丹参酮ⅡA、丹参素、川芎嗪和阿魏酸抑制血小板聚集的相互作用类型及配比关系研究

目的:探讨丹参酮A、丹参素、川芎嗪和阿魏酸抑制血小板聚集的相互作用类型及配比关系。方法:采用均匀设计,研究四种成分体外抑制血小板聚集的相互作用类型及配比关系。结果:四种成分抑制ADP诱导大鼠血小板聚集的相互作用类型为协同作用,实验3抑制率最高,四种成分的浓度依次为24.8、37.6、25.0和25.3mg/ml;抑制ADP诱导人血小板聚集的相互作用类型和最优条件与大鼠结果相同。结论:四种成分抑制血小板聚集的相互作用类型为协同作用,四种成分的配比关系为24.8、37.6、25.0和25.3mg/ml。

丹参酮ⅡA对糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1/NF-κBp65表达的影响

【目的】观察活血中药丹参有效成分丹参酮ⅡA对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织转化生长因子-β1(transforming growth factor-1,TGF-β1)和核转录因子-κB(nuclear factor transcription factor-κB,NF-κB)p65 m RNA及相应蛋白的影响,探讨其对DN的防治作用及机制。【方法】选用SD大鼠应用链脲佐菌素(STZ,剂量为40 mg/kg)诱导复制DN大鼠模型。将大鼠随机分为正常组、模型组、丹参酮ⅡA组(剂量为10 mg·kg-1·d-1),各组按相应剂量肌肉注射,于第30后观察各组大鼠体质量、饮水量、24h尿蛋白定量、空腹血糖(Glu)、血肌酐(Cr)、尿素氮(Bun)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)水平;病理切片采用过碘酸雪夫氏染色(Schiff periodic acid staining,PAS)观察肾组织病理改变;采用Real-time PCR法测定各组大鼠肾组织TGF-β1、NF-κB p65 m RNA的表达,应用免疫印迹(Western blot)技术检测TGF-β1及NF-κB p65蛋白表达。【结果】与正常组比较,模型组大鼠体质量显著下降,饮水量及24 h尿蛋白定量显著增多,血清Glu、Cr、Bun水平显著升高,TP、ALB水平显著下降,肾组织出现病理损害,肾组织的TGF-β1、NF-κB p65 m RNA及蛋白表达显著增加(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,丹参酮ⅡA组饮水量下降,24 h尿蛋白定量显著减少,血清Glu、Cr、Bun水平显著下降,TP、ALB水平显著上升,肾组织病理损害减轻,肾组织的TGF-β1、NF-κB p65 m RNA及蛋白表达显著减少(P<0.05或P<0.01)。【结论】丹参酮ⅡA可能通过抑制TGF-β1及NF-κB p65的表达,对肾组织发挥保护作用。

丹参酮ⅡA对骨髓间充质干细胞心肌方向分化间隙连接蛋白43表达的干预作用

【目的】研究丹参酮ⅡA对骨髓间充质干细胞(MSCs)心肌方向分化间隙连接蛋白43(Cx43)表达的干预作用。【方法】体外培养大鼠MSCs,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blotting和免疫荧光技术检测不同组间MSCsCx43表达。【结果】未分化的MSCs上Cx43有弱的表达;5-氮胞甙(5-aza)、正常心肌上清液以及缺氧心肌上清液诱导后Cx43的表达显著升高(P<0.01);丹参酮高剂量组(1.5×10-7 mol/L)Cx43的表达量显著增加(P<0.05),丹参酮低剂量组(1.5×10-8mol/L)也显著升高(P<0.01);经缺氧心肌上清液和丹参酮共同干预后,Cx43表达较对照组均显著升高,但丹参酮低剂量组作用更加显著(P<0.01);缺氧心肌上清液和丹参酮低剂量组联合干预之后Cx43表达接近正常心肌细胞组(P>0.05),各组间荧光强度的变化与RT-PCR和Western blotting的结果一致。【结论】不同浓度丹参酮ⅡA可上调MSCs上Cx43表达,但丹参酮ⅡA和缺氧心肌上清液联合诱导作用更强。

丹参酮ⅡA对HUVEC细胞间缝隙连接的作用

【目的】探讨丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA)对人胎脐静脉上皮细胞(HUVEC)缝隙连接细胞通讯(GJIC)的影响及其机制。【方法】采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测丹参酮ⅡA对HUVEC细胞生长的影响,荧光显微镜观察及流式细胞仪荧光示踪法分析GJIC功能变化,并与阳性对照药全反式维甲酸(ATRA)比较,采用荧光实时定量PCR(q RT-PCR)法分析Cx37、Cx40 m RNA的表达。【结果】丹参酮ⅡA作用HUVEC 24、48 h的半数致死量(IC50)分别为15、8.5μmol/L,32、64μmol/L丹参酮ⅡA作用HUVEC 48 h有明显细胞毒性,抑制率大于70%;选用0、4、8、16、32μmol/L丹参酮ⅡA作用HUVEC48 h,流式细胞仪检测结果显示:各组接受绿色荧光Calcein-AM的细胞数量与总细胞数比值明显升高,其中8、16、32μmol/L组可显著提高GJIC功能(P<0.01)。q RT-PCR分析结果显示:与空白对照组比较,8、16、32μmol/L丹参酮ⅡA组可显著提高Cx37、Cx40 m RNA表达(P<0.05或P<0.01),并有一定的浓度依赖关系。【结论】丹参酮ⅡA能够提高Cx37、Cx40 m RNA表达,这可能是丹参酮ⅡA增强上皮细胞GJIC功能的机制之一。