丹参酮提取物调控JAK2/STAT3通路对AD大鼠炎症反应、学习记忆能力及海马神经元凋亡的影响

分析丹参酮提取物(Tan E)调控Janus激酶2/信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)通路对阿尔茨海默病(AD)大鼠炎症反应、学习记忆能力及海马神经元凋亡的影响。方法 选择30只健康SD大鼠,分为正常对照组、AD组、Tan E低剂量组、高剂量组及JAK2/STAT3通路激活剂(DUSP19)组。比较各组大鼠炎症反应、学习记忆能力及海马神经元凋亡情况,比较各组大鼠海马脑组织中JAK2/STAT3通路蛋白表达情况。结果 AD组白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平相较于正常对照组明显升高(P<0.05);Tan E低、高剂量组IL-6、TNF-α、IL-1β水平相较于AD组明显下降;高剂量组IL-6、TNF-α、IL-1β水平相较于低剂量组明显下降(P<0.05)。AD组穿越平台次数相较于正常对照组明显降低(P<0.05);Tan E低、高剂量组穿越平台次数相较于AD组升高,且高剂量组学习记忆能力相较于低剂量组升高(P<0.05)。AD组神经元细胞凋亡率相较于正常对照组明显升高,神经元细胞数目明显下降;an E低、高剂量组神经元细胞凋亡率相较于AD组明显下降,神经元细胞数目明显增加(P<0.05)。AD组JAK2、STAT3表达相较于正常对照组明显升高(P<0.05);Tan E低、高剂量组JAK2、STAT3表达相较于AD组明显降低(P<0.05);DUSP19组JAK2、STAT3表达相较于Tan E剂量组明显升高(P<0.05)。结论 Tan E可有效提高AD大鼠模型学习记忆能力,改善脑组织炎症性反应并抑制其海马区神经元凋亡,具有一定的神经元保护作用。

隐丹参酮及丹参酮提取物在大鼠体内药动学比较研究

目的 建立LC—MS—MS测定大鼠血浆隐丹参酮的浓度，比较隐丹参酮单体及丹参酮提取物在大鼠体内的药动学特点，评价丹参酮提取物中其他成分对隐丹参酮药动学的影响。方法 大鼠分别ig给予隐丹参酮5．7mg·kg^-1或丹参酮提取物（相当于隐丹参酮5．7mg·kg^-1）后，眼底静脉丛取血，分离血浆，经甲基叔丁基醚液-液萃取后进行LC—MS—MS分析，测定血浆隐丹参酮浓度，经3P97程序处理数据。结果 隐丹参酮在0．1—50μg·L^-1内线性良好，最低检测限为0．1μg·L^-1，方法回收率为94．0％～103．8％。大鼠灌胃隐丹参酮和丹参酮提取物后的药一时曲线分别符合一房室和二房室模型。灌胃丹参酮提取物后，与灌胃隐丹参酮相比，前者测得的隐丹参酮Pmax和AUC0-t分别比后者增大3．4和3．5倍。结论 本实验建立的LC—MS—MS测定法，专属、准确、灵敏，适用于隐丹参酮单体和丹参酮提取物中隐丹参酮的药动学研究。研究结果表明，脂溶性丹参酮成分可促进隐丹参酮的吸收和／或转化，提高隐丹参酮的生物利用度，对认识丹参酮成分的协同作用和临床药效提供了依据。

丹参中丹参酮提取物纯化工艺的研究

目的研究丹参中丹参酮提取物大孔树脂吸附法纯化工艺,确定最佳工艺条件。方法采用大孔树脂吸附法纯化丹参中丹参酮提取物,以隐丹参酮和丹参酮ⅡA为考核指标,确定其最佳纯化工艺。结果丹参中丹参酮提取物最佳纯化工艺为X-5型大孔树脂湿法装柱,上样液质量浓度0.2 g生药/mL,上样体积流量2 mL/min,上样体积4.5BV,吸附时间2 h,洗脱体积流量2 mL/min,水洗脱体积4 BV,洗脱剂90%乙醇,洗脱剂用量8 BV,得到丹参酮的纯度为54.78%,有效成分质量分数达到50%以上。结论该工艺具有操作简单、节省溶剂等优点,具有较好的推广应用前景。

丹参酮提取物羟丙基-β-环糊精包合物的工艺优化

目的优化丹参酮提取物羟丙基-β-环糊精包合物制备工艺。方法在单因素试验的基础上,选择辅料用量、包合温度、超声时间为考察因素,以丹参酮提取物包封率及包合物载药量为综合评价指标,优化丹参酮提取物制备工艺,并采用红外光谱法及指纹图谱技术对包合物进行评价。结果包合物最佳制备工艺为:羟丙基-β-环糊精用量为提取物6倍量,包合温度40℃,超声时间35 min,提取物包封率75.5%,载药量12.1%,包合前后提取物成分基本一致。结论丹参酮提取物羟丙基-β-环糊精包合物包封率高,水溶性好,适合工业生产应用。

丹参酮提取物对类风湿性关节炎模型大鼠的抗炎作用机制研究

目的 探究丹参酮提取物对类风湿性关节炎模型大鼠的抗炎作用机制。方法 选取20只SD健康雄性大鼠,进行类风湿关节炎模型建立并分为模型组和丹参酮组。对丹参酮组大鼠使用丹参酮提取物进行灌胃处理,模型组大鼠使用生理盐水进行灌胃处理。对两组大鼠进行足体积测量、关节炎指数评价,酶联免疫吸附试验法检测血清SOD、MDA、TNF-α、IL-6相对表达量。结果 与建模前比较,模型组大鼠建模后足体积、关节炎指数均上升;丹参酮组大鼠足体积、关节炎指数均低于模型组,高于建模前(P<0.05);在建模后1天、第7天、第14天、第20天,模型组大鼠SOD相对表达量均低于建模前,丹参酮组大鼠SOD相对表达量均高于模型组,低于建模前(P<0.05);与建模前比较,模型组大鼠与丹参酮组大鼠建模后MDA相对表达量均呈现上升状态,且低于模型组(P<0.05);在建模后第1天、第7天、第14天、第20天,模型组大鼠IL-6、TNF-α相对表达量高于建模前,丹参酮组大鼠IL-6、TNF-α相对表达量低于模型组,高于建模前(P<0.05)。结论 丹参酮提取物对于类风湿性关节炎模型大鼠的病情能起到良好的改善作用,并且能够通过调控机体内血清SOD、MDA、IL-6、TNF-α表达起到抗炎作用。

丹参酮ⅡA和隐丹参酮近红外光谱的2D-COS解析及其在丹参酮提取物近红外模型中应用

采用二维相关光谱(2D-COS)技术,以氘代氯仿为溶剂,解析了丹参酮ⅡA和隐丹参酮标准品的近红外光谱(NIR)。丹参酮ⅡA和隐丹参酮二维相关切片谱在1600~1800,1900~2230和2300~2400 nm处有特征吸收,其中丹参酮ⅡA在1640和2140 nm处有不同于隐丹参酮的呋喃环双键一级倍频和组合频吸收,1696 nm为丹参酮ⅡA和隐丹参酮分子中甲基伸缩振动二级倍频,1726和1740 nm处吸收为丹参酮ⅡA和隐丹参酮环己烯亚甲基伸缩振动二级倍频,2146和2220 nm为丹参酮ⅡA和隐丹参酮苯环C-C伸缩振动与C-H伸缩振动的组合频,2300~2400 nm处一系列峰为丹参酮ⅡA和隐丹参酮甲基伸缩振动与弯曲振动组合频吸收。以丹参酮提取物为载体,以丹参酮ⅡA和隐丹参酮光谱解析特征波段及组合间隔偏最小二乘(SiPLS)筛选特征波段分别建立偏最小二乘(PLS)定量模型,模型的决定系数R^(2)均大于0.9,校正均方根误差(root mean of square error of calibration,RMSEC)和交叉验证均方根误差(RMSECV),预测均方根误差(RMSEP)均较小。结果表明,2D-COS技术解析特征波段与SiPLS波段筛选所建PLS模型均稳定。2D-COS技术使近红外定量模型更具解释性,可解析出结构差异特征吸收,同一波段可实现结构类似物的同时定量测定。

丹参酮提取物对阿尔茨海默病模型大鼠的干预效果及作用机制研究

目的:探究丹参酮提取物对阿尔茨海默病模型大鼠的干预效果及作用机制。方法:选取40只SD健康雄性大鼠,随机选取10只作为正常组,其余30只建立阿尔兹海默病模型,并分为模型组、低剂量组、高剂量组。低剂量组、高剂量组大鼠分别使用10 g/L、30 g/L丹参酮提取物溶液进行灌胃,正常组、模型组大鼠使用0.9%氯化钠溶液进行灌胃。对各组大鼠学习记忆能力进行测试,酶联免疫吸附实验法检测白细胞介素(IL)-4、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,流式细胞仪检测各组大鼠海马区细胞凋亡情况,Western blotting法检测Bcl-2、Bax、caspase-3表达。结果:模型组逃避潜伏期长于正常组(P<0.01),穿越平台次数低于正常组(P<0.01);高剂量组大鼠逃避潜伏期低于模型组和低剂量组(P<0.01),穿越平台次数多于模型组和低剂量组(P<0.01和P<0.05)。hs-CRP、TNF-α、IL-4水平由高到低的排序依次均为:模型组、高剂量组、低剂量组和正常组(P<0.01)。4组之间不同时间点海马区细胞凋亡率由高到低的排序依次为:模型组、低剂量组、高剂量组和正常组(P<0.01)。Bcl-2的表达量在4组之间由高到低的排序依次为:正常组、高剂量组、低剂量组和模型组(P<0.01);Bax与caspase-3的表达量在4组之间由高到低的排序依次均为:模型组、低剂量组、高剂量组和正常组(P<0.01)。结论:使用丹参酮提取物对阿尔兹海默病模型大鼠进行干预,能够提升阿尔兹海默病大鼠学习记忆能力,减轻脑组织炎症反应,调控细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3相对表达量,抑制阿尔兹海默病大鼠海马区细胞凋亡,具有一定神经元保护作用。

基于一测多评法的丹参酮提取物质量控制

目的:建立丹参酮提取物中二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA 4种丹参酮类成分的一测多评法,探讨一测多评法在丹参酮提取物质量控制中的应用。方法:采用高效液相色谱法,以丹参酮IIA为内标物,计算二氢丹参酮I、隐丹参酮和丹参酮I相对于丹参酮IIA的相对校正因子和相对保留时间,利用相对校正因子计算丹参酮提取物中4种丹参酮类成分的含量,实现一测多评;同时采用外标法测定4种丹参酮类成分的含量,并比较二者差异,评价一测多评法在丹参酮提取物质量控制应用中的准确性和科学性。结果:二氢丹参酮I、隐丹参酮和丹参酮I相对于丹参酮IIA的相对校正因子分别为1.55、1.12和1.28;各成分的相对校正因子和相对保留时间在不同实验条件下的系统耐用性良好;一测多评法计算结果与外标法测定结果无显著差异。结论:以丹参酮IIA为内标物,建立的丹参酮提取物中4种丹参酮类成分的一测多评方法简便、准确、可靠,可用于丹参酮提取物的多成分质量控制。

丹参酮提取物的急性毒性及抗炎试验研究

目的:验证丹参酮提取物的急性毒性和抗炎效果,为临床安全用药提供依据。方法:本研究通过对昆明小鼠灌胃丹参酮提取物,分析丹参提取物所含毒性程度和实际抗炎成效。结果:小鼠服用丹参酮提取物后,未产生严重的负性反应和副作用,表明丹参酮提取物属于无毒物质。通过构建多种临床急性炎症模型,包括耳发炎肿胀模型、血管通透性增加以及足趾发炎肿胀,并以纸片肉芽肿炎症反应作为慢性炎症反应模型,分析丹参提取物的实际抗炎效果。发现丹参酮提取物对3种急性炎症模型均有一定的抑制作用,同时,其对慢性炎症反应亦有显著成效。结论:提示丹参酮提取物对急性以及慢性炎症反应皆有较好的抑制作用。

丹参酮提取物对奶牛乳腺炎常见致病菌抑菌试验

在奶牛养殖期间,最容易发生的疾病便是奶牛乳腺炎,基于牛奶的安全性考虑,在奶牛乳腺炎的治疗中一般不使用抗生素、西药等,而是采用中药制剂进行治疗。在众多治疗奶牛乳腺炎的纯中药制剂中,目前临床多采用丹参酮提取物,相关临床研究者对此经过体外抑菌试验,从而对丹参酮提取物的最低抑菌质量浓度(MIC)进行明确,在该项试验中积极引入以下3种试验方法:试管二倍稀释法、管蝶法、琼脂平板法。以上研究结果表明,丹参酮提取物具备很强的抑制链球菌属和枯草芽孢杆菌功效,其检测所得的最低抑菌质量浓度值均在125 mg·mL-1以内,同时还具备一定抑制一般致病性肠杆菌和金黄色葡萄球菌的功效,抑菌效果最强的为链球菌属&枯草芽孢杆菌,其次属于金黄色葡萄球菌,抑菌效果处于中等范围,抑菌效果相对较差的为肠杆菌。

丹参酮提取物与相应主要单体在前列腺屏障转运的比较研究

该研究考察了丹参酮提取物(tanshinone extract,Tan E)中主要单体成分丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA,TanⅡA)和隐丹参酮(cryptotanshinone,CTS)透过前列腺屏障以及在前列腺组织中的分布情况,并与等剂量相应单体成分分别给药后的情况进行了比较。采用人前列腺上皮细胞RWPE-1细胞体外培养21 d,建立前列腺屏障转运模型,考察TanⅡA和CTS在屏障模型上的透过率。SD大鼠灌胃给予Tan E(700 mg·kg^(-1))、CTS(29 mg·kg^(-1))、TanⅡA(50 mg·kg^(-1))后于2、4、8、12、24 h采集血浆及前列腺组织样品,测定生物样本中的TanⅡA和CTS的浓度。在细胞单层转运模型上,提取物组各时间点的CTS、TanⅡA累积转运量均高于相对应的单体给药组(P<0.01)。在动物水平上,Tan E给药后大鼠血浆以及前列腺组织中的TanⅡA及CTS浓度高于相应单体给药组。该研究显示Tan E中的共存成分对其主要药理活性单体成分TanⅡA及CTS透过前列腺屏障有促进作用,为丹参用于临床治疗前列腺相关疾病提供理论基础和实验依据。

超高效液相色谱法同时测定丹参酮提取物中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮Ⅱ_A

目的：建立超高效液相色谱法同时测定丹参酮提取物中特征性的3个脂溶性成分（隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA）含量。方法：采用Waters Acquity UPLC BEH Shield RP18色谱柱（1.7μm,2.1 mm×100 mm）,预柱为Phenomenex SecurityGuard C18Cartridges Polar-RP（4 mm×3.0 mm）,以乙腈（A）-5%乙腈水溶液（含0.1%甲酸,pH 2.5）（B）为流动相,梯度洗脱（0～5 min,52%A→70%A;5～7 min,70%A→80%A;7～10 min,80%A→52%A;10～12 min,52%A）,流速0.25 mL·min-1,柱温35℃,进样量5μL,检测波长269 nm。结果：隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA3个被测成分在线性范围内均具有良好的线性关系（r＞0.999）;平均回收率（n=6）分别为96.7%（RSD=1.3%）,96.4%（RSD=0.94%）,98.5%（RSD=1.2%）;丹参酮提取物中主峰与其他共存组分达到基线分离。结论：与常规液相色谱法比较,本方法分离效率高,重复性好,可作为实验室方法改进的参考依据,为丹参酮提取物的质量标准的提升做准备。

丹参酮类提取物的提取工艺优化

本试验采用乙醇回流法提取丹参中酮类提取物,以隐丹参酮和丹参酮ⅡA为评价指标,采用L9(34)正交试验优选最佳提取工艺。结果表明,丹参酮类提取物最佳提取工艺为加6倍于药材量的70%乙醇,提取1次,提取时间0.5 h。

Box-Behnken响应面法和反向传播神经网络优化丹参酮类提取物的渗漉工艺

目的:优化丹参酮类提取物的渗漉工艺。方法:以隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA含量为指标,单因素考察乙醇浓度、渗漉速度、浸渍时间、溶剂用量和药材粒径对丹参酮类提取物渗漉工艺的影响,选取乙醇浓度、溶剂用量和药材粒径3个因素设计响应面试验,采用熵权法计算综合评分,运用Box-Behnken响应面法和反向传播(BP)神经网络对提取工艺进一步优化,并进行工艺验证。结果:Box-Behnken响应面法筛选的最优工艺参数为:最粗粉加8倍量95%乙醇渗漉;BP神经网络优选的最优工艺参数为:粗粉加7倍量95%乙醇渗漉。BP神经网络优化工艺实际综合评分平均值较响应面法实际综合评分平均值高。结论:丹参酮类提取物渗漉的最优工艺为:粗粉加7倍量95%乙醇渗漉,优选出的丹参酮类提取物渗漉工艺稳定可行,为丹参酮类提取物渗漉工艺提供了依据。

正交试验结合HPLC指纹图谱优选丹参酮类提取物的工艺

目的:优化丹参酮类提取物的工艺。方法:应用HPLC指纹图谱技术,以三个主要成分的含量(隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA)为次要指标,以HPLC特有峰总面积和干浸膏得率为主要评价指标,选取料液比、提取时间和乙醇浓度三个因素,采用L9(34)正交试验来确定最适合的工艺。结果:最佳提取方法:以8倍量的95%的乙醇为溶剂,提取3次,一次0.5 h。结论:优选得到的丹参酮类提取物的提取工艺稳定可行,不仅为丹参酮的产业化的提取提供了可借鉴的经验,而且为丹参相关制剂的进一步开发利用提供了理论依据。

大生产中丹参提取物制备工艺优选

目的：对2010年版《中国药典》一部中丹参的2种提取物的制备工艺参数进行讨论,以便其更适应大生产的需要。方法：采用单因素试验法,以隐丹参酮、丹参酮ⅡA的含量为指标,探讨丹参酮提取物原料的前处理方法;以固含物总量、丹酚酸B含量为指标考察丹参水提的最佳温度;以固含物总量、丹酚酸B含量、指纹图谱为指标确定丹参水提的原材料;运用指纹图谱技术确定丹参水提液的最佳浓缩温度。结果：丹参酮提取物原料的前处理方式可由粗粉变更为切成1~2 cm的小段;丹参总酚酸提取物的原材料可采用丹参酮提取物的药渣,提取温度可由80℃修订为100℃,浓缩温度可由60℃修订为80℃。结论：优选的工艺条件稳定可行,可为丹参提取物的大生产参数修订提供实验依据。