丹瓜方对GK糖尿病-动脉粥样硬化复合模型大鼠血糖、食量和体重的影响

目的:探讨丹瓜方对高脂饲料喂养的GK糖尿病-动脉粥样硬化复合模型大鼠血糖、食量和体重的影响。方法:40只成模GK大鼠,随机分为二甲双胍组、模型对照组、丹瓜方组、辛伐他汀组,自由进食高脂饲料,并予以相应的药物干预;另设10只同龄Wistar大鼠为正常对照组,喂食普通饲料;观察大鼠血糖、HbA1c、体重、食量的变化情况。结果:丹瓜方组血糖与空白对照组比较无差异,且优于其他各模型组;丹瓜方组HbA1c与二甲双胍组比较无差别,且低于模型对照组(P<0.05);GK大鼠食量均明显减少,丹瓜方组食量低于空白对照组和模型对照组(P<0.01);GK大鼠体重均低于空白对照组,丹瓜方组体重增幅最小(P<0.05)。结论:丹瓜方在控制高脂饲料喂养的GK大鼠的血糖、体重和食量上具有明显优势。

丹瓜方对糖尿病大鼠离体心脏垂体后叶素所致心肌缺血模型的影响

目的:观察中药复方丹瓜方对高脂糖尿病大鼠离体心脏的垂体后叶素所致心肌缺血模型的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:选取SD大鼠,随机分出正常组大鼠,其余大鼠经糖尿病造模后,随机分为模型组、糖脉康组及丹瓜方低、中、高剂量组。干预12周后采用Langendorff恒流灌流装置及加有垂体后叶素的K-H液灌注离体心脏,分别观察并记录各时间段的冠脉流量、心率及心肌收缩幅度。结果:与正常组相比,中、高剂量组第30分钟心肌收缩幅度均升高(P<0.05);与高剂量组相比,低剂量组和模型组第10分钟心率均降低(P<0.05),低剂量组、模型组及正常组第30分钟心率均降低(P<0.05);与中剂量相比,正常组及模型组第15分钟心肌收缩幅度均下降(P<0.05或P<0.01)。结论:丹瓜方对糖尿病缺血缺氧心肌有一定的保护作用。

复方丹瓜方对培养ECV304增殖及形态影响的研究

目的探讨体现痰瘀同治法的中药复方丹瓜方对培养人脐静脉内皮细胞(ECV304)增殖及形态的影响,以揭示丹瓜方在防治糖尿病高血糖致血管内皮细胞损伤中的作用。方法以标准的M199培养液、高糖(22.22mmol/L)培养液、不同浓度的丹瓜方培养液、高糖加不同浓度丹瓜方培养液培养ECV304,观察内皮细胞生长情况及显微形态变化。结果①不同浓度丹瓜方对培养ECV304细胞的增殖、形态都具有明显影响,浓度越高对细胞增殖的抑制作用越明显;②不同浓度丹瓜方均具有促进培养的ECV304多形性及"伪足样"结构形成作用,适当丹瓜方浓度(如1/450)作用显著;③过高糖(22.22mmol/L,相当于临床重度高血糖的糖尿病病人)对培养的ECV304也具有抑制作用;④丹瓜方和过高糖对细胞的抑制作用不形成叠加。结论丹瓜方对培养的ECV304具有明显的抑制增殖作用,对细胞形态也有明显的影响。

高糖培养ECV304内ROS含量变化及丹瓜方影响的研究

目的:探讨高糖培养人脐静脉内皮细胞(ECV304)内ROS含量的变化及丹瓜方的影响。方法以标准的M199培养基(A组,含糖5·55mmol/L)、高糖培养基(B组,含糖16·67mmol/L)、不同浓度的丹瓜方培养基(在B组基础上:C组含1/150丹瓜方,D组含1/300,E组含1/600)、及1/300丹瓜方培养基(F组,在A组含1/300丹瓜方),培养ECV30472小时,以流式细胞仪(flowcytometry,FCM)测定培养细胞内活性氧簇(ROS)含量。结果B组细胞内ROS含量较A组升高(319·87vs41·78)具有显著统计学意义(P<0·001),D组及E组细胞内ROS含量均较B组降低(197·13or189·70vs319·87),统计学意义也显著(P<0·001);F组细胞内ROS含量较A组降低(36·26vs41·78),但尚未达到统计学意义。C组细胞内ROS较B升得更高(581·82vs319·87),统计学意义显著(P<0·001)。结论:血管内皮细胞经高糖培养可显著升高其胞内ROS含量;适当浓度丹瓜方对高糖培养血管内皮细胞内ROS含量具有显著降低作用。

丹瓜方对HepG2细胞胰岛素抵抗模型LKB1-AMPK-ACC信号通路的影响

目的观察丹瓜方对HepG2细胞胰岛素抵抗模型LKB1-AMPK-ACC信号通路的影响,以探讨丹瓜方改善胰岛素抵抗的机制。方法利用高浓度葡萄糖与软脂酸共同体外培养诱导HepG2细胞24 h后成功建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型。同时予不同浓度的丹瓜方含药血清干预,以二甲双胍含药血清作为阳性对照。检测培养上清液里残存葡萄糖水平,计算胰岛素敏感指数,检测细胞内的三酰甘油含量,Western blot检测各组LKB1、P-AMPK、AMPK、P-ACC、ACC蛋白表达。结果与模型组相比,二甲双胍组、5%丹瓜方组和10%丹瓜方组的糖耗量、胰岛素敏感指数明显升高(P<0.01),TG含量明显下降(P<0.01),LKB1、P-AMPKα、P-ACC蛋白表达增加(P<0.01),ACC蛋白表达降低(P<0.01)。结论丹瓜方可有效改善高糖高脂诱导的胰岛素抵抗,其分子机制可能与丹瓜方调控LKB1-AMPK-ACC信号通路相关蛋白的表达有关。

丹瓜方对糖尿病大鼠胸主动脉超微结构影响的初步观察

目的观察祛瘀化痰、痰瘀同治复方中药——丹瓜方对糖尿病大鼠大血管超微结构的影响。方法 40只糖尿病GK大鼠(Goto-Kakisaki Wista rat)按数字表随机等分为模型组、二甲双胍组、辛伐他汀组、丹瓜方组4组,Wistar大鼠作为正常对照组。各组分别灌胃,24周后解剖取胸主动脉。透射电镜观察各组大鼠主动脉的超微结构。结果丹瓜方干预后大鼠胸主动脉内膜表面未见明显突起、增厚;内皮细胞较平滑,紧贴基层;弹力板连续、较平滑,厚薄相近;平滑肌细胞连续、完整,整体效果优于二甲双胍组。结论丹瓜方能显著改善糖尿病模型大鼠胸主动脉超微形态学变化,有明显的保护血管作用。

丹瓜方防治转基因糖尿病小鼠的氧化应激肝损伤

目的研究丹瓜方对转基因糖尿病小鼠氧化应激肝损伤的影响。方法将32只糖尿病C57BL/6J小鼠按随机数字表分为模型组、丹瓜方组、丹瓜方加吡格列酮组(联合用药组)、吡格列酮组,每组8只,喂养12周,处死,取肝脏制作匀浆,用化学荧光法测定活性氧簇(ROS)活力,比色法测定还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果丹瓜方组、联合用药组、吡格列酮组ROS活力低于模型组,SOD值高于模型组(P<0.05);联合用药组和丹瓜方组GSH活力高于模型组(P<0.05,P<0.01),与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05);联合用药组与丹瓜方组GSH活力比较差异无统计学意义。结论丹瓜方可升高糖尿病鼠肝组织SOD、GSH水平,降低ROS水平,通过抗氧化应激途径防治糖尿病。

丹瓜方防治糖尿病鼠氧化应激损伤研究

目的观察丹瓜方对糖尿病鼠肝组织的影响。方法将中国地鼠按计算器随机数分为空白组(KB)、模型组(MX)、低剂量中药丹瓜方组(DY)、中剂量中药丹瓜方组(ZY)、高剂量中药丹瓜方组(GY)5组。KB组饲以普通饲料,其他组予高脂高糖饲料并相应药物干预。4周后取材观测地鼠肝组织SOD、H2O2、GSH、MDA的变化。结果与MX组比较,KB组、DY组、ZY组、GY组的H2O2含量有统计学差异(P<0.05,P<0.01),GY组SOD活性升高(P<0.05),GY组GSH含量升高(P<0.01),ZY组MDA含量下降(P<0.05)。结论丹瓜方可以升高糖尿病鼠肝组织SOD、GSH水平,降低H2O2、MDA水平,丹瓜方可通过抗氧化应激途径防治糖尿病。

丹瓜方治疗2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病临床观察

目的观察丹瓜方对痰瘀型2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者肝纤维化评分(NFS)和血清肝纤维化指标的影响。方法将112例痰瘀型2型糖尿病合并NAFLD且NFS>0.676的患者用随机数字表法随机分为对照组55例、治疗组57例。对照组予健康教育、饮食控制、运动治疗、降糖和降脂治疗。治疗组在对照组干预基础上加用丹瓜方。2组均连续治疗12周。观察治疗前后2组FBG、2 h-BG、HbA1c、血脂、肝功、NFS、肝纤维化指标及证候积分的变化。结果与对照组相比,治疗组治疗后FBG、Hb A1c、AST、TC、C-IV、HA、NFS和证候积分明显降低(P<0.05),2组治疗后ALT、GGT、TG、LDL比较,差异没有统计学意义(P>0.05)。结论丹瓜方能够改善及延缓2型糖尿病合并NAFLD患者的肝纤维化的进展,同时具有改善糖脂代谢、保护肝功能的作用。

丹瓜方对痰瘀型2型糖尿病患者血清TGF-β1、ox-LDL的影响

目的观察丹瓜方对痰瘀型2型糖尿病患者血清TGF-β1、ox-LDL的影响。方法将144例痰瘀型2型糖尿病患者随机分为观察组和对照组各72例。对照组采用常规降糖、降压、调脂治疗,观察组在对照组治疗基础上联合丹瓜方治疗,疗程均为4周。观察2组治疗前后FBG、2h PG、TC、TG、LDL、TGF-β1、ox-LDL及证候积分的变化。结果观察组剔除3例,对照组剔除2例。与对照组比较,观察组治疗后2h PG、TC、LDL、TGF-β1、ox-LDL水平及证候积分明显下降(P<0.05)。结论丹瓜方可改善痰瘀型2型糖尿病患者糖脂代谢,可抑制糖尿病炎症反应并减轻血管内皮损伤,具有抗动脉粥样硬化的作用。

丹瓜方调节糖脂代谢紊乱大鼠氨基酸代谢研究

目的研究痰瘀同治丹瓜方对糖脂代谢紊乱大鼠氨基酸代谢的影响。方法将SD大鼠随机分为对照组和造模组,对照组饲以普通饲料,造模组饲以高脂、高糖饲料4周建立糖脂代谢紊乱模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组和丹瓜方组,丹瓜方组以丹瓜方灌胃液灌胃,模型组以清洁自来水灌胃,3组均继续喂食各自原有饲料。药物干预10周后,采用口服葡萄糖负荷试验检测空腹血糖(FBG)和2 h血糖(2 h PBG),采用常规生化法检测血浆胆固醇(TC)、甘油三脂(TG),采用HE染色、油红O脂肪染色和Masson染色观察大鼠肝组织病理改变,采用LC-MS/MS进行蛋白质组学和磷酸化组学分析。结果模型组血糖、血脂显著高于对照组;相对于对照组,肝组织影像学显示模型组肝脏及肝细胞显著脂肪变及纤维化;丹瓜方组显著好于模型组。丹瓜方可直接调节蛋氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、高半胱氨酸、精氨酸、N-乙酰谷氨酸、氨甲酰磷酸、谷氨酸的合成,尤其是通过多途径上调谷氨酸的合成,并通过调节胆汁酸代谢和尿素循环,最终影响各种氨基酸的代谢。结论丹瓜方具有显著调控糖脂代谢紊乱大鼠氨基酸代谢作用,其机制与调节D3ZPY2、Q68FT5、P10860、D4A904蛋白表达及P10860、D4A904蛋白的磷酸化有关。

丹瓜方对糖尿病大鼠糖脂代谢、肝功能影响的研究

目的探讨丹瓜方对糖尿病大鼠糖脂代谢及肝功能的影响。方法选取SD大鼠,糖尿病大鼠造模成功后随机分为正常组、模型组、二甲双胍组、低剂量组、高剂量组。分别干预16周后检测空腹血糖(FBG)、糖耐量实验1h血糖(OGTT-1hPG)、糖耐量实验2h血糖(OGTT-2hPG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)。结果与正常组比较,模型组FBG、OGTT-1hPG、OGTT-2hPG、TC、ALT、AST均明显升高(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,低剂量组FBG、TC、TG、AST均明显降低(P<0.05),与二甲双胍组比较,低剂量组TC、TG、ALT均明显降低(P<0.05)。结论丹瓜方不仅可以改善糖脂代谢,也对糖尿病大鼠肝损害有明显保护作用。

丹瓜方对2型糖尿病模型大鼠骨骼肌脂联素的影响

目的研究丹瓜方对2型糖尿病GK大鼠骨骼肌脂联素表达的影响。方法 40只2型糖尿病GK大鼠,随机分为二甲双胍组、对照组、丹瓜方组、辛伐他汀组,自由进食高脂饲料,并予以对应药物干预;另设10只同龄的Wistar大鼠为正常对照组,予以普通饮食。干预24周后,检测大鼠血糖、血脂水平,用酶联免疫吸附法测定GK大鼠骨骼肌脂联素表达。结果丹瓜方和二甲双胍在控制GK大鼠血糖上无显著差别;丹瓜方能明显降低CHOL、TG和LDL-c,升高HDL-c,效果明显优于辛伐他汀和二甲双胍;丹瓜方能明显促进GK大鼠骨骼肌脂联素的表达,优于二甲双胍及辛伐他汀。结论丹瓜方在降低高脂饲养的2型糖尿病GK大鼠的血糖血脂同时,能显著提高骨骼肌脂联素水平。

丹瓜方对糖尿病大鼠离体心脏灌注的影响研究

目的探讨丹瓜方对糖尿病大鼠离体心脏灌注的影响。方法选取SD大鼠,糖尿病造模成功后随机分为模型组、糖脉康组和丹瓜方低、中、高剂量组,糖耐量正常的SD大鼠为正常组。12周后查糖耐量试验(OGTT)、糖化血红蛋白(HBA1C)、血脂,并用Langendorff灌流装置灌注离体心脏,记录不同时点心率、心肌收缩幅度值及冠脉流量。结果与模型组比较,丹瓜方各组、糖脉康组FBG、Hb A1C、TC降低(P<0.01);丹瓜方中剂量组1 h-PG、低剂量组2 h-PG降低(P<0.01),中、高剂量组TG水平降低(P<0.01);第5 min,低、中剂量组心率增加(P<0.01),丹瓜方各组心肌收缩幅度增加(P<0.01);第10 min,低、中剂量组心率增加(P<0.01),低剂量组心肌收缩幅度增加(P<0.01);第15 min,低剂量组心率增加(P<0.01),第30 min,低、中剂量组心率增加(P<0.05或<0.01);第15、20、30 min,丹瓜方各组、糖脉康组心肌收缩增加(P<0.05或<0.01)。结论丹瓜方不仅可改善糖脂代谢,而且可增加心肌收缩力,改善心功能。

丹瓜方对糖尿病大鼠胰腺形态及GLUT4、LEP表达的影响

目的探讨丹瓜方对糖尿病大鼠胰腺形态及葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,GLUT4)、瘦素(leptin,LEP)表达的影响。方法SD大鼠按前期研究方案造模成糖尿病大鼠,随机分为正常组、模型组、二甲双胍组、常规剂量组、高剂量组。干预16周后分离获取胰腺组织并进行HE染色,检测糖尿病大鼠肌肉和脂肪组织GLUT4、LEP的表达。结果HE染色形态:正常组胰岛细胞外观呈饱满球形,细胞排列匀齐,胞质内含有大量胰岛素分泌颗粒,胰岛细胞占胰岛大部分范围;胰岛数量较多,面积较大,均衡分布并和腺泡分界清楚。与正常组比较,模型组胰岛细胞形态萎缩,排列混乱;胞质内胰岛素分泌颗粒显著减少;胰岛数量较少,面积较小,不均匀分布。与模型组比较,常规剂量组、高剂量组及二甲双胍组胰岛结构较规整,胰岛面积较大,胰岛细胞萎缩程度较轻,胰岛素分泌颗粒较多。与正常组比较,模型组和二甲双胍组大鼠肌肉GLUT4蛋白的表达量显著降低(P<0.01),常规剂量组大鼠肌肉GLUT4蛋白表达显著增加(P<0.01);模型组大鼠脂肪LEP的mRNA表达量显著降低(P<0.01)。和模型组相比,常规剂量组、高剂量组的大鼠肌肉GLUT4蛋白表达显著增加(P<0.01),二甲双胍组、常规剂量组、高剂量组大鼠脂肪LEP的mRNA表达量增加(P<0.05或P<0.01);与二甲双胍组比较,常规剂量组及高剂量组大鼠肌肉GLUT4蛋白表达显著增加(P<0.01),常规剂量组大鼠脂肪LEP的mRNA表达量显著增加(P<0.05)。结论丹瓜方可改善胰岛细胞的形态,丹瓜方可以通过调节GLUT4蛋白及LEP的mRNA表达来影响胰岛素功能达到控制血糖的目的。

丹瓜方对糖尿病大鼠视网膜组织MCP-1和NF-κB p65表达的影响

目的研讨丹瓜方对糖尿病大鼠视网膜组织中MCP-1和NF-κB p65的影响。方法将40只造模成功的GK大鼠随机分成模型组、二甲双胍组、辛伐他汀组、丹瓜方组4组,10只Wistar大鼠为正常组。采用Westernblot法检测大鼠视网膜组织中MCP-1和NF-κB p65的表达。结果与正常组比较,模型组视网膜组织MCP-1、NF-κB p65蛋白表达显著提高(P<0.01);与模型组比较,二甲双胍组、辛伐他汀组和丹瓜方组MCP-1、NF-κB p65蛋白表达均显著下降(P<0.01)。结论MCP-1和NF-κB p65可能均是糖尿病视网膜病变的影响因子,二甲双胍、辛伐他汀、丹瓜方均能降低GK大鼠视网膜组织中MCP-1和NF-κB p65的表达,从而预防或减少糖尿病视网膜病变的发生,其中以丹瓜方效果最好。

丹瓜方对转基因糖尿病小鼠心脏损伤的作用

探讨丹瓜方对转基因糖尿病小鼠心脏组织的影响。32只ApoE-/-小鼠数字随机等分为模型组、丹瓜方组、联合用药组(丹瓜方+吡格列酮)、吡格列酮组。喂以普通饲料,各组分别给药12周。小鼠处死,取心脏、匀浆,免疫组化测心脏血清反应因子(SRF)含量;解剖冠状动脉,光镜观察比较。结果:与模型组比较,联合用药组与丹瓜方组SRF阳性率降低有显著性差异(P<0.01);形态学观察,丹瓜方组与联合用药组冠状动脉内膜大部分无增厚。结果表明:丹瓜方对糖尿病小鼠心脏具有保护作用。

丹瓜方对肥胖糖尿病大鼠PPARγ、CPT-1表达的影响

目的探讨丹瓜方对肥胖糖尿病大鼠肝组织过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)和肾周脂肪肉碱棕榈酰转移酶-1(CPT-1)表达的影响。方法参照前期造模方案建立肥胖糖尿病大鼠模型,按随机化原则将SD大鼠分为对照组、模型组、二甲双胍组、常规剂量丹瓜方组(简称常规剂量组)和高剂量丹瓜方组(简称高剂量组)。二甲双胍组予二甲双胍药液灌胃,常规剂量组、高剂量组予不同浓度的丹瓜方药液灌胃,对照组和模型组以等量无菌水灌胃,共连续灌胃16周。ELISA法检测各组大鼠肝组织PPARγ及肾周脂肪CPT-1含量。结果与对照组比较,模型组大鼠肝组织PPARγ和肾周脂肪CPT-1含量明显降低(P<0.01);与模型组比较,高剂量组大鼠肝PPARγ含量明显升高(P<0.05),二甲双胍组、常规剂量组和高剂量组大鼠肾周脂肪CPT-1含量均明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论丹瓜方可能通过调节机体PPARγ、CPT-1水平改善糖尿病脂代谢。

丹瓜方的急性毒性试验

丹瓜方由新四物汤和瓜蒌薤白半夏汤化裁而来,主要由丹参、瓜蒌、郁金、赤芍、川芎、法半夏、薤白、僵蚕等组成。丹瓜方为福建中医药大学附属人民医院衡先培教授基于＂痰瘀同治法＂思路探索治疗2型糖尿病的心血结晶。既往研究证实,痰瘀同治的丹瓜方在降糖调脂、抗氧化、抗炎等方面疗效显著。根据《中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则》对丹瓜方进行急性毒性试验,观察其对肝肾功能和脏器指数的影响,

丹瓜方干预Apo E^-/-糖尿病模型小鼠脑组织IGF-1表达研究

目的探讨丹瓜方对Apo E^-/-糖尿病模型小鼠脑组织胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)表达水平的影响,以探究丹瓜方防治糖尿病脑病的部分机制。方法以链脲佐菌素(STZ)对Apo E^-/-小鼠塑造糖尿病模型。将成模后的小鼠按体质量分层,依照随机数字表随机分为模型组、丹瓜方组、吡格列酮组、联合组,每组8只。选取血糖正常的同龄同品系C57小鼠8只作为对照组。分组灌胃干预12周。ELISA法测定IGF-1表达。结果与C57组IGF-1(19.89±0.95)ng/m L比较,其余各组均明显降低(P<0.01);丹瓜方组(14.31±0.99)ng/m L和联合用药组IGF-1水平(11.58±0.92)ng/m L明显高于模型组(7.25±0.42)ng/m L;丹瓜方组IGF-1水平明显高于联合用药组(P<0.01)。结论通过适度提升糖尿病鼠脑组织中IGF-1表达,可能是丹瓜方防治糖尿病脑病的部分机制。