丹寿汤含药血清对抗心磷脂抗体引起的内皮细胞损伤的影响

目的探讨丹寿汤含药血清对抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody, aCL)致人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)损伤的影响及作用机制。方法制备丹寿汤大鼠含药血清,将HUVEC为5组:空白血清对照组、损伤模型组、低浓度含药血清处理组、中浓度含药血清处理组、高浓度含药血清处理组。10%含药血清预处理24 h后,加入aCL诱导建立细胞模型。细胞增殖检测试剂盒(cell counting kit-8, CCK-8)分析各组细胞的增殖能力,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测各组细胞Toll样受体4(Toll-like receptor4, TLR4)、髓样分化因子88(mydoid differentiation factor88, MyD88)、胞核p65的表达,酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测各组细胞上清液中白细胞介素1β(interleukin1β, IL-1β)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF-α)、白细胞介素6(interleukin6, IL-6)表达水平,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)结合Western Blot检测组织因子(tissue factor, TF)、血管细胞黏附分子1(vascular cell adhesionmolecule-1, VCAM-1)。结果丹寿汤含药血清可抑制aCL引起的细胞活力下降,抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路活性,抑制炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α释放,降低TF、VCAM-1 mRNA和蛋白表达。结论丹寿汤含药血清对aCL所致HUVEC损伤的保护作用可能与其抗炎及抗黏附作用有关。

丹寿汤对妊娠丢失大鼠Th17/Treg细胞平衡的调节作用

目的探讨丹寿汤对妊娠丢失大鼠辅助性T细胞17(helper T cells17,Th17)/调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)失衡的影响。方法将受孕SD大鼠按照随机数字法均分为空白对照组、阴性对照组、模型组、丹寿汤干预组(低、中、高)。分别于孕8 d和孕12 d背部皮下多点注射抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody,aCL)建立妊娠丢失大鼠模型,丹寿汤干预组自受孕第1天起灌胃丹寿汤,2次/d,剩余组大鼠灌胃等体积生理盐水,孕15 d处死孕鼠取材。胚胎称重,计算胚胎吸收率,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中白介素10(interleukin 10,IL-10)、转化生长因子β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)、白介素17A(interleukin 17A,IL-17A)、白介素6(interleukin6,IL-6)水平变化,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)结合蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测胎盘组织中维甲酸相关核孤儿受体γt(retinoic acid-related orphan nuclear receptorγt,RORγt)、叉头状螺旋转录因子3(Foxp3)表达。结果与模型组比较,丹寿汤显著抑制RORγt表达,降低血清IL-17A、IL-6水平,促进Foxp3表达,升高血清IL-10、TGF-β1水平,增加胚胎重量,降低胚胎吸收率,呈剂量依赖性。结论丹寿汤能够抑制胚胎吸收,提高妊娠成功率,其作用机制可能与调节Th17/Treg平衡失调有关。

丹寿汤正交t值分析及其不同配伍对抗心磷脂抗体致复发性流产的影响

目的:研究丹寿汤及其不同配伍对抗心磷脂抗体阳性流产动物模型胚胎吸收率的影响,探讨丹寿汤的最佳组合对复发性流产的防治作用。方法:①将120只孕10周龄SD孕鼠随机分为12组,每组10只,模型制备按照本课题组的改良方法复制,药物按正交t值法[1]L12(26)的二水平正交表进行分组,自孕第1天起,灌胃15d,处死取材。②将80只孕鼠随机分为8组,每组10只,药物按正交t值法L8(2n)的二水平正交表进行分组,实验过程及疗效观察指标同上。结果:①菟丝子、续断、丹参明显降低模型鼠的胚胎吸收率(P<0.05)为主药。②辅药桑寄生能明显降低模型鼠的胚胎吸收率(P<0.05)。阿胶与桑寄生作用协同,降香与阿胶作用拮抗。结论:丹寿汤组合为菟丝子、续断、丹参、桑寄生、阿胶时,模型鼠的胚胎吸收率最低。

丹寿汤对不明原因复发性流产白介素-16表达水平及蜕膜化调控的意义

目的 探索肾虚血瘀型不明原因复发性流产(URSA)患者与正常女性孕早期外周血中的白介素-16(IL-16)水平及蜕膜化水平的差异,并探究丹寿汤对URSA患者IL-16水平及蜕膜化水平的影响进而分析其治疗URSA的作用机制。方法 选取肾虚血瘀型URSA早孕患者60例为观察组,随机分为中药观察组和西药观察,每组各30例;选取同期无自然流产病史早孕女性30例为对照组。中药观察组予中药汤剂丹寿汤连续口服4周,西药观察组予依诺肝素钠注射液连续皮下注射4周,对照组不予药物干预。运用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各组治疗前(孕5周)后(孕9周)血清IL-16、蜕膜标志物催乳素(PRL)和胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)的表达水平;超声检查监测各组孕期胚胎发育情况;观察各组孕12周妊娠结局及各观察组治疗前后中医证候评分。结果 治疗前,对照组IL-16、PRL、IGFBP-1水平均高于中药观察组和西药观察组,且差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,各组IL-16水平均较治疗前下降,且治疗前后对比差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,各组PRL、IGFBP-1水平均较治疗前升高,且治疗前后对比差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,中药观察组与西药观察组中医证候总评分均较治疗后下降,中药观察组低于西药观察组,且两组对比差异均有统计学差异(P<0.05);3组进行孕12周妊娠结局随访,三组持续妊娠率基本持平,中药观察与对照组持续妊娠率略高于西药对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 孕早期(5周)胚胎着床期,正常孕妇外周血IL-16水平明显高于URSA患者,且PRL与IGFBP-1水平高于URSA患者,提示胚胎着床期IL-16水平与子宫内膜蜕膜化水平呈正相关,而随着妊娠的发展IL-16水平与子宫内膜蜕膜化水平呈负相关。丹寿汤可降低URSA患者IL-16水平,促进子宫内膜蜕膜化水平,改善URSA妊娠结局,提高持续妊娠率。

基于PI3K/Akt/eNOS通路分析丹寿汤通过靶向miR-146a-5p调控子宫内膜异位症的作用机制

目的:探讨丹寿汤通过miR-146a-5p调控磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/内皮一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)通路影响子宫内膜异位症的作用机制。方法:选取异位子宫内膜基质细胞ecESC,并转染miR-146a-5p inhibitor对照品和miR-146a-5p inhibitor,采用不同浓度的丹寿汤(0μmol·L^(-1)、50μmol·L^(-1)、100μmol·L^(-1)、150μmol·L^(-1)和200μmol·L^(-1))进行干预,CCK-8试剂盒检测细胞增殖;细胞划痕考察细胞迁移能力;Transwell实验考察细胞的侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR测定miR-146a-5p的表达;Western blot检测p-PI3K、p-AKT、p-eNOS的蛋白表达水平。结果:丹寿汤能明显抑制ecESCs增殖、迁移和侵袭并促进凋亡且呈剂量依赖性(P<0.05)。丹寿汤可能通过上调miR-146a-5p抑制ecESCs增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡(P<0.05)。丹寿汤可明显降低p-PI3K、p-AKT、p-eNOS的mRNA及蛋白表达水平(P<0.05),而miR-146a-5p inhibitor则逆转了丹寿汤对p-PI3K、p-AKT、p-eNOS mRNA及蛋白表达的影响(P<0.05)。结论:丹寿汤通过miR-146a-5p调控PI3K/Akt/eNOS通路调节子宫内膜异位症细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡,缓解子宫内膜异位症。

丹寿汤对抗磷脂抗体致妊娠丢失动物模型胎盘组织血小板活化因子受体、血管内皮生长因子mRNA表达的影响

目的探讨中医药对血管细胞因子的重要调节作用。方法选择ACA阳性的反复自然流产患者及系统性红斑狼疮(SLE)患者,对其以及健康人的血清进行提取,制备蛋白液。将10周龄SD孕鼠80只随机分为ACA阳性妊娠丢失动物模型组(40只),LA阳性妊娠丢失动物模型组(40只)。将两组孕鼠分别随机分为模型组、补肾活血组、西药组、空白孕鼠组,每组10只。自孕0天起,补肾活血组、西药组给予丹寿汤浓煎液、肠溶阿司匹林溶液灌胃,空白孕鼠组、模型组予生理盐水灌胃作对照。期间模型组、补肾活血组、西药组分别于孕8天、孕12天背部多部位皮下注射15mg·(ml·d)-1ACA或LA蛋白液,空白孕鼠组予正常人血清蛋白液15mg·(ml·d)-1多部位皮下注射作对照,至孕15日处死取材,采用RT-PCR技术检测PAF-R及VEGFmRNA。结果空白组PAF-RmRNA的PCR产物电泳条带显示几乎无基础水平的PAF-RmRNA表达,模型组电泳条带最亮,PAF-RmRNA表达积分光度明显增加,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05);西药组电泳条带亮度较模型组减弱,PAF-RmRNA表达积分光度明显减少,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);补肾活血组与模型组比较,电泳条带减弱,PAF-RmRNA表达积分光度明显减少,差异有统计学意义(P<0.05),补肾活血组与西药组比较,PAF-RmRNA表达积分光度减少,差异无统计学意义(P>0.05)。空白组VEGFmRNA的PCR产物电泳条带较亮,有较多VEGFmRNA的表达,模型组电泳条带最亮,VEGFmRNA表达积分光度明显增加,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05),西药组与模型组比较,电泳条带亮度减弱,VEGFmRNA的表达积分光度减少,差异无统计学意义(P>0.05),补肾活血组与模型组比较,电泳条带亮度更弱,VEGFmRNA表达积分光度明显减少,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05),补肾活血组与西药组比较,VEGFmRNA的表达积分光度减少,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论丹寿汤通过降低PAF-RmRNA及VEGFmRNA的表达,发挥血管内皮保护作用,改善胎盘微循环,为应用于临床提供了可靠的实验基础及理论依据。

丹寿汤对抗磷脂抗体致妊娠丢失的作用机制

目的:探讨补肾活血方-丹寿汤对抗磷脂抗体致妊娠丢失的作用机制。方法:将100只10周受孕SD大鼠随机分为补肾活血组、补肾组、活血组、模型组和空白孕鼠组,自孕1天起,补肾活血组、补肾组、活血组分别予丹寿汤、补肾方、活血方灌胃,模型组和空白孕鼠组予生理盐水灌胃作对照,其间分别于孕8天、孕12天多部位皮下注射15mg/ml纯化后ACA蛋白液及LA蛋白液,直至孕第15天处死取材。结果:与模型组相比,补肾活血组能明显降低APA水平,降低胚胎吸收率,增加胚胎重量,有显著性差异(P<0.05),而补肾组、活血组无显著性差异(P>0.05);与空白孕鼠组相比,补肾活血组APA水平、胚胎吸收率及胚胎重量无显著性差异(P>0.05)。结论:丹寿汤能明显降低APA水平,抵制胚胎吸收,增加胚胎重量,提高妊娠成功率。

丹寿汤不同组分配伍对抗心磷脂抗体致复发性流产的定量评价

目的:基于发表的丹寿汤文献数据,采用模型化及模拟化进行再分析,提取更多信息,以期优化配伍方案。方法:原文丹寿汤以正交t值L12设计,1水平为"使用",2水平为"未使用",胚胎吸收率为药效指标。采用正交模拟法结合非线性混合模型结合,定量评价各组分在复方中相对重要程度和相互作用,模型评价采用4种视图进行综合评价。结果:丹寿汤组方中,全方呈现药效相加作用;主要药效学组分重要程度依次为菟丝子(A)、丹参(E)、续断(B)(P<0.05)。理论上不同配伍中,最佳组分配伍为ABCEF,4种视图评价模型表明所建模型预测能力较好。结论:采用正交模拟法结合非线性混合模型定量分析复方配伍数据,可获大量组方定量设计信息。

丹寿汤对抗心磷脂抗体致妊娠丢失孕鼠子宫螺旋动脉重铸障碍的影响

目的 探讨丹寿汤对抗心磷脂抗体(ACA)致妊娠丢失孕鼠子宫螺旋动脉重铸障碍的影响。方法 以人ACA标准蛋白液为诱导剂制备ACA阳性孕鼠模型。实验随机均分为空白组、模型组、阳性药组、丹寿汤组。自受孕日起,空白组和模型组给予蒸馏水灌胃,阳性药组给予低分子肝素钙注射液[558 IU/(kg·d)]皮下注射,丹寿汤组给予丹寿汤药液[11.2 g/(kg·d)]灌胃,持续给药15d后处死取材。计算胚胎吸收率,HE染色法观察胎盘组织病理形态,Case Viewer图像分析测量胎盘血管管腔直径与血管密度,ELISA法检测血清白介素-6(IL-6)与血管内皮生长因子(VEGF)水平。结果 与模型组相比,阳性药组和丹寿汤组孕鼠的胚胎和胎盘质量显著增加,胚胎吸收率显著降低,胎盘血管管腔直径和血管密度显著扩增,血清IL-6水平显著降低,且血清VEGF水平显著升高(均P<0.05)。结论 丹寿汤对ACA致妊娠丢失孕鼠有明确保护作用,其机制可能与通过抗炎和促进血管新生改善子宫螺旋动脉重铸障碍有关。

补肾活血法治疗母儿血型不合致反复自然流产30例

目的:探讨补肾活血法对母儿血型不合反复自然流产的临床疗效及作用机理。方法:治疗组30例采用丹寿汤浓煎液(菟丝子、丹参、川断、桑寄生、降香、阿胶)治疗,对照组30例采用茵陈蒿汤浓煎液做对照。结果:治疗组、对照组痊愈率分别占43.3、30,总有效率分别占96.7、76.7,两组疗效对比,差别无统计学意义(P>0.05),但两组治疗前后血清抗体滴度及两组新生儿黄疸情况比较,差别有统计学意义(P<0.05)。结论:丹寿汤能显著降低IgG血型抗体的滴度及新生儿血清胆红素,有效抑制了IgG血型抗体对胎儿的损害,降低了流产、新生儿溶血症及高胆红素血症的发生,且对患者无不良反应。