丹参酚酸B盐对内皮素诱导的人肝星状细胞收缩的抑制作用及机制研究

目的以培养的人肝星状细胞(HSC)为研究对象,观察内皮素-1(ET-1)对HSC的收缩作用及丹参酚酸B盐(SA-B)对ET-1的抑制作用,并探讨SA-B抑制HSC收缩的作用环节和可能作用机制。方法采用酶消化、Nycodenz密度梯度离心的方法分离人HSC,以胶原凝胶收缩法观察ET-1对于传代HSC的收缩作用,以及低、中、高3种剂量的SA-B对其不同的干预作用;将ET-1、SA-B直接添加于传代HSC的无血清培养液中,以激光共聚焦显微镜技术观测HSC内钙离子浓度的变化。结果胶原凝胶收缩实验显示,ET-1可诱导HSC收缩(P<0.01);3种剂量的SA-B可明显抑制ET-1诱导的HSC收缩(均P<0.01);加入ET-1后,HSC形态学改变明显,细胞数量减少,但SA-B对这些改变也有抑制。激光共聚焦显微镜下观察,ET-1可刺激细胞内钙离子短暂迅速增加,加入SA-B后,该作用被明显抑制。结论SA-B能显著抑制ET-1诱导的HSC收缩,其抑制收缩的机制与降低HSC内的钙离子浓度有关。SA-B的抑制HSC收缩作用可能是其抗肝纤维化及门脉高压的机制之一。

丹参酚酸B盐对人肝星状细胞内肌细胞增强因子2的影响

以分离和培养的人肝星状细胞(H-HSC)为研究对象,观察H-HSC是否表达肌细胞增强因子2(MEF2)且与转化生长因子β1(TGF-β1)之间的关系,进一步探讨丹参酚酸B盐(SA-B)抗肝纤维化的作用机制,分离H-HSC后,用TGF-β1刺激培养的H-HSC,通过免疫印迹分析及分别转染含有MEF2启动子和I型胶原启动子的luciferase报道基因质粒入H-HSC,检测荧光素酶活性,观察经SA-B干预后MEF2,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及I型胶原表达的变化.结果显示H-HSC能够表达MEF2,且随H-HSC的活化而增加;经TGF-β1刺激的H-HSC内α-SMA的表达、I型胶原启动子的活性和I型胶原蛋白的生成均明显增强,同时MEF2启动子的活性和MEF2A和MEF2C的蛋白表达也明显增强;SA-B对以上这些物质的表达均有明显的抑制作用.上述结果说明MEF2参与了肝纤维化的形成,SA-B抑制H-HSC活化的作用与其抑制TGF-B1在H-HSC内的信号传导与抑制转录因子MEF2A和MEF2C的表达有关.

丹参酚酸B盐联合黄芪多糖预处理对大鼠脑缺血再灌注细胞凋亡及GFAP表达的影响

目的观察丹参酚酸B盐联合黄芪多糖预处理对SD大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡及脑组织中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响,探讨该预处理方式对脑缺血再灌注损伤后梗死灶及缺血半暗带重塑的影响。方法以线栓法建立缺血再灌注模型——大脑中动脉梗塞模型(MCAO)。将138只雄性SD大鼠随机分为6组(各23只):正常组、假手术组、模型(缺血再灌注)组、丹参酚酸B盐组、黄芪多糖预处理组及丹参酚酸B盐联合黄芪多糖预处理组。观察丹参酚酸B盐联合黄芪多糖预处理对大鼠脑缺血再灌注神经功能、脑梗死面积和病理形态学的影响。采用TUNEL法检测缺血半暗带和灶中心区凋亡细胞,采用免疫组化法检测缺血半暗带和灶中心区GFAP表达的变化。结果模型组与假手术组相比,缺血半暗带凋亡细胞及GFAP阳性细胞数目增多;丹参酚酸B盐联合黄芪多糖预处理可不同程度地降低实验性脑缺血大鼠的神经功能评分(Longa评分)、减小梗死灶面积并使脑组织病理形态改变减轻(P<0.05);丹参酚酸B盐联合黄芪多糖预处理组大鼠脑组织缺血半暗带凋亡细胞和GFAP表达减少,而梗死灶中心凋亡细胞和GFAP表达却增多。结论丹参酚酸B盐联合黄芪多糖预处理可能通过调节脑缺血再灌注损伤细胞凋亡和GFAP表达而促进脑重塑。

丹参酚酸B盐对肝星状细胞增殖与TGFβ_1信号转导的影响

本研究旨在观察丹参酚酸B盐(Salvianolic-acid B,SA-B)对HSC增殖及转化生长因子β1(Transforming growth factor β1,TGFβ1)信号转导的影响,以期进一步阐明该成份抗肝纤维化作用的机理.

丹参酚酸B盐对TGF-β1诱导的HK-2上皮-间充质转分化的影响

目的:研究丹参酚酸B盐(salvianolic-acid B,SA-B)对转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞HK2(human human renal proximal tubular cells)转分化的影响。方法:复苏并传代培养HK2细胞,应用不同剂量的TGF-β1或同一剂量作用不同时间诱导HK2细胞发生上皮-间充质转分化(epithelia-mesenchymal transition,EMT),同时给予骨形成蛋白7(BMP-7,阳性对照)(50μg.L-1)和SA-B(1×10-5mol.L-1)干预观察二者对EMT的影响。应用Western印迹法和免疫荧光法检测HK2细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin),α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达。结果:BMP-7显著抑制了TGF-β1诱导的E-cadherin下调(P<0.05)和α-SMA上调(P<0.05);而SA-B显著抑制TGF-β1诱导的α-SMA表达增加(P<0.05),未见其抑制TGF-β1诱导的E-钙黏蛋白下调。结论:SA-B和BMP-7能够抑制TGF-β1诱导的HK2上皮-间充质转分化,其共同的作用是抑制了TGF-β1诱导的α-SMA上调,而SA-B对E-钙黏蛋白的调控作用有待进一步的研究。

丹参酚酸B盐对大鼠肾纤维化的影响

目的:观察丹参酚酸B盐(SA-B)对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为假手术组(12只)、模型组(12只)和治疗组(12只)。模型组大鼠行单侧输尿管结扎(UUO)建立肾小管间质纤维化模型。治疗组在UUO基础上给予SA-B水溶液(12.5 mg.kg-1)灌胃,各组于造模后第14,21天分2批处死。用苏木精-伊红(HE)染色观察肾组织病理学改变,用免疫组织化学方法观察α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测肾组织中角蛋白19 mRNA的表达。结果:SA-B能够显著改善梗阻侧肾脏的病理改变,显著减少肾组织α-SMA的表达,增加角蛋白的表达。结论:SA-B可明显改善UUO所致的大鼠肾间质纤维化,其作用可能是通过阻止小管上皮-成肌纤维细胞转分化和抑制成肌纤维细胞的增生和活化而实现的。

丹参多酚酸盐B对糖尿病大鼠认知功能及凋亡通路的影响

目的观察丹参多酚酸盐B对糖尿病大鼠认知功能的影响,并探讨其具体机制。方法采用随机数字表法将SD大鼠分为对照组、糖尿病组和治疗组3组,每组10只。采用腹腔注射链脲佐菌素6.7ml/kg的方法制作糖尿病大鼠模型。造模成功后,治疗组大鼠给予丹参多酚酸盐B 6.7ml/kg腹腔注射治疗,对照组和糖尿病组大鼠给予0.9%氯化钠注射液6.7ml/kg腹腔注射治疗,3组均为1次/d,连续6周。治疗前后分别测量3组大鼠血糖水平;治疗结束后采用Morris水迷宫检测3组大鼠空间学习和记忆功能;采用Western blot检测3组大鼠海马组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达情况。结果治疗后,与对照组比较,糖尿病组和治疗组大鼠血糖水平均升高,逃避潜伏期均延长,跨台次数均减少,Bax表达水平均升高,Bcl-2表达水平均降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);与糖尿病组比较,治疗组大鼠血糖水平降低,逃避潜伏期缩短,跨台次数增多,Bax的表达水平降低,Bcl-2表达水平升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论丹参多酚酸盐B治疗可明显改善糖尿病大鼠认知功能,其作用机制可能与提高Bax的表达并降低Bcl-2的表达,从而抑制凋亡通路密切相关。

丹参多酚酸盐B对糖尿病大鼠认知功能及突触可塑性的影响

目的 探讨丹参多酚酸盐B(Sal B)是否通过调节突触可塑性蛋白的表达水平改善糖尿病(DM)大鼠学习和记忆障碍.方法 30只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组(CON组,n=10),DM模型组(DM组,n=10),Sal B组(n=10).腹腔注射链脲佐菌素(STZ)55 mg/kg建立DM大鼠模型,当大鼠血糖≥16.7 mmol/L为制模成功.成模后,Sal B组大鼠腹腔注射Sal B 20 mg/kg,CON组和DM组给予同等剂量的柠檬酸盐缓冲剂.连续干预8周,采用Morris水迷宫试验测试实验动物的学习和记忆能力;用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测大鼠海马组织的突触可塑性相关蛋白突触素(SYN)、突触后致密蛋白95(PSD-95)表达水平.结果 Sal B治疗后,Sal B组大鼠血糖水平明显低于DM组(mmol/L:14.03±2.01比23.85±3.28,P<0.05),说明Sal B有降血糖作用.水迷宫试验测试结果显示,DM组大鼠逃避潜伏期长于CON组(s:49.23±4.15比23.48±2.78,P<0.05),穿台次数少于CON组(次:2.15±0.42比6.66±0.89,P<0.05),表明DM大鼠认知功能受损.Sal B治疗后大鼠的逃避潜伏期较DM组降低(s:33.63±3.21比49.23±4.15,P<0.05),穿台次数增加(次:4.55±0.77比2.15±0.42,P<0.05).Western blotting结果显示,DM组大鼠的突触可塑性相关蛋白SYN和PSD-95表达水平明显低于CON组〔SYN(SYN/β-actin):0.24±0.05比0.75±0.07,PSD-95(PSD-95/β-actin):0.15±0.02比0.68±0.09,均P<0.05〕;Sal B治疗后,SYN和PSD-95蛋白表达水平较DM组明显升高〔SYN(SYN/β-actin):0.61±0.09比0.24±0.05,PSD-95(PSD-95/β-actin):0.52±0.08比0.15±0.02,均P<0.05〕.结论 Sal B可改善DM大鼠的认知功能障碍,其机制可能与上调突触可塑性蛋白相关.

肝纤维化大鼠药物血清对肝星状细胞增殖及活性型TGFβ_1含量的影响

目的:观察肝纤维化大鼠药物血清对肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)增殖及活性型TGFβ_1,含量的影响。方法:采用二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)造成大鼠肝纤维化模型,经丹参酚酸B盐(Salvianolic-acid B,SA-B)与虫草多糖(Cordyceps sinensis polysaccharide,CP)联合治疗后采集大鼠血清,通过体外培养HSC,运用比色法、噻唑蓝(MTT)法及生物学检测法来观察药物血清对HSC增殖及活性型TGFβ_1含量的影响。结果:①细胞培养上清乳酸脱氢酶(LDH)活力测定显示,模型大鼠血清和药物血清无细胞毒性,正常大鼠血清组、模型大鼠血清组、药物血清组细胞培养上清LDH活力分别为(95±7.88)U/L,(72.2±11.42)U/L,(48.13±62.16)U/L,正常大鼠血清组与模型大鼠血清组比,差异有统计学意义(P<0.05)。②在对HSC增殖的影响方面,正常大鼠血清与模型大鼠血清之间的差异无统计学意义。与模型大鼠血清比较,药物血清能抑制HSC增殖(P<0.05)。③与模型大鼠血清比较,正常大鼠血清与药物血清均能减少活性型TGFβ_1含量,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:DMN肝纤维化大鼠血清与正常大鼠血清对HSC的影响不尽相同;SA-B合CP能抑制HSC增殖,并能减少活性型TGFβ_1含量。