丹参-葛根药对成分、药理及临床应用的研究进展

丹参-葛根是《施今墨对药》中收载的常用药对,能够活血化瘀,祛瘀生新。丹参-葛根药对的主要有效成分包含丹参酮ⅡA、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹酚酸B、葛根素等,具有保护心肌、改善脑缺血再灌注损伤、抑制动脉粥样硬化、调节免疫、抗炎、抗氧化等药理作用,在临床应用广泛,多用于冠心病、糖尿病周围神经病变、急性脑梗死等的治疗,并且取得了良好的疗效,未来具有较大的研究和开发潜力。本综述结合国内外相关文献,从化学成分、药理作用、临床应用这3个方面对丹参-葛根药对的研究情况进行系统总结、分析,以期为此药对治病的科学内涵的阐释及进一步研究、应用提供依据。

丹参-葛根药对中7种成分的含量测定及其配伍影响考察

目的:建立HPLC法同时测定丹参-葛根药对中7种成分(葛根素、大豆苷、大豆苷元、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮Ⅱ_(A))的含量,考察药对不同配比情况下7种成分溶出率的变化。方法:采用Diamonsil(Ⅱ)C_(18)ODS(250 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长为250 nm;流速:1.0 ml·min^(-1);柱温:30℃;进样量:10μl。结果:7种成分在一定质量范围内与峰面积的线性关系良好(r≥0.999 3),平均加样回收率为98.3%~99.2%,RSD≤1.0%(n=6)。按不同比例配伍(7∶3、2∶1、1∶1、4∶3、3∶4、1∶2)的药对,7种成分溶出率均低于单味药材提取液,但配伍比例为1∶1时7种成分溶出率高于其他配伍比例。结论:所建立的含量测定方法简便、准确、重复性好。丹参-葛根药对1∶1配伍最有利于有效成分溶出。

基于UPLC-Q-Orbitrap-HRMS技术的葛根-丹参药对化学成分分析

目的采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Orbitrap-HRMS)技术分别对以水和50%甲醇溶液为溶剂提取的葛根-丹参药对样品进行化学成分分析。方法采用Thermo Scientific Hypersil GOLD C_(18)色谱柱(150 mm×2.1 mm,1.9μm),以0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(-1),柱温为30℃。采用加热电喷雾离子源(H-ESI),正负离子检测模式。结果从水提和50%甲醇醇提样品溶液中均鉴定出104个化合物,其中103个化合物为共有成分,各有1个差异性成分,分别为水提样品中的刺槐苷与50%甲醇醇提样品中的降丹参酮(或其同分异构体)。共鉴定出的105个化合物,包括黄酮类成分36个、苯丙素类成分20个、萜类成分24个和其他类成分25个。结论本研究首次采用UPLC-Q-Orbitrap-HRMS技术对葛根-丹参药对的主要成分进行鉴定,可为葛根-丹参药对的药效成分研究提供科学依据。

丹参-葛根药对对糖尿病大鼠血管内皮保护作用及机制研究

目的观察丹参-葛根药对对糖尿病大鼠血管内皮的保护作用及其相关机制。方法高脂饲料喂养大鼠给予尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病血管病变模型,将造模成功大鼠随机分为模型对照组,药对高、中、低剂量组,丹参组,葛根组,阳性对照组,连续给药70天。观察实验各组药物干预后大鼠体重及一般情况;采用全自动生化分析仪检测大鼠血糖、血脂含量;采用ELISA法检测大鼠血清胰岛素、AGEs、SOD、GSH-Px含量,血浆NOS、ET-1含量,主动脉匀浆AGEs、oxLDL含量;采用化学比色法检测大鼠血清MDA含量,血浆NO含量;HE染色观察冠状动脉组织病理学改变;免疫组织化学染色观察主动脉ET-1蛋白表达。结果与模型组比较,丹参-葛根药对可降低血糖及血脂(CHOL、TG、LDL-C)水平,降低血清胰岛素、AGEs、MDA含量,降低血浆ET-1含量,降低主动脉匀浆AGEs、oxLDL含量,升高血清SOD、GSH-Px含量,升高血浆NO、NOS含量,减轻冠状动脉组织病变,降低主动脉组织ET-1蛋白表达,其效果好于单药。结论丹参-葛根药对能减轻糖尿病大鼠血管病变,其机制可能与减轻氧化应激,调节内皮细胞ET-NO系统有关。

基于网络药理学方法探索葛根-丹参药对治疗冠心病心绞痛的作用机制

目的 基于网络药理学探索葛根-丹参药对治疗冠心病心绞痛的作用机制。方法 借助多个在线数据库筛选并预测葛根-丹参药对活性成分及治疗治冠心病心绞痛的作用靶标。借助STRING数据库构建靶蛋白相互作用(PPI)网络;通过Uniprot数据库获取靶标蛋白的基因名称,利用DAVID在线工具进行潜在基因的GO分析及KEGG富集通路分析。结果从TCMSP数据库筛选出葛根-丹参药对的69种活性成分。PPI网络中包含72个蛋白,涉及IL6、FOS、CASP3、EGFR等关键蛋白。GO富集分析得到GO条目112个,以分子功能为主。KEGG富集通路分析得到119条信号通路。结论 葛根-丹参药对主要通过调控炎症反应、细胞增殖凋亡等途径发挥治疗冠心病心绞痛的作用。

丹参-葛根提取物对氧糖剥夺/复氧损伤人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的保护作用

目的:基于氧化应激和凋亡探究丹参-葛根提取物对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤SH-SY5Y细胞的保护作用。方法:采用水提法制备不同配伍比例丹参-葛根提取物,体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞并建立OGD/R损伤模型,采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法筛选最佳配伍比例提取物用于后续实验。将SH-SY5Y细胞分为空白组、OGD/R组和丹参-葛根(SP)提取物低、中、高剂量组(10、30、100 mg·L^(-1)),除空白组外,其余各组细胞在氧糖剥夺4 h后迅速复氧12 h进行OGD/R造模。采用CCK-8法检测细胞存活率,显微条件下观察细胞形态,分光光度计法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量,2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法(DCFH-DA)检测细胞活性氧(ROS)水平,JC-1法检测线粒体膜电位,Hoechst 33342染色法观察细胞核形态,流式细胞术结合异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染检测细胞凋亡。结果:丹参-葛根2∶1配伍时SH-SY5Y细胞的存活率最佳,与空白组比较,OGD/R组细胞形态破损,细胞上清液LDH释放率、细胞ROS水平和MDA含量显著升高(P<0.01),SOD活性和GSH水平显著降低(P<0.01),线粒体膜电位下降,细胞凋亡率升高(P<0.01);与OGD/R组比较,SP提取物各给药组可呈浓度依赖性地提高细胞存活率,改善细胞形态,降低细胞上清液LDH释放率(P<0.01);SP提取物30、100 mg·L^(-1)组可明显降低细胞内ROS水平,明显提高细胞中SOD活性和GSH水平(P<0.05,P<0.01),100 mg·L^(-1)可明显降低细胞内MDA含量(P<0.05);此外,丹参-葛根提取物给药后可提高线粒体膜电位,30、100 mg·L^(-1)可显著降低细胞凋亡率(P<0.01)。结论:丹参-葛根提取物2∶1配伍对OGD/R损伤的SH-SY5Y细胞有较好的保护作用,这可能与其降低细胞氧化损伤,抑制细胞凋亡相关。