体,为水稻功能基因组学研究提供材料。【方法】在中花11号的D1基因座位上设计靶向其外显子的sgRNA序列,构建CRISPR/Cas9载体,转化中花11号胚愈伤组织,经过抗性愈伤组织筛选和诱导分化后,对再生植株进行鉴定。【结果】筛选到3个含有不同编辑形式的d1突变株系,实时荧光定量PCR分析发现,D1 mRNA水平显著降低,表明无义突变介导的D1 mRNA降解过程亦被触发。在3个d1突变株中进一步鉴定到不含潮霉素抗性基因、不含载体骨架的植株,繁育后可以得到无转基因痕迹、稳定遗传的d1敲除植株。对d1突变株的生长、发育情况进行观察发现,中花11号背景下d1突变株显著变矮、穗明显变小,株高和穗长为中花11号野生型的50%~60%。种子变小及变圆,同时,种子长宽比和千粒重降低约40%。【结论】获得有效移码突变的中花11号背景d1突变株系,为进一步研究G蛋白及其相关基因的功能创制遗传材料。

夏花生高产高效栽培技术

一、播前准备(一)常规整地麦收后及时对麦茬地进行深耕、耙地作业,耕深25cm左右,耙地5遍,达到上虚下实、平整无坷垃的播种标准。进行常规整地可减轻蛴螬对花生的为害。(二)选用优良品种及优质种子麦套花生应选用生育期在110~120d的中早熟品种,如豫花9327、豫花11号、改良海花1号、泛花3号等;夏直播以鲁花15号、徐花14、豫花15号、豫花9327、泛花3号、远杂9102、花育16为主。

根癌农杆菌介导的水稻快速转化方法研究

为了适合于中花11的转化,笔者在愈伤组织预培养时间、浸染时间和凝固剂等方面改进了一种针对日本晴的水稻快速转化方法。将消毒后的中花11成熟种子在含有2.0mg/L 2,4-D的培养基中培养8d,不用继代愈伤组织,用含有GFP报告基因的根癌农杆菌直接浸染诱导的愈伤组织,经3d共培养和14d的筛选培养后,直接用新生的愈伤组织进行再分化,最终在40d内就获得了水稻转基因植株,转化效率和再生效率分别达到了71.3%和57%。从而证明了利用农杆菌直接浸染水稻早期愈伤的快速转化是切实可行的。

水稻OsNAP基因的功能分析及其在育种价值方面的研究

NAC转录因子是植物特异的转录因子.本研究通过从水稻日本晴(Oryza sativa L.)的基因组中克隆到一个与拟南芥衰老相关的基因AtNAP(Atlg69490)的同源基因OsNAP.OsNAP的ORF为1 179bp,推测其编码蛋白含有392个氨基酸,等电点为8.55,分子质量为42.195ku.为进一步研究OsNAP的功能,利用显性抑制元件SRDX构建其pCAMBIA1304-35S:OsNAP-SRDX表达载体,通过农杆菌浸染方法将其转化水稻中花11品种.T1代转基因植株通过潮霉素、RealtimePCR、和Western blot鉴定,筛选出4个OsNAP高表达的阳性植株.在种子成熟期,观察到T1代转基因4号植株较野生型相比有明显的延缓衰老的表型,其他农艺性状如单株分蘖数、单株总粒数、单穗饱和穗粒数、千粒重、结实率等都优于野生型.实验证明抑制OsNAP基因的表达能够延缓水稻叶片衰老并可以提高产量,具有潜在的育种价值.