从补阳还五汤治疗脑卒中谈中药复方药理学新模式及发展方向

内源性神经干细胞是再生医学重要的治疗靶细胞,以促进干细胞生长和形成新生神经元,用于重建脑卒中及神经退行性疾病的神经功能和修复脑组织。在成年脑组织,内源性神经干细胞具有潜在的生长能力,缺血缺氧可以诱导神经干细胞或前体细胞增殖和分化,但是这种自发的脑修复机制并不能够有效重建功能性神经元,其原因是多方面的,既有新生神经干细胞生存能力的问题,又有微环境多种有害因子影响其生长及生存能力。因此,单靶点治疗策略在促进神经再生和脑修复方面收效甚微。中医药以其多成分和多靶点的治疗策略显示了极大的优势,历代医籍及当代临床为中医药治疗脑卒中及促进神经修复提供了大量研究素材。具有促进干细胞生长的中药单体、提取物及复方中药制剂多有补肾填精、活血化淤及化痰醒神之功效,与中医理论不谋而合。补阳还五汤是中医药治疗中风的代表方剂,本文以经典复方补阳还五汤为例,讨论中医药活性复方的药理学模式,根据补阳还五汤促进神经再生功能及其有效成分研究的最新进展,讨论补阳还五汤促进神经再生功能的作用机制。研究表明:补阳还五汤能调节神经再生过程中的多种信号通路和分子靶点,其作用机制是通过网络调节而达到促进脑修复和神经功能的作用,其复杂的活性成分与效应靶点相互关系值得深入探究。

基于网络药理学和实验验证探讨补肾痹通方治疗膝骨关节炎的作用机制

目的运用网络药理学和实验验证探讨补肾痹通方治疗膝骨关节炎(KOA)的作用机制。方法运用中药系统药理学数据库与分析平台获取补肾痹通方的有效成分与作用靶点,运用GeneCards、OMIM、PharmGkb、TTD、DrugBank数据库检索KOA疾病相关靶点,将药物和疾病靶点取交集,将获得的有效成分及相关靶点导入Cytoscape软件,绘制“补肾痹通方-有效成分-KOA作用靶点”的网络图,筛选关键有效成分,将潜在靶点导入STRING数据库绘制蛋白质-蛋白质相互作用网络图。筛选补肾痹通方治疗KOA的核心靶点,进行GO富集与KEGG注释分析。选取人软骨细胞设置对照组、损伤组、给药组,对照组正常培养,损伤组和给药组在含白细胞介素(IL)-1β(10 ng/ml)DMEM/F12培养基中培养,给药组给予0.4447μg/ml补肾痹通方药液。培养24 h后,观察三组细胞形态,采用酶联免疫吸附试验检测炎症因子水平,qRT-PCR与免疫印迹法检测三组软骨修复因子的表达。结果共筛选出补肾痹通方有效成分186个,主要为槲皮素、木犀草素、山柰酚等,主要通过TNF、MMP1、CXCL2、IL1B等关键靶点和PI3K/Akt、T细胞受体、Toll样受体、低氧诱导因子-1、TNF、IL-17等信号通路发挥作用,涉及氧化应激反应、细胞凋亡、炎症反应等生物过程。显微镜下可见,损伤组细胞数量减少,给药组细胞数量增加。损伤组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β、IL-6水平高于对照组,转化生长因子-β(TGF-β)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、碱性成纤维细胞生长因子(BFGF)水平及SOX9、COL2A1基因和蛋白的表达水平均低于对照组(P<0.05)。给药组TNF-α、IL-1β、IL-6水平低于损伤组,TGF-β、IGF-1、BFGF及SOX9、COL2A1基因和蛋白的表达水平均高于损伤组(P<0.05)。结论补肾痹通方可能通过缓解炎症细胞浸润并参与SOX9、COL2A1调控来促进损伤软骨细胞修复。

中药复方君子汤联合阿霉素逆转白血病K562/VCR细胞多药耐药及诱导凋亡的机制研究

【目的】探讨中药复方君子汤(FFJZ)联合阿霉素(DOX)逆转白血病K562/VCR细胞多药耐药及诱导凋亡的机制。【方法】采用CCK8法检测细胞耐药性及耐药性逆转作用;采用流式细胞术检测细胞总凋亡率和早期凋亡率;采用实时荧光定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)检测多药耐药基因1(MDR1)、P糖蛋白(P-gp)、乳腺癌耐药相关蛋白(BCRP)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的基因表达水平;Western blot法检测Bax、Bcl-2蛋白表达。【结果】CCK-8检测结果显示:无细胞毒性的FFJZ(6 mg/m L)、DOX(5 mg/m L)单独用药可显著降低K562/VCR的半数抑制浓度指数(IC_(50))(P<0.05),两药联合应用对K562/VCR逆转指数显著高于单独应用(P<0.05)。流式细胞术结果显示:作用浓度为4、6 mg/m L的FFJZ联合DOX(5 mg/m L)能够提高K562/VCR细胞总凋亡率和早期凋亡率,与DOX对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果显示:FFJZ联合DOX应用可下调MDR1、BCRP、P-gp m RNA表达,与DOX对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);FFJZ联合DOX应用可上调Bax m RNA、下调Bcl-2 m RNA表达,与DOX对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。Western blot结果显示:FFJZ联合DOX与对照组比较,Bax蛋白表达显著上调(P<0.05),Bcl-2蛋白表达显著下调(P<0.05),与Bax、Bcl-2 m RNA表达一致。【结论】无细胞毒性的FFJZ、DOX对K562/VCR细胞耐药性均有逆转作用,两药联合应用具有明显的协同效应,其机制可能与其上调促凋亡基因Bax和下调抗凋亡基因Bcl-2的表达有关。

中药复方网络药理学及其动力学关键技术问题的探讨

目的:从多成分网络药理学及动力学研究现状探讨中药复方网络药理学及其动力学关键技术问题的研究方法。方法:分析中医药学科与网络药理学科研究的特点,根据中药复方药效物质作用的本源,结合中药现代化的要求,提出中药复方网络药理学研究的总体思路与方法。结果:与单成分有效性研究相比,中药复方的网络药理学问题分静态与动态两种形式,静态是指中药复方入口前的原成分群与某一时间点固定的网络关系,如中药复方采用指纹图谱表达,亦为网络谱效学问题;动态的网络药理学问题是指入口后中药动态代谢后血样中成分群与各时间点的网络药效动力学问题,与指纹图谱结合后者为网络谱效动力学,后者包括前者,因此中药复方网络谱效动力学问题是量-比、量-时、量-效三者的有机统一整体;结论:中药复方的网络药理学的关键而又基础的科学问题是基于网络平衡常数表征的网络谱效动力学参数测算问题。

苦草、肿节风及其复方制剂对■清除率影响的实验研究

目的:研究苦草、肿节风及其复方制剂对O2.-清除率的影响。方法:用水提取中草药苦草、肿节风、玄参及复方制剂万通炎康片、炎肿化毒片,用AP-TEMED系统产生O2.-,分光光度法测定上述药物对O2.-的清除率,并进行对比分析。结果:苦草、肿节风、玄参、万通炎康片、炎肿化毒片水提取液及苦草、肿节风混合液、玄参、肿节风混合液对O2.均有清除作用,苦草和炎肿化毒片对O2.-的清除率明显低于其它各组(P<0.01),不同剂量的万通炎康片水溶液对O2.清除率呈剂量相关性。结论:苦草、肿节风、玄参、万通炎康片体外均有较高的O2.-清除率。

益气养阴活血方药对高糖培养下视网膜神经节细胞生长抑制作用的影响

目的:观察益气养阴活血中药对高糖条件下大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)生长抑制作用的影响。方法:体外培养新生大鼠视网膜神经节细胞,分为正常对照组、正常中药干预组、高糖组及高糖中药干预组。应用CCK-8测定各组RGCs不同培养时间的细胞生长抑制率。结果:高糖对RGCs呈时间依赖性抑制其生长(P<0.01),益气养阴活血中药血清可降低高糖培养下RGCs的生长抑制率(P<0.01)。结论:益气养阴活血中药能在一定程度上减轻高糖对视网膜神经节细胞的生长抑制作用,对高糖条件下RGCs具有保护作用。