中药毛稔对伤口愈合的治疗效果与机制预测

目的探究中药毛稔对伤口的愈合的治疗效果并探讨其潜在的作用机制。方法采取药物水煎法获取中药毛稔原液,按50倍、100倍、200倍、400倍稀释后作用于体外培养的人角质形成细胞HaCaT,研究分为对照(CON)组、实验(M50,M100,M200,M400)组,CCK8法检测细胞活力,划痕模型检验伤口愈合效果;液相色谱-质谱联用分析毛稔的代谢产物并构建药物-疾病-靶点相互作用网络预测中药毛稔干预伤口愈合的机制。结果与CON组相比,M50、M100、M200、M400组HaCaT细胞相对增殖率[(112.59±2.04)%、(119.04±2.15)%、(128.40±1.10)%、(133.72±2.83)%]增加(P<0.05)。M400组划痕愈合率在12 h和24 h[(86.93±4.90)%、(95.13±3.70)%]高于CON组[(36.29±2.97)%、(85.01±2.10)%],差异具有统计学意义(P<0.05)。非靶向代谢组学筛选中药毛稔有效活性成分539个,活性成分作用靶点与伤口愈合相交靶点592个。富集分析结果显示,交集靶点主要参与2655个生物过程,富集于92个细胞组分,主要涉及164个分子功能,并涉及180条信号通路。结论中药毛稔能够促进HaCaT细胞增殖和划痕损伤后愈合,可能通过亚麻酸甘油酯、白桦脂醇、L-色氨酸、桑黄素等活性成分作用于TNF、SRC、TP53等靶点达到治疗创伤的作用,其潜在机制可能与PI3K-Akt等信号通路有关,有望成为治疗创伤的有效药物。

治疗新冠病毒肺炎(COVID-19)中药"药理谱-云"特点与有效性评价要素

本文通过系统总结分析新冠病毒肺炎(COVID-19)发病机制、我国治疗新冠病毒肺炎中药药理作用谱和作用机制。中药药理作用谱体现出的主要药效作用(对COVID-19治疗、抗病毒、抗炎及免疫调节等)、次要药效作用(主要靶器官保护、解热、化痰等)、一般药效作用(镇痛、活血化瘀、抗氧化等),构成了中药抗新冠病毒肺炎药理特有而又复杂的"中药药理谱云学说":即"点(多靶点)-线(多信号通路)-面(药理作用谱)-体(复杂易变的药效云)"。中药有效性评价要充分考虑中药适度调节特点、"药理谱-云作用"整合作用和患者风险收益。本文提出的中药药理"谱云"特点与药效学评价要素,对于建立适合评价治疗新型冠状病毒肺炎中药的动物模型及评价指标,为现有临床用药提供实验室数据和加速中药临床应用转化,推动符合中药特点的技术评价体系完善具有重要意义。

基于网络药理学的合欢花抗抑郁作用机制研究

在对合欢花中的化学成分进行鉴定基础上,采用网络药理学方法预测合欢花抗抑郁的化学成分和作用机制。通过超高液相色谱-高分辨质谱联用技术(UHPLC-HRMS)对合欢花中化学成分进行表征,利用SwissTargetPrediction和Similarityensembleapproach数据库筛选合欢花活性成分的潜在作用靶点,同时利用DisGeNET数据库得到抑郁症相关的靶点,采用jvenn绘制韦恩图得到疾病与药物的共有靶点;通过STRING数据库构建PPI网络并筛选关键靶点,采用DAVID 6.8数据库对关键靶点进行KEGG通路富集分析及基因本体(GO)功能注释。结果表明,合欢花发挥抗抑郁作用主要成分为木犀草素、槲皮素、异鼠李素、腺苷、槲皮素-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖苷、槲皮素-3-O-α-D-吡喃木糖苷、槲皮素-3-O-α-D-呋喃阿拉伯糖苷、山奈酚-3-O-葡萄糖鼠李糖苷、金丝桃苷、槲皮苷,这些活性成分作用于MAPK1、MMP2、PTGS2、TNF、AR、EGFR、AKT1、MMP9、IGF1R核心靶点后通过HIF-1、MAPK、C-type lectin receptor(CLRs)、AGE-RAGE、IL-17及EGFR络氨酸激酶抑制剂抵抗通路中发挥抗抑郁作用。研究结果表明,合欢花抗抑郁作用是通过多成分、多靶点和多通路共同作用的结果,该研究为合欢花抗抑郁活性作用机制深入研究提供参考。

基于UPLC-Q-TOF-MS和网络药理学的柴胡醋制前后抗抑郁质量标志物分析

目的:基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱法(UPLC-Q-TOF-MS)、多元统计分析和网络药理学方法确定生柴胡、醋柴胡抗抑郁作用的质量标志物(Q-Marker)及其作用机制。方法:通过UPLC-Q-TOF-MS获得生柴胡、醋柴胡饮片的化学物质基础,采用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)筛选柴胡醋制前后发生显著变化的成分作为候选Q-Marker,运用网络药理学方法构建柴胡抗抑郁的“疾病-药物-成分-靶点”网络,确定生柴胡、醋柴胡抗抑郁Q-Marker。将大鼠随机分为空白组、模型组、氟西汀组(2.67 mg·kg^(-1))和柴胡总皂苷组(0.72 mg·kg^(-1)),除空白组外,其余各组大鼠均采用慢性温和不可预知性应激法(CUMS)造模,造模开始3周后灌胃给药,各给药组给予相应剂量药物,1次/d,连续4周,空白组及模型组给予10 m L·kg^(-1)生理盐水,于造模前1天、造模21 d和给药28 d对各组大鼠进行体质量称量、糖水偏好实验和旷场实验;于给药28 d后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组大鼠海马组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、叉头框转录因子O3a(Fox O3a)、β-连环蛋白(β-catenin)m RNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠海马组织PI3K、Akt、m TOR、Fox O3a蛋白表达水平。结果:共19种成分在柴胡醋制前后发生明显变化,通过S-plot差异标志物筛选确定柴胡皂苷A、柴胡皂苷B1、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷D等9种成分为柴胡饮片的潜在Q-Marker,结合“疾病-药物-成分-靶点”网络,确定柴胡皂苷A、柴胡皂苷B1、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷D作为生柴胡、醋柴胡抗抑郁的Q-Marker。药效结果显示,给药28 d后,与空白组比较,模型组、氟西汀组和柴胡总皂苷组大鼠的体质量、糖水偏好指数及旷场实验总分均显著降低(P<0.01);与模型组比较,柴胡总皂苷组大鼠的体质量、糖水偏好指数及旷场实验总分均显著增加(P<0.01)。与空白组比较,模型组大鼠海马组织PI3K、Akt、m TOR、β-catenin m RNA表达水平明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05),GSK-3β、Fox O3a m RNA表达水平明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,柴胡总皂苷组大鼠海马PI3K、Akt、m TOR、β-catenin m RNA表达水平明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05),GSK-3β、Fox O3a m RNA表达水平明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。与空白组比较,模型组大鼠海马组织Akt、m TOR蛋白表达水平显著减少(P<0.01),PI3K和Fox O3a的蛋白表达水平显著增加(P<0.01);与模型组比较,柴胡总皂苷组大鼠海马组织Akt蛋白表达水平显著增加,差异具有统计学意义(P<0.01),m TOR表达水平增加,但差异无统计学意义,PI3K和Fox O3a的蛋白表达水平显著减少,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:柴胡醋制前后的化学成分发生较大变化,经物质基础、药效学、网络药理学及信号通路研究确定生柴胡、醋柴胡抗抑郁Q-Marker,为柴胡饮片质量控制、药效物质基础及炮制机制的进一步研究提供参考。

中药谱动学与谱效动力学关联性研究现状及其关键问题解决的对策探讨

安全、有效和可控是药品基本属性,量-时-效关系的阐明为关键科学和技术问题,长期制约中药复方作用模式的解析和药物创制。单成分的药效动力学(pharmacodynamics,PD)与药动学(pharmacokinetics,PK)呈相关性,可用PK的量-时关系代替PD的效-时关系,而中药复方谱动学(polypharmacokinetics,PPK)参数能否代替谱效动力学(polypharmacodynamics,PPD)参数成为研究的难点。通过生物超分子体按“印迹模板”产生“气析”药效和量-时-效定量函数怎样实现可积分的视角,分析中药PPK与PPD研究方法的不足,探讨中药多成分与单成分在量-时-效关系研究方法学上的差异,阐明PK/PD模型仅适用单成分量-时-效关系表达,而中药的PPK/PPD模型必须单独创立的客观必然性,提出中药PPK与PPD关联的成分簇按“印迹模板”整合简化和对不可积分项用幂级数展开积分的关键问题解决对策,为中药复杂体系解析模式研究提供理论依据。

基于UPLC-Q/TOF-MS整合网络药理学的刺五加注射液治疗缺血性脑卒中作用机制研究

目的运用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q/TOF-MS)整合网络药理学研究刺五加注射液治疗缺血性脑卒中的物质基础及潜在作用机制。方法利用UPLC-Q/TOF-MS鉴定刺五加注射液的化学成分,通过Swiss Target Prediction、GeneCards和OMIM数据库预测刺五加注射液治疗缺血性脑卒中的潜在作用靶点,利用String数据库和Cytoscape软件构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,通过Omicshare平台对治疗靶点进行GO和KEGG富集分析,运用Autodock软件进行分子对接。结果分析鉴定了刺五加注射液中53种成分,并以此为基础得到刺五加注射液治疗缺血性脑卒中的相关靶点189个及10个核心靶点,反向筛选发现刺五加注射液中的25个成分可能是治疗缺血性脑卒中的主要有效成分;KEGG富集结果显示,刺五加注射液可能主要通过调节PI3K-Akt信号通路来治疗缺血性脑卒中。结论刺五加注射液治疗缺血性脑卒中的作用机制可能与抑制炎症反应、抗氧化应激、促进血管新生和保护神经细胞等作用有关。

基于中药血清药物化学的桂枝加葛根汤干预流感病毒性肺炎功效组分表征

目的:采用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS)对桂枝加葛根汤(GGT)干预流感病毒性肺炎的功效组分进行表征。方法:雄性BALB/c小鼠12只,随机分为空白组和GGT组(36 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组6只,GGT组连续灌服GGT提取液5d,空白组灌服等量超纯水。给药结束后收集血清及肺组织,应用UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS表征小鼠血清及肺组织中GGT原型及代谢成分。同时存在于小鼠给药血清及肺组织中的GGT成分定义为其功效组分,利用SwissTargetPrediction数据库对功效组分的靶点进行检索,通过GeneCards数据库查询流感病毒性肺炎的靶点,进而取交集得到GGT干预疾病的潜在靶点。通过STRING数据库对潜在靶点进行蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络分析,利用Metascape对潜在靶点进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果:在小鼠含药血清中共检测到GGT原型成分29个,代谢成分28个,其中有11个原型成分和4个代谢成分在小鼠肺组织中被检测到。主要代谢途径包括还原、羟基化、甲基化、葡萄糖醛酸化和硫酸化。PPI网络及KEGG通路富集分析结果显示这些功效组分可能通过作用于白蛋白(ALB)、表皮生长因子受体(EGFR)、类固醇受体辅助活化因子(SRC)、Toll样受体4(TLR4)等靶点及核转录因子-κB(NF-κB)及黏附连接等信号通路发挥作用。结论:同时存在于小鼠含药血清及肺组织中的11个原型成分及4个代谢物可能是GGT干预流感病毒性肺炎的潜在功效组分,并通过干预炎症代谢通路发挥作用,可为GGT治疗流感病毒性肺炎的机制研究提供参考。

中药归经研究的现状及“穴药”法的提出

目的:分析中药归经研究的现状,提出并阐明"穴药"法的中药归经研究法。方法:对中药有效成分群(物)的归经及与经络脏腑功能(象)的互应关系的研究现状进行剖析,找出其不足与解决问题的对策。结果:特定的中药成分群对特定的经络脏腑有选择性的作用,这是中药归经的物质基础,体现"物"性;经络脏腑的功能状态以一定的证候表现出来,体现"象"性,一定功能的经络脏腑对特征中药成分群有反作用,可用于探知和表征经络脏腑,体现"候"性,三者实为"物-象-候"印迹关系。经络脏腑功能状态也可通过针刺特异腧穴改变,而这种改变可以通过中药定量药理学参数表征,据此可建立中药归经研究的"穴药"新方法,也可以探讨中药成分与病证网络靶点的关系,起到一箭双雕的作用。结论:中药与经络脏腑及其功能三者互为"物-象-候"印迹关系,可通过针刺特异性腧穴改变,"穴药"法既是中药归经研究最简捷的方法,也是探知经络脏象重要方法。

强力脑清素片HPLC指纹图谱的建立及质量标志物预测

目的建立强力脑清素片(Qiangli Naoqingsu Tablets,QNT)的HPLC指纹图谱,为其有效质量控制提供参考。方法建立QNT的HPLC指纹图谱,测定采用Agilent C18色谱柱,检测波长为220 nm;流动相为乙腈-水溶液,梯度洗脱。利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统建立强力脑清素片的HPLC指纹图谱,确定共有峰并进行相似度评价;基于指纹图谱共有峰峰面积测定结果,采用聚类分析和主成分分析(PCA)等化学计量学方法对不同批次的强力脑清素片进行质量评价;采用网络药理学筛选和分析QNT相关的作用靶点和通路,构建"成分-靶点-网络"预测QNT中潜在的质量标志物(Q-Marker)。结果 QNP HPLC指纹图谱确认了11个共有峰,指认6个共有峰,分别为刺五加浸膏中紫丁香苷、异嗪皮啶、刺五加苷E;五味子流浸膏中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素。15批QNT片样品相似度均大于0.95,相似度良好;15批QNT聚类为5类;主成分1~5是影响QNP质量评价的主要因子。通过网络药理学筛选出5个活性成分为紫丁香苷、刺五加苷E、异嗪皮啶、五味子醇甲、五味子甲素;32个核心靶点分别为CA14、KIT、KDR、HPY5R、EGFR、MMP13等和13条关键通路为ErbB信号通路、Rap1信号通路、含血清素的神经突触等;基于Q-Marker"五原则"分析预测紫丁香苷、刺五加苷E、异嗪皮啶、五味子甲素、五味子醇甲为潜在的Q-Marker。结论通过指纹图谱和网络药理学分析预测QNT中的Q-Marker,所建立的方法操作便捷、结果准确、重复性好,可用于QNT的质量控制和评价,为全面控制QNT的质量提供依据,为进一步研究QNT的作用机制提供参考。

疏风解毒胶囊二次开发的系统研究

中药大品种二次开发研究是中药创新研究的重要内容,是继承和发展中医药理论,突破制约中医药理论和中药产业发展瓶颈的重要路径。以疏风解毒胶囊为研究对象,进行了系统的二次开发研究,通过药材、成品以及口服入血成分的辨识和表征,阐释了疏风解毒胶囊的化学物质组,进一步通过UPLC-Q/TOF-MS整合核转录因子-κB(NF-κB)双荧光素酶报告基因系统、G-蛋白偶联受体结合实验以及网络药理学分析和谱-效筛选方法,筛选和明确了主要药效物质基础;基于传统功效,以整体动物模型、基因组学等方法,从抗炎免疫、解热等方面阐释其作用机制,并阐明主要成分的药动学及组织分布规律,阐释了疏风解毒胶囊的作用机制;通过拆方研究并与同类中药以及化学药比较,阐释了该药的组方特点和配伍规律,提炼和发现了其作用特点、比较优势和临床核心价值;通过多批样品、多指标成分的含量测定以及指纹图谱共有模式的建立等方面进行系统研究,建立疏风解毒胶囊的药材与成品的质量控制体系,对原有的质量标准进行了全面提升,保证了产品的质量均一、稳定、可控。为该品种的临床推广应用和指导临床实践提供了重要的理论和实验依据,并为其他中药大品种的二次开发研究提供了可参考的思路与模式。