切割桑花叶萎缩类病毒的12串联体核酶基因克隆与转录载体构建

通过人工合成和PCR扩增,克隆特异性切割桑花叶萎缩类病毒RNA的12串联体核酶基因,用于控制病毒基因的表达。将桑花叶萎缩类病毒正链RNA上10 nt的靶序列连接在锤头型核酶催化区3'端,构成具有自切割功能的核酶基因。克隆该核酶基因并将其连接于载体pMD18T-SP6。在SP6 RNA聚合酶的作用下对线性化的重组质粒进行体外转录,体外自切割反应显示转录的多体自切割核酶可以通过内部的顺式切割释放出核酶分子。同时,将该12串联体核酶基因导入双元质粒pBI121中,获得重组植物转录载体pBI121-12MRz,为进一步培育抗桑花叶型萎缩病的转基因桑树奠定了基础。

双位点核酶对乙型肝炎病毒C基因体外转录物的剪切作用

为探讨双位点核酶对乙型肝炎病毒Ｃ基因体外转录物的剪切作用， 观察双位点核酶对单一核酶体外剪切的增强作用， 同时比较串联核酶和混合核酶的体外切割作用， 构建了核酶Ｒｚ１ ， Ｒｚ３ ， Ｒｚ１ 和Ｒｚ３ 的串联核酶（Ｒｚ１３） 体外转录载体， 经体外转录后切割靶ＲＮＡ． 结果表明： 双位点核酶， 无论是串联或混合核酶均可增强单一核酶的体外切割作用， 串联和混合核酶中的单一核酶可独立发挥作用； 当串联和混合数目为２ 个时， 两者的切割效率差别不大（ Ｐ＞ ０－０５） ．