中间丝聚合蛋白在特应性皮炎患者皮损中的表达

目的:探讨中间丝聚合蛋白(Filaggrin,FLG)在特应性皮炎(Atopic dermatitis,AD)患者皮损的表达及其临床意义。方法:采用SP免疫组化方法检测16例AD患者皮损及14例对照组皮肤组织内FLG的表达,用图像分析软件Image-Pro Plus(IPP)判定FLG在AD患者皮损及健康者皮肤组织中阳性染色面积百分比。结果:FLG在AD患者皮损及健康者皮肤角质层及颗粒层均有表达,胞质染色多见;阳性染色面积百分比分别为(18.92±4.40)%及(23.00±2.28)%;FLG在AD患者皮损阳性染色面积明显低于健康人皮肤(t=-3.11,P=0.004)。结论:FLG在AD患者皮损中表达降低,可能是导致AD患者皮肤屏障功能障碍的原因。

南方汉族人特应性皮炎中间丝聚合蛋白基因多态性检测与分析

目的探讨中间丝聚合蛋白（filaggrin，FLG）基因多态性与南方汉族人特应性皮炎（atopic dermatitis，AD）的相关性。方法提取50例南方汉族AD患者及100名健康对照者的基因组DNA，采用PCR及直接测序法，对FLG基因已报道的13个单核苷酸多态性（3321delA、441delA、1249insG、E1795X、S3296X、R501X、2282de14、R2447X、S2889X、7945delA、3702delG、Q2417X、R4307X）进行测序。结果14例（28oA）AD患者检测到FLG3321delA多态性位点，6例（12％）AD患者检测到FLG441delA多态性位点，健康对照组无1例检测到该多态性位点。患者组及对照组均未检测到FLG（1249insG、E1795X、S3296X、R501X、2282del4、R2447X、S2889X、7945delA、3702delG、Q2417X、R4307X）基因多态性。结论FLG基因可能与南方汉族人群AD易感性相关。

寻常型鱼鳞病患者皮损中间丝聚合蛋白及其基因的改变

目的探讨寻常型鱼鳞病患者中间丝聚合蛋白（FLG）基因突变与FLG及兜甲蛋白在寻常型鱼鳞病患者皮损组织中的表达及其临床意义。方法采用sP免疫组化方法检测10例汉族寻常型鱼鳞病患者皮损及14例健康对照皮肤组织内FLG及兜甲蛋白的表达，用图像分析软件ImagePro plus（IPP）判定FLG及兜甲蛋白在寻常型鱼鳞病患者皮损及正常皮肤组织中表达的阳性单位（PU值）。提取10例汉族寻常型鱼鳞病患者及100例健康对照者的基因组DNA，采用PCR及直接测序法，对FLG基因已报道的13个突变位点（3321delA、441delA、1249insG、E1795X、S3296X、R501X、2282del4、R2447X、S2889X、7945delA、3702delG、Q2417X、R4307X，进行测序。结果FLG在寻常型鱼鳞病皮损及健康对照皮肤角质层、颗粒层、棘层及基底层细胞均有表达，胞质染色多见；寻常型鱼鳞病皮损阳性染色PU值明显低于健康对照皮肤（分别为0．2082±0．0080和0．2300±0．0228，两组比较，t=3．30，P〈0．01）。兜甲蛋白在寻常型鱼鳞病皮损及健康对照皮肤颗粒层、棘层及基底层细胞均有表达，胞质及胞核染色多见；寻常型鱼鳞病皮损表达的PU值明显低于健康对照皮肤（分别为0．1370±0．0112和0．1493±0．0073，两组比较，t=3．07，P〈0．01）。7例寻常型鱼鳞病患者检测到FLG 3321delA突变位点，2例检测到FLG 441delA突变位点，健康对照组未检测到FLG基因突变位点。结论FLG（3321delA，441delA）可能是汉族寻常型鱼鳞病患者的突变位点之一。FLG及兜甲蛋白表达下降可能与寻常型鱼鳞病患者皮肤屏障功能障碍有关。

中间丝聚合蛋白基因多态性与特应性皮炎发病及临床表型的相关性

目的 探讨中间丝聚合蛋白（FLG）基因多态性与特应性皮炎（AD）发病及临床表型的相关性。方法 采用问卷调查的形式收集261例AD患者伴发过敏性鼻炎、哮喘病史和疾病严重度评分等资料，对部分患者进行混合食物过敏原和混合吸入性过敏原筛选、血清总IgE抗体和嗜酸性粒细胞阳离子蛋白水平检测。采用重叠PCR和DNA测序法对上述AD患者和276例健康对照FLG基因3号外显子17个多态性位点（R444G、T454A、P478S、H519N、D836D、S1482Y、A1805V、R1891Q、1961Q、S2166S、Y2194H、H2330H、D2339N、S2366T、E2398Q、K2444E、E2652D）进行基因分型。结果 二项逻辑回归分析和卡方检验未发现17种FLG多态位点与AD发病相关（均P 〉 0.05）。H519N与AD伴发哮喘相关（χ2 = 8.680，P = 0.011），AA基因型可增加AD患者发生哮喘的风险（P = 0.004，OR = 1.061， 95% CI 1.016-1.109）。S2366T和K2444E与AD患者食物敏感相关（χ2值分别为6.520和6.121，P值分别为0.038和0.047），S2366T的GG ＋ GC基因型（P = 0.012，OR = 1.396， 95% CI 1.054-1.849）和G等位基因（P = 0.037，OR = 1.350， 95% CI 1.008-1.807）可提高AD患者食物敏感的风险。K2444E的AA ＋ AG基因型（P = 0.013，OR = 1.393， 95% CI 1.049-1.850）和G等位基因（P = 0.028，OR = 1.380， 95% CI 1.025-1.857）可提高AD患者食物敏感的风险。结论 中国汉族人群 FLG基因多态性可能是一些 AD相关临床表型的危险因素，H519N可能与AD伴发哮喘相关，S2366T和K2444E则可能与AD伴食物敏感相关。

儿童特应性皮炎皮肤屏障功能相关蛋白表达情况

目的:了解特应性皮炎患儿皮肤屏障功能相关蛋白的表达情况。方法:应用免疫组化方法检测特应性皮炎患儿和正常儿童的中间丝聚合蛋白、内披蛋白、兜甲蛋白等皮肤屏障功能相关蛋白(表皮终端分化蛋白)的表达差异,采用染色强度(0~5分)反映相关蛋白的表达水平。结果:正常儿童皮肤的中间丝聚合蛋白、内披蛋白、兜甲蛋白的染色强度分别为(4.49±0.14)分、(4.39±0.14)分、(4.56±0.15)分,特应性皮炎患儿受累部分皮肤分别为(2.19±0.17)分、(2.29±0.11)分、(1.89±0.22)分,两组比较差异均有统计学意义(P均<0.01)。特应性皮炎患儿和正常儿童的中间丝聚合蛋白、兜甲蛋白均主要表达于颗粒层,正常儿童内披蛋白主要表达于棘细胞上层和颗粒层,特应性皮炎患儿内披蛋白主要表达于棘细胞上层。结论:特应性皮炎患儿皮肤屏障功能相关蛋白表达下降,提示存在皮肤屏障功能障碍。

角蛋白裂解法治疗亚临床阶段人乳头瘤病毒感染的临床试验研究

目的探讨角蛋白裂解法治疗亚临床阶段人乳头瘤病毒感染的临床效果。方法自行配置药物治疗亚临床阶段人乳头瘤病毒感染尖锐湿疣患者31例,涂擦整个外阴表皮和肛周表皮,每周记录皮损情况,并记录是否有病理复发情况。同时在皮肤的第二个增殖周期是做HPV-DNA-PCR检查,并记录检查的结果。结果 31例患者在用药过程中,在一个皮肤增殖周期内有约20例复发,在第一个皮肤增殖周期中未见有疣体长出皮肤表面。HPV-DNA-PCR、阴性率为35.5%。第二个周期是为74.2%。第三个周期时为80.6%。仍然约有20%的病理查出HPV-DNA阳性,但是未见有疣体长出。在检验出的DNA分型中其中HPV6型阳性率最高,HPV6,HPV11,HPV42,HPV18,HPV52,HPV56这六种DNA分型出现约95%的概率。结论本法治疗亚临床阶段人乳头瘤病毒感染效果良好,副作用小。

FLG、分泌型卷曲相关蛋白1、转化生长因子β1在口腔黏膜下纤维化患者中的表达

目的 探讨丝聚蛋白(filaggrin, FLG)、分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled-related protein-1,SFRP1)、转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)在口腔黏膜下纤维化(oral submucous fibrosis,OSF)患者中的表达。方法 选取OSF患者70例,依据病理学分为OSF早期组、中期组、晚期组,另选取同时段健康人群27例,作为正常组。对四组研究对象FLG、SFRP1、TGF-β1表达水平进行检测,使用免疫组化SP法检测FLG水平;使用酶联免疫吸附法检测SFRP1水平;使用地高辛标记TGF-β1 DNA探针检测TGF-β1表达水平。分析上述指标在OSF中的相关性。对分析中具有统计学意义的指标进行多指标Logistics回归分析。结果OSF早期组患者FLG水平高于正常组,OSF中期组患者FLG水平高于正常组、OSF早期组,OSF晚期组患者FLG水平高于其他三组(P<0.05)。OSF早期组患者SFRP1表达高于正常组,OSF中期组患者SFRP1表达高于正常组、OSF早期组,OSF晚期组患者SFRP1表达高于其他三组(P <0.05)。OSF早期组患者TGF-β1水平高于正常组,OSF中期组患者TGF-β1水平高于正常组、OSF早期组,OSF晚期组患者TGF-β1水平高于其他三组(P<0.05)。FLG、分泌型卷曲相关蛋白1、转化生长因子β1之间呈正相关。FLG、分泌型卷曲相关蛋白1、转化生长因子β1水平与OSF严重程度具有相关性。结论 FLG、SFRP1、TGF-β1在OSF患者中均呈异常高表达,并且具有一定的相关性。对FLG、分泌型卷曲相关蛋白1、转化生长因子β1指标进行检测,对OSF严重程度的临床诊断具有一定帮助。

皮肤屏障关键结构与特应性皮炎的相关性

特应性皮炎是一种皮肤慢性炎症性疾病,其发病机制尚不清楚,与遗传、免疫等因素相关。近年的研究发现皮肤屏障结构和功能的异常可能是特应性皮炎发病的首要机制。皮肤屏障中的关键结构和成分如角化包膜、中间丝聚合蛋白、蛋白酶及其抑制剂、脂质等的形成障碍或代谢失调,使表皮屏障功能受损,增加特应性皮炎发病的风险。编码FLG相关基因的无效突变目前被认为是特应性皮炎发病的主要因素,而角化包膜的缺陷、蛋白酶活性的增加及脂质层合成的减少加重了皮肤屏障的损害。同时临床研究表明,对皮肤屏障的修复可以降低特应性皮炎的发病率及复发率。

寻常型鱼鳞病一家系Filaggrin基因突变分析

目的对寻常型鱼鳞病(ichthyosis vulgaris,IV)一家系中间丝聚合蛋白(Filaggrin,FLG)基因中可能出现的突变进行检测。方法提取IV家系成员和100份无亲缘关系正常人外周血基因组DNA,采用聚合酶链反应法(PCR)及直接测序法,对FLG基因已报道的13个突变位点(3321delA、1249insG、441delA、S3296X、E1795X、R501X、R2447X、2282del4、S2889X、3702delG、7945delA、R4307X、Q2417X)进行测序。结果 2代4位成员中2例IV患者同时检测到FLG(3321delA)基因突变。家系中正常人及无亲缘关系对照均未发现突变。结论家系中存在FLG(3321delA)基因突变,导致编码蛋白的结构和功能发生改变。

急性湿疹大鼠皮肤屏障功能变化及机制

目的探讨急性湿疹大鼠皮肤屏障功能的变化及机制。方法选择SD大鼠20只,随机分为正常组、模型组各10只。除正常组外,模型组采用二硝基氯苯(DNCB)在右背部皮肤建立急性湿疹模型。造模成功后,取大鼠右背部皮肤,采用HE染色法观察炎细胞浸润情况;采用皮肤表皮水分丧失测定仪测定经皮水分丢失量(TEWL);采用免疫组化法观察蛋白酶激活受体2(PAR-2)蛋白表达;采用RT-PCR法测定皮肤人类中间丝聚合蛋白(FLG) mRNA表达。结果模型组大鼠出现明显急性湿疹症状,皮肤TEWL、PAR-2含量增加,FLG mRNA表达降低(P均<0. 01)。结论急性湿疹的发生可能是通过降低FLG基因表达,增加PAR-2含量,增加TEWL,从而破坏皮肤屏障功能、诱发急性湿疹。

大翅蓟属植物提取物对皮肤屏障功能损伤的修复作用探讨

目的观察大翅蓟属植物提取物对皮肤屏障相关蛋白的表达的影响,探讨其屏障修复作用。方法通过使用胶带黏贴的方法,对离体培养的皮肤造成皮肤屏障功能损伤模型,每隔2 d涂抹大翅蓟属植物提取物,7 d后评估损伤皮肤的淋巴上皮Kazal型相关抑制因子(Lympho-epithelial Kazal type related inhibitor,LEKTI),兜甲蛋白(Loricrin,LOR),内披蛋白(Involucrin,INV)丝聚合蛋白(Filaggrin,FLG)的表达情况。结果正常皮肤和受损皮肤的LEKTI,LOR,INV,FLG染色均有增强,受损皮肤增强更为明显。结论大翅蓟属植物提取物可以提高皮肤FLG、LOR、INV、LEKTI的表达,进而提高皮肤屏障功能。

FLG基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

目的构建人类中间丝聚合蛋白(filaggrin,FLG)基因慢病毒载体及观察慢病毒表达载体介导的RNA干扰RNAi对人HaCat细胞FLG表达的影响。方法应用基因工程技术筛选出3条针对FLG基因的RNAi靶序列,分别与GV115载体连接,构建3个重组慢病毒表达载体FLG-vshRNA 10154,FLG-vshRNA 10155,FLG-vshRNA 10156;将连接产物转化到DH5α感受态细胞,经PCR筛选阳性克隆、测序鉴定,将FLG-vshRNA,pHelper 1.0,pHelper 2.0共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度,将包装产生的3种重组慢病毒分别感染HaCat细胞,实时定量PCR检测HaCat细胞FLG mRNA表达。根据筛选的结果,选取最有效的载体进行病毒的大量包装。结果慢病毒载体PCR和测序结果表明3对碱基成功插入到预计位点,序列完全一致。慢病毒载体感染HaCat细胞后,FLG基因mRNA的表达量与未感染慢病毒的细胞组及空载体感染组相比均明显下降,下降程度达70%以上(P<0.05)。3个慢病毒载体经包装产生的病毒滴度分别为1.2×109,1.5×109,1×109TU/mL。结论成功构建针对FLG基因的3个慢病毒载体FLG-vshRNA,体外感染HaCat细胞后可有效抑制FLG基因的表达。

三黄洗剂改善特应性皮炎小鼠模型皮肤屏障的机制探讨

目的探讨三黄洗剂改善特应性皮炎(AD)小鼠模型皮肤屏障可能的作用机制。方法取60只小鼠随机分为对照组、模型组、复方地塞米松软膏组、三黄洗剂低剂量组、中剂量组、高剂量组,涂抹2,4-二硝基氯苯丙酮溶液造模。每天涂抹给药2周后,采用免疫组化法检测中间丝聚合蛋白(FLG)、水通道蛋白3(AQP3)和角蛋白17(K17)的表达,称量皮肤湿重、干重,计算失重比。结果模型组、三黄洗剂低、中、高剂量组以及复方地塞米松乳膏组皮肤失重比比正常对照组增加且差异有统计学意义(P<0.01)。模型组FLG的表达明显低于正常对照组,三黄洗剂低、中、高剂量组和复方地塞米松乳膏组FLG表达量高于模型组。而模型组AQP3、K17的表达均明显高于正常对照组,三黄洗剂低、中、高剂量组和复方地塞米松乳膏组AQP3、K17表达量均低于模型组。结论三黄洗剂治疗AD小鼠后能减轻炎性水肿,提高FLG含量,降低AQP3、K17的表达,可证明其能促进皮肤屏障的修复。

特应性皮炎的遗传学基础与皮肤屏障障碍

遗传学因素是特应性皮炎的重要发病因素。已发现的特应性皮炎易感基因主要分为参与天然免疫及适应性免疫的因子、以及调节角质形成细胞终末分化的蛋白等两类。编码中间丝聚合蛋白(filaggrin)基因是特应性皮炎最强的遗传易感基因并成为关注的焦点,但该基因突变并不是特应性皮炎发生的必要条件。皮肤屏障功能障碍这一特应性皮炎的重要特征,不仅与基因相关的皮肤屏障先天缺陷密切相关,也是皮肤异常免疫所致的结果,两者交互作用共同推进特应性皮炎的进程。

特应性皮炎皮肤屏障破坏相关基因突变研究进展

特应性皮炎是一种慢性、复发性、炎症性、瘙痒性皮肤病,发病率逐年增长。其发病机制是多因素的,涉及复杂的环境和遗传因素之间相互作用,最终导致表皮屏障破坏和免疫系统功能的紊乱,其中皮肤屏障结构和功能的异常在特应性皮炎的发病中占重要地位。本文主要就引起特应性皮炎皮肤屏障破坏与基因突变的相关性进行阐述。

马齿苋提取液对急性湿疹大鼠皮肤屏障功能的调控作用

目的探讨马齿苋提取液对皮肤屏障功能的调控作用及其治疗急性湿疹大鼠的可能作用机制。方法 SD大鼠30只,分为正常组、模型组、马齿苋组,各10只。采用二硝基氯苯(DNCB)建立急性湿疹模型,正常组除外。造模成功后,各组分别给予相应药物。用药后,采用皮肤表皮水分丧失测定仪测定各实验组大鼠经皮水分丢失量(TEWL);免疫组织化学法(SP法)染色蛋白酶激活受体2(PAR-2),并采用病理图像分析系统半定量检测其水平;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定皮肤人类中间丝聚合蛋白(FLG)基因表达。结果用药后,马齿苋组急性湿疹症状减轻,大鼠皮肤TEWL(3.25±0.47)g·h^(-1)·m^(-2)、PAR-2(0.154 1±0.006 8)μm^2,较模型组显著减少(P<0.05);FLG基因表达值为4.34±1.21,较模型组显著增高(P<0.05)。结论马齿苋治疗急性湿疹的机制之一可能是通过增加FLG基因表达,降低PAR-2水平,减少TEWL,恢复皮肤屏障功能。

Filaggrin基因在鼻息肉中突变的研究

目的:探讨中间丝聚合蛋白(FLG)基因突变与鼻息肉的关系。方法:提取48例病例组的鼻息肉组织和30例对照组下鼻甲黏膜的DNA,先用聚合酶链反应扩增目的基因R501X3321delA,再用聚丙烯凝胶电泳进行检测,最后采用直接测序法进行测序。结果:鼻息肉组织中有2例(4.17%)出现FLG基因突变位点c.3321delA,均为杂合突变,对照组无此突变,同时发现FLG新的突变位点c.1711C>A碱基序列由CAC→AAC,病例组出现12例(25.00%),2例(4.17%)是纯合突变,对照组仅1例(3.33%)是纯合突变,鼻息肉与正常黏膜比较,c.1711C>A的基因突变率的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:FLG基因突变可能与鼻息肉发生、发展有关,有可能是鼻息肉发生原因之一。