丹参含药血清对肝星状细胞增生的抑制作用

目的:研究丹参含药血清对肝星状细胞(HSC)的增生抑制作用,并探讨中药抗肝纤维化筛选平台的建立. 方法:测定HSC-T6细胞的细胞生长曲线和克隆形成率,观察其细胞增生状况.取原始血清体积分数的80%,40%, 20%,10%,5%的丹参含药血清作用于HSC-T6细胞, 观察其增生抑制效应及量效关系. 结果:HSC-T6细胞的细胞群体倍增时间为10.57 h,克隆形成率为82.4%,说明该转化细胞系的活力较好,增生能力较强.在5-80%浓度范围之内,丹参含药血清抑制HSC细胞增生作用呈剂量依赖性(经直线回归分析,相关系数r=0.9487). 结论:丹参含药血清能明显抑制HSC-T6细胞增生,呈剂量依赖性.

丹参含药血清调节大鼠肝星状细胞TGF-β1及细胞周期素CyclinD1的机制研究

目的:研究丹参含药血清调节大鼠肝星状细胞内转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)及细胞周期素CyclinD1的机制。方法:将20只Sprague-Dawley(SD)大鼠按照随机数字表法随机分为丹参低剂量组(1.04 g/kg)、中剂量组(2.08 g/kg)、高剂量组(4.17 g/kg)、空白组,并分别制备含药血清。体外传代培养肝星状细胞经10 ng/ml血小板衍生生长因子-BB(platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB)诱导后,再给予相应的含药血清干预,37℃培养24 h后收集细胞。经高效液相色谱法(HPLC)检测血清中丹参成分,q RT-PCR测定视黄酸受体-α(retinoic acid receptorα,RXR-α)及TGF-β1 mRNA,用Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)及细胞周期素CyclinD1蛋白的表达情况。结果:丹参不同剂量处理组中,RXR-α mRNA表达量逐渐增加,而TGF-β1 mRNA、α-SMA蛋白、CollgenⅠ蛋白和CyclinD1蛋白表达逐渐降低,且与对照组比有统计学差异。结论:丹参含药血清可能通过促进RXR-α表达,抑制TGF-β1及CyclinD1表达,抑制肝星状细胞的增殖,进而抑制肝纤维化。

丹参含药血清对HSCs中Smo和α-SMA表达的影响

目的:探讨丹参含药血清对瘦素刺激的大鼠HSCs(肝星状细胞)刺猬信号通路(Hedgehog信号通路)Smo(膜蛋白受体)和α‐SMA(α肌动蛋白)表达的影响。方法:大鼠60只分为3组,给予丹参水煎剂、生理盐水、秋水仙碱连续灌胃10天制备含药血清。将处于对数生长期的HSCs分为7组:空白对照组、模型组、抑制剂组、丹参组、激动剂组、激动剂+丹参组、秋水仙碱组。除空白对照组外,其余各组均予100ng/ml瘦素刺激24 h,各组经含药血清干预后置于37℃、5%CO2孵箱中培养。24 h后收集细胞,采用MTT比色法检测丹参含药血清对肝星状细胞增殖情况,RT-PCR法测定Smo mRNA、α‐SMA mRNA的表达,采用Westernblot法测定Smo、α‐SMA蛋白的表达情况。结果:经瘦素刺激的大鼠HSCs中Smo mRNA、Smo蛋白和α‐SMA mRNA、α‐SMA蛋白表达均明显增加。抑制剂组、丹参含药血清、秋水仙碱干预后,Smo蛋白和α‐SMA mRNA、α‐SMA蛋白表达明显减少。抑制剂组、丹参含药血清干预后Smo mRNA显著降低,秋水仙碱干预后Smo mRNA的表达明显降低。在模型组的基础上加入激动剂充分活化后,Smo mRNA、Smo蛋白和α‐SMA mRNA、α‐SMA蛋白表达均明显增加。用丹参含药血清干预激动剂组后,Smo mRNA、Smo蛋白和α‐SMA mRNA、α‐SMA蛋白表达显著降低。结论:丹参含药血清可以调控由瘦素诱导活化的HSCs中Smo和α‐SMA的表达,从而抑制HSCs的活化。

丹参含药血清对大鼠肝星状细胞增殖及视黄酸受体的影响

目的:为研究丹参含药血清对大鼠肝星状细胞增殖及视黄酸受体的影响。方法:将30只SD大鼠随机分为丹参1.04 g/kg组、丹参2.08 g/kg组、丹参4.17 g/kg组、秋水仙碱组、空白组,制备含药血清。MTT法筛选血小板衍生生长因子BB(PDGFBB)刺激HSCs增殖的最佳作用浓度。CCK-8法检测丹参含药血清对肝星状细胞增殖影响。体外培养肝星状细胞,除空白组外,其余各组均先予所得血小板衍生生长因子BB最佳浓度刺激,再给予相应的含药血清干预,培养于37℃、5%CO2孵箱中,24 h后收集细胞,分别采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定视黄酸受体(RXR-α)mRNA,用Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)及RXR-α蛋白的表达情况。结果:与秋水仙碱组相比,丹参4.17 g/kg组及丹参2.08 g/kg组上调RXR-αmRNA表达,减少α-SMA、CollagenⅠ,增加RXR-α含量。结论:丹参含药血清对肝星状细胞的增殖有抑制作用,从而发挥抑制肝纤维化作用,其机制可能与促进视黄酸受体表达有关。

加味丹参饮含药血清预处理对缺氧/复氧H9C2心肌细胞自噬相关基因Atg5和Beclin1 mRNA表达的影响

目的探讨加味丹参饮含药血清预处理对缺氧/复氧H9C2心肌细胞自噬及其相关基因Atg5、Beclin1 mRNA表达的影响。方法将体外培养的H9C2心肌细胞随机分为空白血清组(CG)、缺氧/复氧组(HRG)、加味丹参饮含药血清组(JDG)、JDG+自噬抑制剂(3-MA)组(JIG)、JDG+自噬激动剂(RAPA)组(JAG)。倒置显微镜观察各组心肌细胞生长及形态变化;MTT比色法测定心肌细胞存活率;透射电子显微镜观察心肌细胞自噬体形态及数量;实时荧光定量PCR检测自噬相关基因Atg5、Beclin1 mRNA表达。结果与CG比较,HRG镜下心肌细胞变性坏死程度增加,细胞存活率下降(P<0.01),电镜下自噬体增多,实时荧光定量PCR示Atg5、Beclin1 mRNA表达上调;与HRG相比,JDG及JAG镜下心肌细胞变性坏死程度减轻,细胞存活率显著升高(P<0.01),电镜下自噬体增加,Atg5、Beclin1 mRNA表达进一步上调(P<0.05)。结论加味丹参饮预处理通过上调自噬相关基因Atg5、Beclin1 mRNA表达,增强细胞自噬,保护缺氧/复氧损伤H9C2心肌细胞。

加味丹参饮含药血清对骨髓间充质干细胞增殖及分泌bFGF、VEGF的影响

目的:探讨加味丹参饮含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖率、分泌碱性成纤维生长因子(bFGF)及血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法:采用不同浓度的加味丹参饮含药血清诱导MSCs,并分为大、中、小剂量组(15 g/kg·d、10 g/kg·d、5 g/kg·d),另取未用加味丹参饮含药血清诱导的MSCs为空白对照组。检测各组MSCs(用MTT法)在490 nm处的光吸收值,并检测各组bFGF、VEGF的含量(用ELISA法)。结果:诱导第1天时,加味丹参饮含药血清各组均不能促进MSCs增殖,中、大剂量组与空白对照组比较,MSCs增殖明显下降(P<0.01);诱导第2天、第3天时,加味丹参饮中、大剂量组MSCs增殖均明显高于空白对照组(P<0.01)。诱导第1天时,加味丹参饮各组bFGF、VEGF的分泌均未增加,小剂量组与空白对照组比较,其分泌明显减少(P<0.01);诱导第2天、第3天时,加味丹参饮中、大剂量组bFGF、VEGF的分泌均明显高于空白对照组(P<0.01)。结论:剂量为10 g/(kg·d)、15 g/(kg·d)的加味丹参饮血清能促进MSCs增殖,并能促进MSCs分泌bFGF、VEGF。