脯氨酸丹参素冰片酯对小鼠中枢神经系统的一般药理学研究

目的 考察脯氨酸丹参素冰片酯对小鼠中枢神经系统的影响。方法 将小鼠随机分为对照组和脯氨酸丹参素冰片酯大剂量(120 mg/kg)、中剂量(60 mg/kg)、小剂量(30 mg/kg)给药组,每组10只,雌雄各半,灌胃给药后考察对小鼠自主活动、协同睡眠、协调运动能力和镇痛的作用。结果 与对照组相比,脯氨酸丹参素冰片酯对小鼠自主活、协同睡眠、协调运动能力和镇痛方面无显著影响。结论 脯氨酸丹参素冰片酯对小鼠中枢神经系统无明显影响,在药效有效剂量范围内安全性较好。

HPLC测定丹参素冰片酯脂肪乳注射液含量及有关物质

目的:建立丹参素冰片酯脂肪乳注射液含量测定及有关物质检查方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱:KromasilC18(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相:乙腈-0.2%甲酸水(42︰58),流速为1.0 mL·min-1,检测波长280 nm,进样体积20μL。结果:试验结果表明,HPLC法检测主峰与杂质峰有较好的分离度,且重复性较好;丹参素冰片酯的浓度在5～60μg·mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系(r=1.000),平均回收率为98.2%(n=9)。结论:该法操作简便,结果可靠,适用于丹参素冰片酯脂肪乳注射液含量测定及有关物质检查。

顶空气相色谱法测定丹参素冰片酯脂肪乳中溶剂残留量

目的建立顶空毛细管气相色谱法测定丹参素冰片酯脂肪乳注射液的溶剂残留量。方法采用顶空毛细管气相色谱法。色谱柱为DB-WAX(30m×0.25mm,0.25μm)毛细管色谱柱;柱温40℃;载气为氮气,柱流速为2.0mL.min-1;采用分流进样,分流比为1∶1;进样口温度200℃,FID检测器温度为230℃。结果甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、四氢呋喃、乙酸乙酯的线性范围分别为:6～238μg·mL-1(r=0.998 9),10～395μg·mL-1(r=0.997 9),10～400μg·mL-1(r=0.998 0),10～394μg·mL-1(r=0.998 6),2～53μg·mL-1(r=0.997 4)和10～414μg·mL-1(r=0.997 1);平均回收率分别为96.6%,96.8%,96.2%,92.1%,92.9%和93.2%,其RSD分别为1.0%,0.2%,1.1%,1.0%,0.8%和1.4%。结论该法操作简便可靠,适用于丹参素冰片酯脂肪乳注射液中有机溶剂残留的检测。

脯氨酸丹参素冰片酯对小鼠急性毒性研究

目的探究抗高血压1类新药脯氨酸丹参素冰片酯的急性毒性,评价其安全性。方法24只小鼠,雌雄各半,随机分为溶剂对照组和给药组,根据脯氨酸丹参素冰片酯溶液的最大浓度(150 mg·mL^(-1)),单次灌胃,连续观察7 d,记录小鼠毒性反应、体重及饮食饮水量,7 d后小鼠处死,观察主要脏器变化,测定心、肝、肾、肺脏等主要脏器指数,HE染色观察脏器病理性改变。结果实验过程中,脯氨酸丹参素冰片酯给药后小鼠均未出现死亡。与溶剂对照组相比,脯氨酸丹参素冰片酯给药后7 d内,小鼠活动、体重、饮食饮水量均无显著性差异。给药组肝、肾、肺脏指数与对照组相比无显著差异(P>0.05)。与溶剂对照组小鼠相比,雄性小鼠给药组心脏指数无显著差异(P>0.05),而雌性小鼠给药组的心脏指数具有显著降低(P<0.05),且心肌细胞排列紊乱。结论测得脯氨酸丹参素冰片酯对小鼠灌胃的最大耐受量为3000 mg·kg^(-1)。脯氨酸丹参素冰片酯毒性小,安全性较好。

丹参素酰基丙氨酰脯氨酸冰片酯片剂的制备工艺

研究丹参素酰基丙氨酰脯氨酸冰片酯片剂最佳制备工艺。采用粉末直接压片法制备片剂,以外观、药片质量差异、硬度、脆碎度和崩解时限为考察指标,筛选出处方辅料的最佳种类及用量,并对工艺的原辅料混合时间、压力因素进行优化。通过稳定性实验评价所筛选片剂的质量是否达标。结果表明,最佳处方为主药w(丹参素酰基丙氨酰脯氨酸冰片酯)=2.5%、填充剂w(微晶纤维素)=56%、w(预胶化淀粉)=26%、w(无水乳糖)=8%、崩解剂w(低取代羟丙基纤维素)=4%、润滑剂w(微粉硅胶)=0.2%、w(硬脂酸镁)=0.5%。优化后的制备工艺为原辅料混合时间15 min,片剂硬度40~50 N。该片剂在37℃保存3个月质量稳定,表明该制剂处方工艺合理,可操作性强。

丹参素酰基-L-丙氨酰-L-脯氨酸冰片酯中间体缩合反应工艺

探究丹参素酰基-L-丙氨酰-L-脯氨酸冰片酯合成过程中两步缩合反应的最优工艺.其中Boc-L-脯氨酸冰片酯的最优合成工艺为以1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)为缩合剂[n(EDCI)∶n(DMAP)=1.5∶0.1],以二氯甲烷(DCM)为溶剂,n(Boc-L-脯氨酸)∶n(冰片)=1.2∶1,反应时间5h.Boc-L-丙氨酰-L-脯氨酸冰片酯的最优合成工艺为以n(EDCI)∶n(DMAP)=3∶1为缩合剂,以DCM和N,N-二甲基甲酰胺(DMF)为溶剂[V(DCM)∶V(DMF)=1∶1],n(Boc-L-脯氨酸冰片酯)∶n(Boc-L-丙氨酸)=1∶1.1,反应时间为6~7h.缩合产物结构采用1HNMR和MS表征.优化后的缩合反应工艺简单,产率较高,为后期的工业化放大奠定了工艺基础.

丹参素异丙酯/冰片酯的合成及手性拆分研究

以原儿茶醛为初始原料,经苄基保护酚羟基,氯乙酸酯参与的Darzens环氧化,钯碳/氢气催化还原,共4步反应,分别得到混旋丹参素异丙酯及丹参素冰片酯,总产率分别达到58%,56%以上。这两种混旋丹参素酯分别经超临界流体色谱(Supercritical fluid chromatography,SFC)法分离纯化,得到相应光学纯度的丹参素异丙酯及丹参素冰片酯(收率均达90%以上,ee值均达99.5%以上)。该合成路线原料易得,步骤短,产率高,是一种适合工业化生产混旋丹参素异丙酯及丹参素冰片酯的合成方法;利用SFC分离纯化,简单易行,产物光学纯度高,可进行工业化生产。

丹参素冰片酯对大鼠腹主动脉中TLR4、NF-κB和IL-6 mRNA表达的实验研究

目的:探讨丹参素冰片酯抗大鼠动脉粥样硬化的作用及其可能机制。方法:选取SD大鼠60只,随机分为空白组(10只)和实验组(50只),实验组建造AS模型,模型成功后随机将实验组分为模型组,辛伐他汀组,丹参素冰片酯高、中、低剂量组。药物干预4周,通过Real-time-PCR技术检测大鼠腹主动脉中TLR4、NF-κB及IL-6mRNA的表达。结果:与空白组相比其它5组TLR4、NF-κB和IL-6mRNA的表达均高于空白组(P<0.05);药物处理组TLR4、NF-κB和IL-6mRNA的表达均低于模型组(P<0.05),丹参素冰片酯各剂量组之间存在量效关系。结论:丹参素冰片酯能抑制TLR4、NF-κB和IL-6在大鼠腹主动脉的表达,这可能是其延缓动脉粥样硬化进程、稳定粥样斑块的作用机制之一。

“良关系”化合物丹参素冰片酯抗神经炎症作用

目的丹参-冰片药对源于复方丹参方,是典型的“良关系”之“相使”药对。丹参素冰片酯(DBZ)是复方丹参方中君药丹参的主要活性成分丹参素与使药冰片,遵循“组合中药分子化学”思路,设计拼合而成的“良关系”化合物。前期研究表明,其具备显著的抗心、脑缺血作用,能够代表原方主要药理作用。心、脑缺血及动脉粥样硬化等相关疾病的发生、发展均伴随神经炎症,然而DBZ与神经炎症的关系尚无研究。本研究探究DBZ抑制神经炎症的作用。方法脂多糖(LPS)诱导BV2小胶质细胞炎症模型,运用Griess比色法检测NO的释放,ELISA法检测肿瘤坏死因子,Western印迹实验检测iNOS、MMP-9等蛋白的表达。结果DBZ能剂量依赖地抑制LPS诱导的BV-2小胶质细胞产生的NOTNFα等炎症因子的释放及MMP-9、iN⁃OS、细胞外调节蛋白激酶等相关蛋白表达,拮抗Erk1/2信号通路的激活。结论DBZ对LPS诱导BV-2小胶质细胞活化具有抑制作用。

丹参素冰片酯乳剂中丹参素冰片酯和冰片的含量测定

目的建立可行的丹参素冰片酯(DBZ)乳剂中DBZ和冰片的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法测定丹参素冰片酯,色谱柱采用Agilent TC-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.2%甲酸水(65∶35)为流动相,检测波长为280 nm。采用气相色谱法测定冰片,HP-1毛细管柱(30.0 m×0.32 mm×0.25μm),进样口温度为260℃,检测器温度为260℃。结果丹参素冰片酯与杂质峰分离良好,线性范围为0.01～1.00 g/L(R2=0.999);乳剂样品中丹参素冰片酯的含量为4.75 g/L,冰片与杂质峰分离良好,质量浓度线性范围为0.001～0.050 g/L(R2=0.999),乳剂样品中冰片未检出。结论所采用方法准确、灵敏、专属性好,可用于丹参素冰片酯乳剂中丹参素冰片酯和冰片含量的测定。

面包酵母生物催化不对称合成丹参素冰片酯

以3,4-二羟基苯甲醛为原料,经Knoevenagel缩合、水解反应合成β-（3,4-二羟基苯基）丙酮酸,利用对甲基苯磺酸催化β-（3,4-二羟基苯基）丙酮酸和冰片反应合成了β-（3,4-二羟基苯基）丙酮酸冰片酯,最后利用面包酵母生物催化不对称合成了丹参素冰片酯（DBZ）。系统考察了葡萄糖加入量、反应时间、pH及β-环糊精加入量等因素对面包酵母生物催化合成不对称丹参素冰片酯的影响,结果表明：在底物β-（3,4-二羟基苯基）丙酮酸冰片酯加入量为0.5 g时,其最佳反应条件为：葡萄糖30 g、β-环糊精1.5 g、pH为7、反应时间24 h,此条件下对映体过量值（e.e.）高达84.9%,产物主要为S构型的丹参素冰片酯。该工艺条件温和、成本较低,是一条极具价值的丹参素冰片酯生产工艺。

丹参素冰片酯影响大鼠脑组织P-糖蛋白表达研究

目的考察丹参素冰片酯(DBE)及丹参素钠-冰片(SDSS-B)等摩尔联合用药的脑部靶向作用与其对P-糖蛋白表达的影响。方法采用LC-MS分析大鼠尾静脉注射DBE、SDSS-B及SDSS后脑部丹参素分布量;蛋白免疫印迹法分析3种给药方式对大鼠脑组织P-糖蛋白(P-gp)表达量的影响。结果以大鼠脑部丹参素分布定性评价其脑靶向大小为:DBE(SDSS-B)>SDSS;蛋白免疫印迹结果分析显示:DBE和SDSS-B给药均可有效降低大鼠海马组织P-gp表达水平(P<0.01,与Control组对比;P<0.01,与SDSS组对比),其表达量在给药45 min时分别降至(47.58±2.28)%及(46.54±1.41)%;SDSS给药对P-gp表达量几乎无明显抑制作用(P>0.05在5、15、45、60 min,与Control组对比)。结论 DBE和SDSS-B均表现出脑部靶向作用,其靶向作用与其降低脑组织P-gp表达量有关。

毛细管气相色谱法测定丹参素冰片酯中有机溶剂残留

目的建立测定丹参素冰片酯中有机溶剂残留量的毛细管气相色谱法。方法采用顶空毛细管气相色谱法,N,N-二甲基甲酰胺为溶剂,DB-WAX毛细管柱(30.0 m×0.25 mm×0.25μm),氮气为载气,FID检测器。结果乙醚、丙酮、四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇和乙醇6种有机溶剂均达到了完全分离,在考察的质量浓度范围内具有良好线性关系,最低检测限分别为6.48,5.33,4.79,7.43,12.87,4.81 ng,高、中、低3种质量浓度的回收率均大于98%。结论该方法灵敏度、准确度均达到有机溶剂残留量的检测要求,可用于丹参素冰片酯中6种残留溶剂的检测和分析。

丹参素冰片酯合成的工艺过程

在现代药物研发中,经常采用天然开发、药物合成提纯、副作用转变法等手段。丹参素是易溶于水的一种酸。在科学家们近十几年的研究和不断创新下,发现3,4-二烃基苯丙酮酸在乳酸脱氧酶及辅助因子NADH和FDH存在下可以生成丹参素,同时发现,左旋多巴在酶催化下生成3,4-二烃基苯丙酮酸,即将左旋多巴在室温下经70%水合(CF3CO)20处理后水解得到。在合成丹参素冰片酯时,要注意清洁生产,做好防护措施,减少合成过程中产生的有毒物质和含量。

丹参素衍生物的合成

在丹参素冰片酯的基础上,以原儿茶醛类似物为起始原料,经乙酰化,水解,酸化处理后得到中间体β-(3,4-二甲氧基苯基)丙酮酸、β-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙酮酸、β-(4-氯苯基)丙酮酸。选择具有扩张血管等作用的烟酸、异烟酸以及具有促渗透作用的薄荷醇作为取代基,借助功能导向合成方法及"君-使化合物"的思想对中间体的羧基和α-羟基做进一步的结构优化,得到6种丹参素衍生物。通过MS,1H NMR,13C NMR对所合成化合物的结构进行表征,可为心血管药物的开发提供新的实体分子。

丹参素冰片酯对同型半胱氨酸诱导大鼠骨髓间充质干细胞损伤的保护作用及机制

目的探讨丹参素冰片酯（TBE）对同型半胱氨酸（Hcy）诱导大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）损伤的作用及机制。方法以密度梯度离心法结合贴壁培养法体外分离和培养BMSC。将BMSC分为对照组（未干预）、TBE-1组（加入含10 μmol/L TBE-1溶液100 μl）、TBE-2组（加入含10 μmol/L TBE-2溶液100 μl）、Hcy组（加入含0.5 mmol/L Hcy溶液100 μl）、Hcy＋TBE-1组（加入含10 μmol/L TBE-1溶液100 μl和含0.5 mmol/L Hcy溶液100 μl）、Hcy＋TBE-2组（加入含10 μmol/L TBE-2溶液100 μl和含0.5 mmol/L Hcy溶液100 μl）、Hcy＋TBE-1＋阻断剂组[加入含10 μmol/L TBE-1溶液100 μl、0.5 mmol/L Hcy溶液100 μl和25 μmol/L LY294002（磷脂酰肌醇3激酶的特异性阻断剂）溶液100 μl]和Hcy＋TBE-2＋阻断剂组（加入含10 μmol/L TBE-2溶液100 μl、0.5 mmol/L Hcy溶液100 μl和25 μmol/L LY294002溶液100 μl）。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖活性；黄嘌呤氧化酶法检查细胞总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性，TBA法检测细胞丙二醛水平，评价细胞氧化损伤程度；透射电子显微镜观察各组细胞超微结构；免疫细胞化学法检测细胞蛋白激酶B（PKB）及核转录因子-κB（NF-κB）的表达水平。结果（1）干预1、12、24和48 h后，TBE-1组和TBE-2组细胞的增殖活性均高于正常组（P均〈0.01），TBE-1组与TBE-2组的细胞增殖活性差异均无统计学意义（P均〉0.05）。（2）TBE-1组和TBE-2组的T-SOD活性均高于对照组（P均〈0.01）；Hcy组、Hcy＋TBE-1组和Hcy＋TBE-2组的T-SOD活性均低于对照组（P均〈0.01）；对照组、Hcy＋TBE-1＋阻断剂组和Hcy＋TBE-2＋阻断剂组之间的T-SOD活性差异均无统计学意义（P均〉0.05）；Hcy＋TBE-1组和Hcy＋TBE-2组的T-SOD活性均高于Hcy组（P均〈0.01）；Hcy＋TBE-1＋阻断剂组的T-SOD活性高于Hcy＋TBE-1组（P〈0.05）；Hcy＋TBE-2＋阻断剂组的T-SOD活性高于Hcy＋TBE-2组（P〈0.05）。TBE-1组和TBE-2组的丙二醛水平均低于对照组（P均〈0.01）；Hcy组、Hcy＋TBE-1组、Hcy＋TBE-2组、Hcy＋TBE-1＋阻断剂组和Hcy＋TBE-2＋阻断剂组的丙二醛水平均高于对照组（P均〈0.01）；Hcy＋TBE-1组和Hcy＋TBE-2组的丙二醛水平均低于Hcy组（P均〈0.01）；Hcy＋TBE-1＋阻断剂组的丙二醛水平高于Hcy＋TBE-1组（P〈0.05）；Hcy＋TBE-2＋阻断剂组的丙二醛水平高于Hcy＋TBE-2组（P〈0.05）。（3）透射电子显微镜下，Hcy组、Hcy＋TBE-1＋阻断剂组、Hcy＋TBE-2＋阻断剂组与对照组比较，BMSC的细胞器肿胀明显，衰老凋亡细胞明显增多，而TBE-1组和TBE-2组细胞内粗面内质网丰富，细胞代谢极为活跃；与Hcy组比较，Hcy＋TBE-1组及Hcy＋TBE-2组BMSC的细胞器水肿减轻，衰老凋亡细胞数量减少，细胞损伤程度减轻。（4）TBE-1组和TBE-2组的PKB水平均高于对照组（P均〈0.01）；Hcy组、Hcy＋TBE-2组、Hcy＋TBE-1＋阻断剂组和Hcy＋TBE-2＋阻断剂组的PKB水平均低于对照组（P均〈0.01）；对照组与Hcy＋TBE-1组之间的PKB水平差异无统计学意义（P〉0.05）；Hcy＋TBE-1组和Hcy＋TBE-2组的PKB水平均高于Hcy组（P均〈0.05）；Hcy＋TBE-1＋阻断剂组的PKB水平低于Hcy＋TBE-1组（P〈0.05）；Hcy＋TBE-2＋阻断剂组的PKB水平低于Hcy＋TBE-2组（P〈0.05）。TBE-1组和TBE-2组的NF-κB水平均高于对照组（P均〈0.01）；Hcy组、Hcy＋TBE-1组、Hcy＋TBE-2组、Hcy＋TBE-1＋阻断剂组和Hcy＋TBE-2＋阻断剂组的NF-κB水平均低于对照组（P〈0.01或0.05）；Hcy＋TBE-1组和Hcy＋TBE-2组的NF-κB水平均高于Hcy组（P均〈0.05）；Hcy＋TBE-1＋阻断剂组的NF-κB水平低于Hcy＋TBE-1组（P〈0.05）；Hcy＋TBE-2＋阻断剂组的NF-κB水平低于Hcy＋TBE-2组（P〈0.05）。结论TBE可改善Hcy对BMSC的损伤，其机制可能与磷脂酰肌醇3激酶/PKB信号转导通路中的PKB及下游信号蛋白NF-κB活化有关。

丹参素冰片酯的不对称合成研究

目的不对称合成丹参素冰片酯。方法以3,4-二羟基苯甲醛为原料,经苄基保护及Knoevenagel缩合反应得到(E)-3-(3,4-二苄氧基苯基)丙烯酸(3),经过酰化反应得到酰氯后与天然冰片反应生成(E)-3-(3,4-二苄氧基苯基)丙烯酸冰片酯(4),通过Sharpless不对称双羟化反应构建手性中心,得到高光学纯度的3-(3,4-二苄氧基苯基)-2,3-二羟基丙酸冰片酯衍生物(5),最后经选择性催化加氢及脱保护得到目标产物。结果与结论目标化合物经高效液相手性色谱柱分析ee为97%,所得化合物的结构通过1H-NMR、13C-NMR、HRMS证实,该合成方法操作简单、条件温和、光学产率高。

β-(3,4-二羟基苯基)-α(S)-羟基丙酸冰片酯脂肪乳的HPLC法测定

制备并拆分丹参素冰片酯的立体异构体,得到β-(3,4-二羟基苯基)-α(S)-羟基丙酸冰片酯(1),建立了高效液相色谱法测定1脂肪乳中的1。采用C18色谱柱,以甲醇-0.2%甲酸(65︰35)为流动相,检测波长280 nm。1在10.7～685 g/ml浓度范围内线性关系良好。平均回收率为100.3%,RSD为1.34%。

丹参酮注射液联合单硝酸异山梨酯对冠心病心绞痛患者心电图及HCY、APN水平的影响

目的探讨丹参酮注射液联合单硝酸异山梨酯对冠心病心绞痛患者心电图变化及血清同型半胱氨酸(HCY)、脂联素(APN)水平变化的影响,为临床用药提供参考。方法选取2015年1月—2017年2月南阳市中心医院收治的82例冠心病心绞痛患者,随机数字表法分为对照组和观察组,各41例。对照组予以常规治疗,观察组在对照组基础上予以丹参酮注射液+单硝酸异山梨酯,两组均治疗15 d。统计对比两组心电图变化情况、血清HCY、APN水平变化情况、不良反应发生情况。结果观察组心电图总有效率为95.12%,高于对照组的68.29%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组血清HCY水平低于对照组,APN水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组不良反应发生率相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论丹参酮注射液联合单硝酸异山梨酯对冠心病心绞痛患者心电图具有明显改善作用,且可降低血清HCY水平,提高APN水平,安全性较高。

欣诺邦盛治疗冠心病变异型心绞痛的临床疗效及对内皮功能的影响

目的观察欣诺邦盛治疗冠心病变异型心绞痛的临床疗效及对内皮功能的影响。方法选取冠心病变异型心绞痛患者65例,随机分为2组,分别予以欣诺邦盛(丹参酮ⅡA磺酸钠注射液)和异乐定(单硝酸异山梨醇酯)治疗2周。结果(1)欣诺邦盛可明显改善冠心病变异型心绞痛患者的临床症状,总有效率为87.88%,异乐定组总有效率为87.50%,两组间无显著性差异(P>0.05)。(2)欣诺邦盛组血清一氧化氮(NO)含量明显增加,血清内皮素(ET)水平降低,与异乐定组比较,两组无显著性差异(P>0.05)。结论欣诺邦盛能缓解冠心病变异型心绞痛的临床症状,改善其内皮功能,提示欣诺邦盛的作用机制之一是通过增加NO,抑制ET而介导的。