辣椒来源外泌体样纳米囊泡通过ERK1/2通路拮抗巨噬细胞向泡沫细胞转化

[目的]研究辣椒来源外泌体样纳米囊泡(CDELN)抑制氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导THP-1源性巨噬细胞泡沫化的作用机制。[方法]通过组织破碎、差速/超速离心及蔗糖密度梯度离心等步骤,分离提纯CDELN。利用ox-LDL刺激THP-1源性巨噬细胞24 h建立泡沫细胞模型,并进一步研究CDELN对巨噬细胞泡沫化的作用及其机制。采用激光共聚焦显微镜检测THP-1源性巨噬细胞对CDELN和人DiL标记乙酰化低密度脂蛋白(DiL-ac-LDL)的摄取;采用油红O染色检测细胞内胆固醇含量,通过分析细胞油红O染色阳性面积评估细胞内脂质累积影响;RT-qPCR和Western blot检测清道夫受体A(SRA)、脂肪酸转运蛋白(CD36)、凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)、ATP结合盒转运体A1/G1(ABCA1/G1)以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路p-ERK、p-p38 MAPK和p-c-Jun的mRNA和蛋白表达水平。[结果]CDELN是大小均一、具有双层膜结构、富含蛋白质和核酸的外泌体样纳米囊泡,能被巨噬细胞摄取。DiL-ac-LDL摄取实验提示CDELN可抑制巨噬细胞的胆固醇摄取。油红O染色实验提示CDELN可减轻ox-LDL诱导下的胞内胆固醇蓄积。RT-qPCR及Western blot显示,CDELN能够显著降低ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)、SRA、CD36、LOX-1的mRNA水平,以及降低p-ERK、SRA、CD36、LOX-1蛋白水平。加入p-ERK激动剂Yoda1后,CDELN的保护作用被明显逆转。[结论]CDELN可显著抑制巨噬细胞泡沫化,该作用可能与抑制MAPK通路ERK1/2的磷酸化水平有关。

基于细胞外囊泡阐释中医学理论现代科学内涵和中药治疗机制

细胞外囊泡由各种细胞分泌,携带母细胞来源的RNA、DNA、蛋白质和脂质等信息,介导细胞-细胞间和器官-器官间的信息交流,在疾病发生发展、诊断、治疗及药物靶向递送等领域具有重要价值,同时,也与中医学理论和中药治疗密切相关。气血津液理论和藏象学说是中医学的基本理论,细胞外囊泡属于“津液”范畴,可经血脉到达其他脏腑,干扰脏腑之间的关系,甚至造成脏腑关系失衡,从而引起疾病。中药(包括中成药和中草药)可以调节机体内源性细胞外囊泡的数量及其内容物含量以改善机体的病理状态,同时,中草药来源细胞外囊泡样颗粒是中药治疗疾病的主要药效物质形式之一。此外,细胞外囊泡还可作为载体,递送药物参与精准靶向治疗。探讨中医药与细胞外囊泡的关系可阐明中医学理论的现代科学内涵,并揭示中药发挥治疗作用的机制,发展以中药为基础的工程化细胞外囊泡将为临床治疗提供更多新策略。