美罗培南治疗药物监测的HPLC方法探索及其临床采样流程建立

目的:建立HPLC法测定人血浆中美罗培南的血药浓度,结合其稳定性研究制定临床采样流程,并应用到治疗药物监测个体化给药方案设计。方法:血浆样品经甲醇沉淀蛋白,取上清加水稀释后进样分析;色谱柱为Venusil HILIC(4.6 mm×250 mm,5.0μm);流动相为50 mmol·L^-1磷酸二氢钾含0.05%甲酸-乙腈(30∶70,V/V);流速0.8 mL·min^-1;检测波长为299 nm;柱温40℃;分别考察美罗培南全血、溶血样本在不同温度、不同采血管等条件下的稳定性。结果:美罗培南在0.38~71.30μg·mL^-1范围内线性关系良好(r=0.999 9),定量下限为0.38μg·mL^-1,低、中、高浓度的萃取回收率在101.87%~107.89%,日内、日间RSD均小于2.81%;以EDTA-K2为最佳的临床采血管,EDTA-K2管和肝素钠管中的美罗培南能在室温(19~22℃)下稳定4 h;溶血样本在2~6℃冰箱存放7 h稳定,但相对于EDTA-K2管和血浆质控,肝素钠管会使美罗培南检出率偏高;血浆样本在室温(19~22℃)、2~6℃冰箱内6 h、-40℃冻存20 d、-40℃反复冻融3次均稳定。结论:建立的TDM临床采样流程充分考虑了临床采样的实际情况并能确保美罗培南药物的稳定性及分析检测结果的准确性,可满足临床血药浓度监测需求。

头孢他啶与头孢吡肟治疗药物监测的高效液相色谱方法探索及其临床采样流程建立

目的:建立同时测定头孢他啶和头孢吡肟血药浓度的高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法及其临床采样流程,并应用于临床治疗药物监测。方法:采用CAPCELL PAK C18(4.6 mm×250 mm,5.0μm)色谱柱进行色谱分离,流动相A为50 mmol·L-1磷酸二氢钾溶液,流动相B为混合有机相(乙腈∶甲醇∶水=7∶2∶1),A∶B(V/V,93∶7),流速1.0 mL·min-1,波长为254 nm,盐酸雷尼替丁为内标,以ACP-1去蛋白剂沉淀蛋白,旋涡离心后进样30μL分析,同时考察全血中两药在不同抗凝管、不同温度下放置不同时间的稳定性。结果:头孢他啶和头孢吡肟的血浆质量浓度线性范围分别是0.57~267.34μg·mL-1、0.54~208.49μg·mL-1,低、中、高质控样品的日内、日间精密度均小于15%,萃取回收率分别为90.9%~95.4%、88.6%~97.7%;全血稳定性试验中,以EDTA-K2管采血的头孢他啶与头孢吡肟血浆在6℃及24℃下均能稳定48 h,37℃下稳定10 h;而以肝素钠管采血的头孢他啶和头孢吡肟血浆在6℃及24℃下能稳定24 h,37℃下能稳定4 h。结论:所建立的方法具有灵敏度高、稳定性好、操作简便等优点,并根据全血稳定性结果建立了一套临床采样流程,为头孢他啶和头孢吡肟的TDM标准化与规范化建设提供参考依据。

HPV检测中的自采样——让宫颈癌筛查更有效

宫颈癌是一种严重危害女性健康的恶性肿瘤,而人乳头瘤病毒(HPV) DNA检测是为宫颈癌筛查的重要手段。目前HPV检测主要由临床医师完成采样,但受受检者经济、知识水平及政策等因素影响,导致部分人群未能及时有效地进行宫颈癌筛查。与传统临床采样检测相比,HPV自采样检测结果有较高的一致性,且具有隐私性强、舒适、痛苦小、花费少等优点,其提高了女性参与HPV筛查的积极性。目前许多国家都非常重视HPV自采样,并努力将其纳入国家筛查计划,以增加HPV筛查的普及率,从而惠及更多女性。

Advances in the Detection of Mycoplasma hyopneumoniae by Polymerase Chain Reaction (PCR) Technology

Mycoplasma hyopneumoniae is an important pathogen causing Mycoplasmal pneumonia of swine, which generally causes secondary infections and mixed infections, thus seriously threats the development of swine industry and resulting in huge economic losses. Using PCR technology has very important significance to the correct diagnosis of Mycoplasmal pneumonia at the early stage. In this paper, specific target genes of Mycoplasma hyopneumoniae, methods for clinical sample collection, key technical factors of DNA sample processing method, and the research progress, main advantages and disadvantages, and application of general PCR technology, multiple PCR technology, nested-PCR technology, real-time fluorescence quantitative PCR technology, gene chip detection technology and loop-mediated isothermal amplification in detection of Mycoplasma hyopneumoniae were summarized, which provided convenience for the effective diagnosis and prevention of Mycoplasmal pneumonia of swine.

多黏菌素B治疗药物监测LC-MS/MS方法探索及临床初步应用

目的建立液质联用法(LC-MS/MS)测定人血浆中多黏菌素B(polymyxin B,PMB,主要活性成分PMB1和PMB2)的血药浓度,结合其全血稳定性研究制定临床采样流程,并应用到治疗药物监测(TDM)个体化给药方案设计。方法血浆样品经乙腈(含甲酸6.67%)蛋白沉淀,取上清加水稀释后进样分析;色谱柱为Shim-pack GIST C_(18)(2.1 mm×100 mm, 3μm,岛津公司);流动相为水(含0.1%甲酸)-乙腈,梯度洗脱;流速0.5 mL·min-1,柱温40℃;分别考察全血/血浆中PMB1和PMB2在不同温度、不同采血管等储存条件下的稳定性。结果 PMB1和PMB2在(0.033~18.816)和(0.034~19.872)μg·mL^(-1)线性关系良好(r=0.999 9),定量下限浓度为0.033和0.034μg·mL-1,低、中、高浓度的萃取回收率在97.2%~110.6%,基质效应在91.8%~101.1%。日内、日间RSD均小于8.2%。EDTA-K2管和肝素钠管中的PMB能在室温下稳定10 h、2~6℃冰箱保存19 h;血浆样本室温下22 h、-40℃冻存115 d或-40℃反复冻融3次均稳定。结论建立的TDM临床采样流程能确保PMB药物的稳定性及分析检测结果的准确性,可满足临床血药浓度监测需求。