去氢丹参新酮对神经炎症的抑制作用及机制研究

目的研究去氢丹参新酮对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小胶质细胞系BV2细胞产生炎症反应的抑制作用及其作用机制。方法不同浓度去氢丹参新酮预孵育BV2细胞后,用LPS刺激引起神经炎症相关反应。Griess试剂法检测去氢丹参新酮对活化的BV2细胞产生一氧化氮(nitric oxide,NO)的影响,ELISA检测细胞上清液中TNF-α和IL-6的释放量,Confocal观察小胶质细胞表面活化标志物MAC-1表达量的变化,Western blot检测炎症相关信号通路蛋白表达的变化。结果去氢丹参新酮可明显抑制LPS刺激BV2细胞产生的炎症因子包括NO、TNF-α和IL-6的水平,同时抑制一氧化氮合酶、环氧合酶-2等炎症相关蛋白的表达和小胶质细胞表面活化标志物MAC-1的表达。机制研究发现,去氢丹参新酮对PI3K/Akt的过度磷酸化以及NF-κB的过度活化都有明显的抑制作用。结论去氢丹参新酮具有很好的抑制神经炎症活性,其作用机制可能是通过PI3K/Akt信号通路抑制NF-κB的活化而实现的。

丹参新酮标准样品的研制

目的根据GB/T15000.3-2008《标准样品工作导则(3)标准样品:定值的一般原则和统计方法》和GB/T15000.5-2008《标准样品工作导则(5)标准样品:化学成分标准样品技术通则》中指导要求,在国家标准化技术管理委员会批准立项的基础上,开展关于丹参新酮标准样品的研制。方法以唇形科鼠尾草属药用植物陕南道地丹参(Salvia miltiorrhiza Bge)为原料通过醇提、硅胶柱色谱分离、制备色谱得到丹参新酮纯品;采用红外分光光度分析法(IR)、紫外光谱(UV)、核磁共振(NMR)和质谱(MS)等波谱技术对其进行定性分析和结构确证。将样品分装成100瓶(10 mg/瓶),采用高效液相色谱法(HPLC)进行均匀性和稳定性检验以及联合定值分析。结果经检验该样品在95%的置信区间范围内均匀性良好;在0~4℃的条件下,24个月内稳定性良好;采用多个实验室协作试验定值,丹参新酮标准样品的纯度为99.350%,扩展不确定度0.053%。结论丹参新酮达到国家标准样品的技术要求,丹参新酮标准样品批号GSB 11-3803-2020可以用于丹参药材及其副产品中丹参新酮含量的测定、结构的确定、质量甄别、检测方法的校正和质量控制,为药材和产品成分检测结果的准确性、对比性、可溯性提供参考。

丹参新酮对白血病THP-1细胞增殖与凋亡的影响

研究丹参新酮(miltirone)对人急性髓系白血病THP-1细胞的细胞毒作用及其机制。通过中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)筛选出丹参新酮活性成分及其对应靶点,利用UniProt数据库将靶蛋白转化成基因;利用GeneCards和DisGeNET数据库收集急性白血病疾病相关基因;运用Venny 2.1构建韦恩图并得到交集靶点;利用STRING数据库和Cytoscape 3.8.2软件构建蛋白相互作用(PPI)网络;选取对数生长期的THP-1细胞,用DMSO,2.5、5、10、15及20μmol·L^(-1)miltirone处理24 h;采用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)标记法检测细胞增殖;Annexin V-PE/7AAD双染流式细胞术检测凋亡率,吖啶橙染色观察细胞形态;实时荧光定量PCR(qPCR)检测NCOA2、PARP1、Bax、Bcl-2、caspase-3 mRNA的表达;检测caspase抑制剂Z-VAD-FMK对miltirone诱导凋亡的影响。筛选出26个miltirone靶蛋白,急性白血病疾病相关基因1046个,6个潜在作用靶点与急性白血病相关。流式结果显示,10μmol·L^(-1)miltirone可显著抑制THP-1细胞增殖并促进凋亡;吖啶橙染色可见细胞萎缩、细胞核碎裂、染色体聚集等典型的凋亡形态学改变;NCOA2、PARP1 mRNA表达水平降低,Bax/Bcl-2比例增大,促凋亡蛋白caspase-3活性增强。Z-VAD-FMK能减弱miltirone诱导凋亡的作用。研究结果表明miltirone能抑制THP-1细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与下调NCOA2、PARP1基因的表达,Bax/Bcl-2比值增大,激活促凋亡因子caspase-3有关。

丹参新酮C环酚酯衍生物的设计合成及抗肿瘤活性研究

目的通过对丹参新酮C环邻醌位点的结构修饰,改变其脂水分配系数,获得系列丹参新酮酚酯衍生物,进而评价其抗肿瘤活性。方法采用氢化还原、酰化、脱保护基等方法对丹参新酮的邻醌位点进行修饰,通过引入不同酸酐、氨基酸取代基,得到丹参新酮C环酚酯衍生物,在此基础上以前列腺癌Lncap和Du145细胞株对部分化合物进行抗肿瘤活性评价。结果共合成了9个新的丹参新酮酚酯衍生物,其中1个化合物表现出较好的抗肿瘤活性。结论脂水分配系数对丹参新酮衍生物抗肿瘤活性影响很大,适当提高水溶性,有助于增强其抗肿瘤活性,改善成药性。

药用鼠尾草花的化学成分研究

对药用鼠尾草SalviaofficinalisL .花的CO2 超临界提取物进行硅胶层析分离 ,得到 5种单体化合物。根据其理化性质及各种波谱数据 ,鉴定它们分别为硬脂酸甲酯、丹参新酮、正三十三烷、β -谷甾醇和泪杉醇 ,其中丹参新酮系首次从该植物中分离获得。

HPLC-TOF/MS分析丹参酒炙前后化学成分的变化

目的：采用高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术（HPLC-TOF/MS）分析丹参酒炙前后主要化学成分的变化,为揭示丹参炮制原理及制定丹参饮片的质量标准提供参考。方法：HPLC分离采用Halo C18色谱柱（2.1 mm×100 mm,2.7μm）,流动相乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B）梯度洗脱（0-3 min,0%-10%A;3-8 min,10%-40%A;8-25 min,40%-70%A;25-36 min,70%-100%A）,流速0.25 m L·min^-1;质谱定性采用飞行时间质谱,ESI离子源,正离子模式下扫描,采用对照品定位、质谱数据、数据库匹配和文献参照对各离子峰进行归属,通过丹参酒炙前后离子峰数目和峰面积的比较,研究其化学成分变化。结果：生丹参和酒丹参中分别推测出中16,14种化合物。丹参酒炙后,紫草酸或丹酚酸H,丹参酮ⅡB色谱峰消失,隐丹参酮、丹参新醌乙、丹参酮ⅡA和丹参新酮的峰面积显著降低,二氢丹参酮Ⅰ和丹参酮Ⅰ的峰面积增加。结论：丹参酒炙后化学成分的种类和含量变化显著,部分丹参酮类和丹酚酸类成分产生质变或量变,推测丹参酒炙后活血祛瘀作用增强与所含成分转化成体内更易吸收的活性成分有关。