视网膜脱离时神经生长因子对Mǖller细胞中间丝蛋白表达的影响

目的研究实验性视网膜脱离(RD)时外源性神经生长因子(NGF)对M櫣ller细胞功能的影响作用。方法29只SD大鼠建立RD模型,并分为NGF实验组、空白、单纯RD、正常对照共4组。在建立RD模型后观察1.5、3、6h,1/2、1、2、4、8、16、32d。NGF实验组在建立模型后每4d在玻璃体腔内注射NGF5μg/5μL/次,空白对照组注射空白载体作为对照。采用免疫组织化学方法对M櫣ller细胞的GFAP和vimentin进行标记。非参数统计方法分析。结果单纯RD组显示随脱离时间延长,二者在M櫣ller细胞的表达强度逐渐增强,分布范围变广。NGF实验组显示M櫣ller细胞内的二者表达强度低于对照组,差异有显著性(P<0.05)。结论外源性NGF能抑制RD后M櫣ller细胞过度表达GFAP和vimentin,防止M櫣ller细胞过度反应。

神经中间丝蛋白Nestin在胎肝中的表达

目的采用免疫组织化学方法标记不同发育时期人胚胎肝干细胞中巢蛋白(Nestin)的表达,探讨肝干细胞新的表面标志蛋白。方法取材不同发育时期胎儿肝脏,固定并制成石蜡切片,ABC法标记神经前体细胞的特异性表面标记Nestin在胎肝干细胞中的表达。结果汇管区周边界板处卵圆样干细胞表达Nestin阳性,Nestin阳性细胞呈单层紧密排列成管,呈鞘样包绕着早期汇管区,部分包绕着初级汇管区,随着次级汇管区的成熟,Nestin阳性卵圆样干细胞逐渐局限于赫令管周围;此外胚胎发育不同时期可见Nestin阳性单个核样细胞散布在肝实质内。结论肝脏内有Nestin表达阳性的干细胞存在,其功能、来源需要进一步深入研究。

补充活性肽对大鼠运动后骨骼肌中间丝蛋白免疫染色的影响

目的:观察补充活性肽对大鼠骨骼肌细胞结蛋白和波形蛋白免疫染色和血清酶活性的影响,研究活性肽对运动性骨骼肌微结构损伤的保护作用。方法:雄性SD大鼠100只,依分别补充安慰剂和活性肽,运动与不运动,以及运动后0h、12h、24h和48h等不同时间随机分为10组,所有动物膳食平衡1周后,进行实验。运动组大鼠以(20±1)m/min的速度,坡度为-16,°持续性跑台训练120min。实验组和对照组所有动物在膳食平衡期间每天分别进行灌胃15%活性肽饮料2mL和等量的安慰剂。结果:补充活性肽可减轻大鼠离心运动后骨骼肌结蛋白免疫染色的丢失,增强波形蛋白的免疫染色,明显减少血清酶CK、LDH的漏出。

子宫内膜和腺肌病中间丝蛋白及肌动蛋白的免疫组化表达

目的:比较子宫内膜及腺肌病腺上皮和间质的分化能力与分化方向。方法:用免疫组化ABC法检测20份不同生殖周期子宫内膜和腺肌病组织标本的角蛋白、波形蛋白、结蛋白及肌动蛋白α亚单位的表达情况。结果:腺肌病与子宫内膜腺上皮具有相似的角蛋白表达率,达70%～90%,不受腺体分泌状态的影响;腺上皮波形蛋白表达率为80%～90%,在分泌期下降到60%(P<0.05),且主要局限于基底层和表面上皮;主要表达波形蛋白间质细胞,在腺肌病为80%,显著高于子宫内膜的35%(P)<0.01)。此外,间质细胞有5%～15%可以表达角蛋白、结蛋白和肌动蛋白。结论:腺肌病中腺上皮在分化上相当于子宫内膜基底层和表面上皮性质,波形蛋白的高度表达是内膜样分化的标记。间质细胞具有多向分化潜能,对腺上皮的发生和腺肌病的形成有作用。

中间丝蛋白的研究进展

本文概述中间丝蛋白的类别、分布、组成、基因及其表达特点、功能 ,探讨中间丝蛋白改变与人类疾病的关系 。

三种新的神经特异性中间丝蛋白

中间丝家族的成员较多且在不断增加。从分子生物学角度可分为五类:Ⅰ类是酸性角蛋白(Acidic keratins,K1),Ⅱ类是碱性角蛋白(Basic keratins,K2),Ⅲ类包括结蛋白(Desmin,Des)、胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic prot-ein,GFAP)、波形蛋白(Vimentin,

第Ⅵ类中间丝蛋白—Nestin

Nestin最早发现于神经上皮干细胞,在肌肉和牙齿组织中也有表达。Nestin在中枢神经系统(central nervous system,CNS)中特异表达于神经前体细胞,其mRNA的减少与神经发育中千细胞的减少相平行,而且在神经系统病变和损伤的组织中有Nestin表达,表明Nestin可以作为研究神经系统发育的一个手段,对神经系统疾病的诊断也有一定的参考价值。

大鼠发育中睾丸支持细胞中间丝蛋白的研究

对胎龄１７天到生后４０天的大鼠睾丸支持细胞的细胞角蛋白和波蛋白进行了免疫组化观察。结果表明：胎龄１７天至出生，睾丸支持细胞的核下区波蛋白和细胞角蛋白皆呈阳性反应。纵隔处的睾丸索（将发育成直细精管和睾丸网）的细胞角蛋白反应明显增强，而波蛋白反应弱。随着发育，在将成为曲细精管的睾丸索，细胞角蛋白反应减弱，生后大多数支持细胞呈角蛋白阴性，而波蛋白的表达逐渐增强。但是确有少数支持细胞仍呈细胞角蛋白阳性。

中间丝蛋白与特应性皮炎皮肤屏障功能

特应性皮炎的病因复杂，发病机制尚未明确，可能是遗传、环境、皮肤屏障功能缺陷及免疫相互作用的结果。中间丝蛋白基因是表皮分化复合物基因簇的成员之一，与细胞膜形成及表皮终末分化密切相关。中间丝蛋白基因突变是特应性皮炎发病的重要易患因素之一，中间丝蛋白的减少和缺失，可能是引起特应性皮炎等干燥性皮肤病的主要原因。

阿霉素化疗和槲皮素对大鼠肾脏中间丝蛋白表达及肾脏炎症反应的影响

为了揭示阿霉素化疗和槲皮素给药对大鼠肾脏中间丝蛋白的表达及肾脏炎症反应的影响,并探讨槲皮素对阿霉素诱导的肾毒性的预防作用。将50只雄性SD大鼠分为5组（每组10只）：对照组、阿霉素处理组（剂量为20 mg/kg bw）、槲皮素治疗组（剂量为50 mg/kg bw）、槲皮素＋阿霉素组和阿霉素＋槲皮素组,测量各组大鼠生化参数和肾功能。此外,对肾组织炎症标记物进行评估,并采用实时定量PCR分析中间丝蛋白mRNA表达情况。结果显示,阿霉素治疗前和治疗中应用槲皮素治疗,可有效减缓由阿霉素诱导的肾毒性,并显著改善肾功能。槲皮素通过调节中间丝蛋白mRNA的表达来抑制炎症反应并保护足细胞免受损伤。因此,槲皮素除了具有治疗作用之外,还可以作为预防剂在临床化疗中抑制阿霉素诱导的肾毒性。

石磺中间丝蛋白基因的组织表达及环境适应性分析

中间丝蛋白是组成细胞骨架的3种主要成分之一,在维持细胞正常形态和细胞内物质定向转运等方面发挥重要作用。为探究中间丝蛋白在瘤背石磺形变能力和损伤后修复过程中是否发挥相应作用,通过运用RACE法克隆获得瘤背石磺(Onchidium reevesii)中间丝蛋白基因的cDNA全长序列,并对其进行生物信息学分析和RT-qRCR试验。结果显示,瘤背石磺(Onchidium reevesii)中间丝蛋白基因序列全长为1957 bp,序列分析表明,Os-IF1可以编码452个氨基酸,ORF总长度为1359 bp,两端非编码区域长度分别是376 bp(5’端)和220 bp(3’端);根据理论分子量(51.54 kD)和等电点(5.21)数据显示其是一个偏酸性的蛋白质;二级结构和三级结构预测结果均显示在多肽链的中间位置存在非常保守的α螺旋结构域,完全符合中间丝蛋白家族的哑铃状构型。荧光定量PCR分析结果表明,该基因广泛分布在石磺各组织中;通过人为损伤4种石磺背部组织,比较了4种石磺不同组织中该基因的表达差异,试验结果表明该基因在4种石磺表皮损伤修复过程中也发挥一定的作用。本研究以期为进一步探究瘤背石磺运动及环境适应性提供基础数据,并为探讨无脊椎动物皮肤组织从水生到陆生环境的适应机制提供有价值的分子依据。

体外周期性单轴压应力作用下大鼠髁突软骨细胞肌动蛋白和中间丝波形蛋白的早期变化研究

目的探讨体外周期性单轴压应力对大鼠髁突软骨细胞细胞骨架蛋白肌动蛋白(Actin)和中间丝波形蛋白(Vimentin)的早期影响。方法利用四点弯曲加力装置对第3代大鼠髁突软骨细胞进行周期性单轴压应力加载,力值为4000μstrain,时间为15、30、60、120、240min。同时设有不加力的对照组。采用免疫荧光技术和Westernblot免疫印迹技术研究大鼠髁突软骨细胞在周期性单轴压应力作用下Actin和Vimentin的早期动态变化。结果在4000μstrain压应力作用下,细胞骨架荧光逐渐下调,60min表达最低,但120min后细胞骨架的荧光表达逐渐恢复。Vimentin蛋白表达水平在30min开始下降,Actin蛋白表达在60min明显下调,几乎消失;但120min后两种蛋白表达水平开始迅速回升。结论4000μstrain压应力刺激对大鼠髁突软骨细胞Actin、Vimentin蛋白的表达存在时间效应性,表现为先下调后反馈增强的趋势,提示细胞对力学刺激的反应存在"自我调控保护"的机制。

绵羊角蛋白中间丝I型基因多态性及其与羊毛性状的关系

采用PCR-RFLP分子标记技术,检测了湖羊、哈萨克羊及中国美利奴多胎羊、"A"型羊和细型、超细型羊5个群体,共314只个体,角蛋白中间丝I型基因第1外显子的遗传多态性,并进行与绵羊羊毛性状相关性分析。结果表明:480 bp PCR产物经M spⅠ消化分析后在5个绵羊群体中均有2个等位基因突变(M占0.910 8,N占0.089 2)和3种基因型(MM占0.839 2,MN占0.141 5,NN占0.019 3),优势等位基因M基因频率比欧洲绵羊和印度绵羊品种高。序列比对发现,第1个M spⅠ酶切位点发生1个碱基C→T突变(g.160 C>T)。中国美利奴羊在该位点处于Hardy-W e inberg不平衡状态(P<0.05),其中中国美利奴细型、超细型群体在该位点处于Hardy-W e inberg极不平衡状态(P<0.01)。该位点与羊毛纤维直径不相关。

神经中间丝蛋白NF-66与胰岛素瘤良恶性的关系

目的探讨神经中间丝蛋白NF-66能否作为判断胰岛素瘤良恶性的分子标志物。方法采用免疫组织化学染色法检测胰岛素瘤组织、瘤旁胰腺组织及3株胰岛素瘤细胞株NF-66蛋白的表达，应用单因素及多因素统计分析胰岛素瘤NF-66蛋白表达与肿瘤病理特征及患者预后的相关性。结果132例胰岛素瘤组织中102例（77％）表达NF-66蛋白，98例瘤旁胰腺组织均未见该蛋白表达（P=4．86×10^-3。）；3株胰岛素瘤细胞株均高表达NF-66蛋白。118例良性胰岛素瘤中96例（81％）表达NF-66，而14例恶性胰岛素瘤中6例（43％）表达NF-66，恶性胰岛素瘤的表达显著下降（P=0．003）。胰岛素瘤NF．-66表达与肿瘤大小（以3cm为界）、远处转移、远处并淋巴结转移均呈显著负相关（46％比81％，P=0．009；38％比81％，P=0．013；43％比81％，P=0．010）；而与患者性别、年龄、肿瘤复发和生存状态不相关。结论胰岛素瘤中NF-66表达下调与肿瘤的恶性生物学特征有关，可能成为潜在的鉴别胰岛素瘤良恶性的分子标志物。

绵羊毛角蛋白Ⅱ型中间丝9基因的扩增及表达

本试验旨在构建绵羊毛角蛋白Ⅱ型中间丝9(keratin typeⅡintermediate filament 9,KIFⅡ-9)基因cDNA的毛囊特异性表达载体,转染辽宁绒山羊胎儿成纤维细胞,筛选出稳定表达外源基因并可用于核移植的转基因细胞克隆。通过PCR扩增得到的KAP6-1基因启动子,然后与RT-PCR扩增得到的KIFⅡ-9 cDNA序列连接构成皮肤特异性表达载体pcDNA3.1-KK,将重组表达载体以脂质体介导转染胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得转基因细胞克隆,结果显示,外源KAP6-1启动子序列和KIFⅡ-9 cDNA整合到细胞基因组中,为下一步通过核移植方法获得转基因绒山羊提供了条件。

中间微丝蛋白和癌胚抗原在不同淋巴结肿瘤细胞中的选择性表达

本文作者采用过氧化物酶标单克隆抗体免疫细胞化学技术，对４１例淋巴结肿瘤细针吸取细胞的中间微丝蛋白和癌胚抗原表达进行了研究。结果表明，不同组织起源的淋巴结肿瘤细具有各异的中间微丝蛋白和癌胚抗原表达，转移癌细胞Ｋｅｒａｔｉｎ阳性，Ｖｉｍｅｎｔｉｎ存在于间叶起源的肿瘤细胞，而癌胚抗原则是单层上皮组织起源肿瘤细胞的标志，其选择性表达具有很高的敏感性和特异性，在临床上有助于细胞学的监别诊断。

中间丝聚合蛋白在特应性皮炎患者皮损中的表达

目的:探讨中间丝聚合蛋白(Filaggrin,FLG)在特应性皮炎(Atopic dermatitis,AD)患者皮损的表达及其临床意义。方法:采用SP免疫组化方法检测16例AD患者皮损及14例对照组皮肤组织内FLG的表达,用图像分析软件Image-Pro Plus(IPP)判定FLG在AD患者皮损及健康者皮肤组织中阳性染色面积百分比。结果:FLG在AD患者皮损及健康者皮肤角质层及颗粒层均有表达,胞质染色多见;阳性染色面积百分比分别为(18.92±4.40)%及(23.00±2.28)%;FLG在AD患者皮损阳性染色面积明显低于健康人皮肤(t=-3.11,P=0.004)。结论:FLG在AD患者皮损中表达降低,可能是导致AD患者皮肤屏障功能障碍的原因。

绵羊角蛋白中间丝基因KIF1.2的克隆及序列分析

为了分析南疆地方品种羊和田羊毛囊角蛋白中间丝KIF1.2基因,以和田羊为实验动物,从绵阳毛囊中提取总RNA,利用反转录获得的cDNA第一链为模板,通过PCR扩增KIF1.2基因,插入pMD18-T克隆载体中经限制性内切酶双酶切和PCR检测双重鉴定并测定序列。结果,扩增出序列长度为1215 bp的基因片段,测序结果与GenBank上已公布的序列同源性为99%。该实验研究将为进一步通过基因和蛋白的调节来改良南疆地方品种羊和田羊羊毛品质提供必要的理论依据。