以丹酚酸B为指标性成分的复方巴戟天健骨颗粒整体质量评价

目的:通过复方巴戟天健骨颗粒中丹酚酸B质量控制研究,评价制剂质量。方法:色谱柱采用Sino Chrom ODS-BP (4.6 mm × 250 mm, 5 μm),流动相乙腈-0.1%磷酸水,等度洗脱,体积流量1.2 mL•min−1,柱温30℃,检测波长286 nm。结果:丹酚酸B在考察的浓度范围内线性关系良好(r = 1.000),线性范围为8.25~165.00 μg/mL,平均加样回收率为99.16%,RSD为1.52%。结论:该方法操作简便、准确、重复性好,可为复方巴戟天健骨颗粒质量控制提供实验依据。

负载丹酚酸B甲基丙烯酰化明胶水凝胶对椎间盘退变的作用

背景:丹酚酸B可抑制H2O2诱导的细胞损伤,有效清除过量的活性氧,发挥抗氧化特性,已被应用于许多疾病的治疗研究中。但是,有关丹酚酸B在椎间盘退变中作用及其作用机制的研究相对较少。目的:以甲基丙烯酰化明胶水凝胶为载体,通过体外细胞实验与动物体内实验观察丹酚酸B对氧化应激诱导的椎间盘退变的作用以及作用机制。方法:制备负载丹酚酸B的甲基丙烯酰化明胶水凝胶(载药水凝胶)。①体外细胞实验:分离提取成年SD大鼠腰椎髓核细胞,选择第3代髓核细胞,分组处理:A组加入完全培养基;B组加入含H2O2的完全培养基;C组接种于未载药水凝胶上,加入含H2O2的完全培养基;D组接种于载药水凝胶上,加入含H2O2的完全培养基;E组接种于载药水凝胶上,加入含H2O2与TLR4信号通路抑制剂的完全培养基,检测细胞增殖、氧化应激、炎症反应、细胞基质相关蛋白的基因表达以及TLR4/核因子kB信号通路蛋白表达。②动物体内实验:将60只成年SD大鼠随机分为正常组、针刺组、针刺+丹酚酸组、针刺+水凝胶组、针刺+载药水凝胶组,每组12只,后4组采用针刺建立椎间盘退变模型后依次注射生理盐水、丹酚酸B溶液、未载药水凝胶、载药水凝胶治疗,术后4周分别进行影像学检测、病理组织形态观察。结果与结论:①体外细胞实验:与A组比较,B组细胞增殖下降,氧化应激反应及炎症反应增强,细胞外基质降解酶(基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶13、ADAMTS4、ADAMTS5)的表达增加(P<0.05),细胞外基质(Ⅱ型胶原、蛋白聚糖)的合成减少(P<0.05),TLR4/核因子kB信号通路蛋白表达增加(P<0.05);与B组比较,D、E组细胞增殖升高,氧化应激反应及炎症反应减弱,细胞外基质降解酶的表达减少(P<0.05),细胞外基质的合成增加(P<0.05),TLR4/核因子kB信号通路蛋白表达减少(P<0.05),其中以E组效果更显著。②动物体内实验:术后4周,针刺+载药水凝胶组退变椎间盘的椎间盘高度指数、MRI指数以及椎间盘病理组织学评分均较针刺组有了显著改善,而单纯注射水凝胶或是丹酚酸B溶液虽也可一定程度地改善椎间盘退变情况,但均不及注射载药水凝胶组。③结果表明,负载丹酚酸B的甲基丙烯酰化明胶水凝胶可抑制退变椎间盘组织中的氧化应激反应与炎症反应,抑制细胞外基质的降解,缓解椎间盘退变的进程,该作用可能通过抑制TLR4/核因子kB信号通路来完成的。

丹酚酸B对肝损伤小鼠肠道菌群和短链脂肪酸代谢的影响

本研究旨在探讨丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal B)对小鼠肝损伤的干预作用,以及对肠道菌群和短链脂肪酸(short-chain fatty acids,SCFAs)代谢的影响。通过皮下注射20%CCl 4溶液建立小鼠肝损伤模型,在造模的同时给予Sal B和阳性药2-脱氧-葡萄糖(2-deoxy-D-glucose)灌胃干预,干预结束后通过苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)、Masson、天狼星红染色观察小鼠肝脏病理变化;采用生化试剂盒检测血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)水平;运用16S rRNA测序技术检测小鼠肠道菌群结构变化;通过气相色谱法测定小鼠粪便中SCFAs的含量。结果显示,Sal B可以显著降低CCl 4诱导的肝损伤小鼠血清ALT、AST水平(P<0.001),并减轻肝组织病理损伤。测序结果显示,Sal B可以部分恢复肝损伤小鼠的肠道菌群结构,同时显著增加肠道中异丁酸、异戊酸、丙酸和戊酸的含量(P<0.001)。本实验揭示了Sal B可以减轻CCl 4所诱导的小鼠肝损伤,机制可能与其对肠道菌群和SCFAs紊乱的调节有关。

丹酚酸B抑制HuH-7细胞的Hippo/YAP通路机制研究

目的 探讨丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal B)对人肝癌HuH-7细胞是否具有抑制作用,并探讨其是否通过Hippo/YAP信号通路发挥作用。方法 采用TGF-β1 (9 pmol·L^(-1))或MST1/2抑制剂XMU-MP-1 (5、10μmol·L^(-1))刺激HuH-7细胞,用Sal B(50μmol·L^(-1))处理HuH-7细胞。用CCK-8和EdU检测细胞增殖情况,用细胞划痕实验检测细胞迁移情况,用免疫荧光染色法检测YAP和TAZ的表达和分布,用Western blot检测p-MST1、MST1、p-YAP、YAP、p-TAZ、TAZ和CTGF的蛋白表达水平。结果 Sal B抑制了TGF-β1或XMU-MP-1刺激的HuH-7细胞的增殖。同时,Sal B抑制了TGF-β1刺激的HuH-7细胞的迁移。值得注意的是,与XMU-MP-1对HepG2细胞迁移能力的促进作用不同,XMU-MP-1在本实验中不能明显促进HuH-7细胞的迁移。此外,Sal B可上调p-MST1、MST1、p-YAP、p-TAZ的蛋白表达,降低YAP、TAZ、CTGF的表达。结论 Sal B抑制HuH-7细胞的作用可能与激活Hippo/YAP信号通路有关。

丹酚酸B对帕金森病小鼠肠功能紊乱的保护作用及机制研究

目的:探讨丹酚酸B(SalB)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病(PD)模型小鼠的肠道功能紊乱的保护作用及机制。方法:48只C57BL/6成年雄性小鼠随机分为正常对照组(Control组)、SalB对照组(SalB组)、模型组(MPTP组)、SalB治疗组(MPTP+SalB组)。腹腔注射MPTP构建PD小鼠模型,腹腔注射SalB治疗;采用爬杆实验检测小鼠行为;通过测定首粒黑便排出时间、小鼠粪便含水量评估小鼠肠道功能;免疫组化分析小鼠中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数量、结肠Toll样受体4(TLR4)表达水平;HE染色组织切片观察小鼠结肠黏膜病理改变;免疫组化法测定小鼠黑质TH及结肠TLR4表达水平,ELISA法测定小鼠结肠组织中钙卫蛋白(CP)、TNF-α含量;Western blot检测小鼠中脑及结肠TH、结肠紧密连接蛋白(ZO-1)及TLR4/MyD88/NF-κB信号通路蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠爬杆及转弯时间均明显增加,首粒黑便排出时间显著延长,粪便含水量明显减少;中脑TH阳性细胞数量明显减少,结肠TLR4阳性细胞数增加,中脑、结肠TH蛋白水平均显著降低,结肠黏膜病理损伤评分明显增加,结肠CP、TNF-α水平显著升高,结肠ZO-1表达明显减少;结肠TLR4、MyD88、Nuclear NF-κB p65及p-NF-κB p65蛋白表达水平均明显增加;与模型组比较,SalB治疗组小鼠爬杆及转弯时间均明显减少、首粒黑便排出时间显著缩短、粪便含水量明显增加;中脑TH阳性细胞数量明显增加,结肠TLR4阳性细胞数减少,中脑、结肠TH蛋白表达升高;结肠黏膜病理损伤评分明显降低,结肠CP、TNF-α含量显著减低,结肠ZO-1表达明显增加;结肠TLR4、MyD88、Nuclear NF-κB p65及p-NF-κB p65蛋白表达水平均明显下降。结论:SalB对MPTP诱导的PD模型小鼠具有神经及肠道双重保护作用,SalB缓解肠道炎症可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB炎症信号通路有关。

生物3D打印丹酚酸B⁃海藻酸钠⁃明胶皮肤支架促进糖尿病大鼠创面愈合

目的:探讨生物3D打印丹酚酸B(salvianolic acid B,SAB)⁃海藻酸钠⁃明胶皮肤支架对糖尿病大鼠创面的治疗作用。方法:按照SAB占海藻酸钠与明胶总重的百分比制成含0%、0.5%、1.0%、1.5%SAB的生物墨水,采用生物3D打印技术制备不同规格的皮肤支架。扫描电镜观察微观结构,高效液相色谱测定SAB体外累积释放浓度。皮肤支架用于治疗2型糖尿病大鼠创面,分为空白对照组、凡士林纱布组以及皮肤支架组(0%SAB、0.5%SAB、1.0%SAB、1.5%SAB组)。于第7、14天观察创面愈合、渗出情况,同时取创面组织进行HE、Masson、活性氧(reactive oxygen species,ROS)染色,并检测超氧化物歧化酶(super⁃oxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH⁃PX)、过氧化氢酶(catalase,CAT)及丙二醛(malondial⁃dehyde,MDA)水平。结果:扫描电镜下,4组皮肤支架均呈网孔状立体结构,孔隙分布均匀。SAB累积释放量随时间延长逐渐增加。各组创面均愈合良好,1.0%SAB组创面修复优于其他各组。第7天时,1.0%SAB组ROS水平均低于其他各组(P<0.05);第14天时,1.0%SAB组ROS水平低于除1.5%SAB组外的其他各组(P<0.01),1.0%SAB组和1.5%SAB组ROS表达水平差异无统计学意义(P=0.136)。第7天时,1.0%SAB组SOD、GSH⁃PX及CAT水平均高于其他各组(P<0.05),MDA水平低于空白对照组、凡士林纱布组及0%SAB组(P<0.05);第14天时,1.0%SAB组SOD、GSH⁃PX及CAT水平高于空白对照组、凡士林纱布组和0%SAB组(P<0.05),MDA水平低于空白对照组、凡士林纱布组(P<0.05)。HE染色显示,各组创面皮肤均修复较好,1.0%SAB组新生组织较多。Masson染色显示,第7、14天时,0.5%、1.0%、1.5%SAB组创面胶原蛋白沉积多于其他各组(P<0.05)。结论:1.0%SAB⁃海藻酸钠⁃明胶皮肤支架在第7、14天时不仅可以抑制ROS的产生,并上调各种抗氧化酶的表达,抑制创面组织内氧化应激反应,还可以促进胶原沉积,最终促进糖尿病大鼠的创面愈合。

丹酚酸B在帕金森病动物模型中的神经保护作用及临床应用进展

作为一种逐渐进展的神经系统变性疾病,帕金森病在老年人群体中的发病率较高,主要病理机制为多巴胺神经元丧失、神经纤维缠结的形成、氧化应激和线粒体功能受损、炎症反应和蛋白质代谢异常。丹酚酸B作为一种从丹参中提取的活性成分,其对帕金森病的神经保护作用机制为抗氧化作用、改善线粒体功能、调控神经炎症、抑制细胞凋亡、促进神经元分化与增值和影响肠道菌群。丹酚酸B作为辅助药物与常规治疗药物联合使用,具有增强疗效、减少副作用的功效,其为临床进行帕金森病早期诊断及治疗提供了方法及依据。

丹酚酸B减轻骨关节炎模型大鼠软骨组织损伤

目的探究丹酚酸B对骨关节炎模型大鼠的软骨组织损伤、低氧诱导因子-1(HIF-1)和血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法构建骨关节炎模型大鼠,大鼠随机分为假手术组、骨关节炎组[切断交叉韧带法(ACLT)]、尼美舒利组、丹酚酸B高(40 mg/kg)和低(10 mg/kg)剂量组及丹酚酸B+HIF-1激活组,每组12只。显微CT机检测关节处骨结构;番红固绿染色和Masson染色观察软骨组织病理学变化;检测血清白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)的活性;Western blot检测软骨组织HIF-1、VEGF、基质金属蛋白酶13(MMP-13)及活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(ceaved caspase-3)表达。结果与假手术组相比,骨关节炎组软骨组织损伤严重,踝骨骨体积分数(BV/TV)降低,踝骨表面积与骨体积比值(BSA/BV)、血清中IL-6、TNF-α含量、iNOS活性、软骨HIF-1、VEGF、MMP-13及cleaved caspase-3蛋白表达升高(P<0.05);与骨关节炎组相比,尼美舒利组、丹酚酸B高和低剂量组软骨组织逐渐恢复,踝骨BV/TV升高,BSA/BV、血清IL-6、TNF-α含量、iNOS活性、软骨HIF-1、VEGF、MMP-13和cleaved caspase-3蛋白表达量降低(P<0.05);与丹酚酸B高剂量组相比,丹酚酸B+HIF-1激活组软骨组织损伤加重,踝骨BV/TV降低,BSA/BV、血清IL-6、TNF-α含量、iNOS活性、软骨HIF-1、VEGF、MMP-13及cleaved caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。结论丹酚酸B可通过调控HIF-1/VEGF通路,抑制HIF-1、VEGF表达,缓解骨关节炎。

丹酚酸B对视网膜静脉阻塞损伤大鼠模型视网膜的保护作用及对血管新生的影响

目的:探讨丹酚酸B对视网膜静脉阻塞(RVO)损伤大鼠模型视网膜的保护作用及对血管新生的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组、模型组和丹酚酸B组,每组各10只,除对照组外,模型组和丹酚酸B组大鼠均采用孟加拉红联合激光光动力法诱导RVO,其中丹酚酸B组大鼠腹腔注射丹酚酸B 50mg/(kg·d),对照组和模型组大鼠仅给予等量生理盐水,连续21d。荧光素眼底血管造影(FFA)技术观察给药前后视网膜静脉结构;HE染色观察大鼠视网膜组织病理变化;视网膜电图(ERG)评估大鼠视网膜功能;免疫荧光染色技术检测各组大鼠视网膜组织中血管内皮生长因子A(VEGFA)荧光表达情况;Western blotting法检测视网膜组织中HIF-1α、STAT3、p-STAT3及VEGFA蛋白相对表达量。结果:与对照组比较,模型组大鼠视网膜阻塞处血流再通,有效侧支循环丰富,但形状不规则,有荧光渗漏;丹酚酸B组大鼠视网膜静脉循环恢复,形状逐渐规则,血管侧支减少;模型组和丹酚酸B组视网膜有不同程度病理损伤,同时两组大鼠ERG a波和b波振幅、视网膜总层(RTL)、内核层(INL)和外核层(ONL)厚度降低,VEGFA荧光强度增强,HIF-1α、p-STAT3及VEGFA蛋白相对表达量升高(P<0.05);与模型组比较,丹酚酸B大鼠视网膜组织病理学损伤有所减轻,ERG a波和b波振幅、RTL、INL和ONL厚度升高,VEGFA荧光强度减弱,HIF-1α、p-STAT3及VEGFA蛋白相对表达量降低(P<0.05)。结论:丹酚酸B可减轻RVO大鼠视网膜组织病理学损伤,改善视网膜功能,这可能与抑制HIF-1α/STAT3/VEGFA途径激活,减少血管新生有关。

丹酚酸B对创伤后应激障碍大鼠神经特异核蛋白和神经生长相关蛋白43表达的影响

目的观察丹酚酸B对创伤后应激障碍(PTSD)大鼠脑组织神经特异核蛋白(NeuN)和神经生长相关蛋白(GAP)43表达的影响,探讨丹酚酸B影响PTSD大鼠学习记忆能力的机制。方法将大鼠随机分为正常组、模型组、帕罗西汀组(4.2 mg/kg)、丹酚酸B低、中、高剂量组(10、20、40 mg/kg)。除正常组外,其余各组采用单次延长应激(SPS)构建PTSD大鼠模型。每天灌胃给药1次,连续14 d。末次给药结束24 h后,Morris水迷宫检测各组空间学习记忆能力;免疫荧光实验检测各组皮层和海马NeuN和GAP43表达的变化;分光光度计检测各组血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的变化。结果与正常组比较,模型组逃避潜伏期明显延长,穿越原平台所在位置的次数明显减少,皮层和海马NeuN和GAP43表达明显减少,血清SOD和GSH-PX含量明显降低,MDA含量明显升高(P<0.01)。与模型组比较,丹酚酸B各剂量组逃避潜伏期明显缩短,穿越原平台所在位置的次数明显增多,皮层和海马NeuN和GAP43表达明显增多,血清SOD和GSH-PX含量明显升高,MDA含量明显降低(P<0.01)。结论丹酚酸B可以提高PTSD大鼠空间学习记忆能力,其机制可能与丹酚酸B上调皮层和海马NeuN和GAP43的表达、抑制氧化应激反应有关。

丹酚酸B对去卵巢骨质疏松小鼠的生物学变化及机制

目的丹酚酸B是传统中药丹参的重要生物活性组分,临床应用广泛。新近发现,丹酚酸B具有防治骨质疏松的作用。本研究拟在前期工作基础上,系统地研究丹酚酸B对去卵巢骨质疏松小鼠的作用,探讨其对小鼠间充质干细胞(MSCs)成骨分化的影响。方法将18只8周龄SPF级别的C57雌性小鼠分为假手术组、骨质疏松组、丹酚酸B治疗组。骨质疏松组和丹酚酸B治疗组行双侧卵巢摘除术。而假手术组则保持正常的卵巢结构,同时去除局部的脂肪。3组均于术后3日内给予抗生素进行抗感染治疗。4周内,丹酚酸B治疗组给予丹酚酸B 2.5 mg/kg腹腔注射,连续12周,2天1次,其余2组在相同的时间内给予等量生理盐水。16周后,在麻醉状态下将所有小鼠处死。应用MicroCT测量了小鼠右后股骨的骨密度。采用qRT-PCR技术,分析小鼠左后股骨骨髓MSCs中Runx2和Osterix的表达。将小鼠右后股骨进行液氮研磨处理,提取蛋白质,用WB法测定OPG和RANKL的含量。结果骨质疏松组小鼠股骨骨密度比假手术组低(P<0.05),丹酚酸B治疗组小鼠股骨骨密度比骨质疏松组高,但差异无显著性意义(P<0.05)。骨质疏松组小鼠Runx2和Osterix水平低于假手术组(P<0.05),丹酚酸B治疗组小鼠Runx2和Osterix水平比骨质疏松组高(P<0.05)。骨质疏松组小鼠OPG和RANKL蛋白水平低于假手术组(P<0.05),丹酚酸B组小鼠OPG和RANKL蛋白水平比骨质疏松组高(P<0.05)。结论绝经后骨质疏松症早期对小鼠的骨质疏松具有一定的影响,但还需要更多的实验来验证本研究的结论。

丹酚酸B介导巨噬细胞Piezo1/MAPK/YAP轴对动脉粥样硬化的保护作用

[目的]探讨丹酚酸B对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的泡沫细胞形成在动脉粥样硬化中的保护作用。[方法]提取小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM),用50 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导泡沫细胞模型,同时加入Piezo1通道激动剂Yoda1观察与Piezo1相关性,药物组加入不同浓度的丹酚酸B处理。采用油红O染色法检测各组细胞脂质含量,Western blot法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)等炎症因子的蛋白表达水平,以及YAP及MAPK级联蛋白表达水平,免疫荧光法检测YAP蛋白核易位表达。[结果]Yoda1干预组的泡沫细胞形成显著增加(P<0.05);与Yoda1干预组比较,SalB组明显抑制泡沫细胞形成(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组炎症因子蛋白表达升高,而Yoda1干预组升高更明显,SalB组炎症因子蛋白表达水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。此外,模型组细胞YAP蛋白明显向核内易位,而Yoda1干预组向核内易位更明显,差异具有统计学意义(P<0.05),SalB组YAP蛋白向细胞核内易位明显减少。同时,模型组和Yoda1干预组细胞磷酸化P38、ERK1/2、JNK蛋白表达升高,SalB组磷酸化P38、ERK1/2、JNK蛋白表达明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。[结论]丹酚酸B抑制ox-LDL及Yoda1诱导的泡沫细胞形成,抑制炎症因子的蛋白表达水平,从而延缓动脉粥样硬化斑块的形成,其机制可能与丹酚酸B介导Piezo1调控MAPK/YAP轴相关。

丹酚酸B杂化纳米花的合成与体外抗氧化活性研究

首次将丹参中主要有效成分丹酚酸B(SAB)制备成具有抗氧化活性的SAB@Cu_(3)(PO_(4))_(2)杂化纳米花。采用扫描电镜(SEM)、傅里叶变换红外光谱仪(FT-IR)、X射线能量色散谱仪(EDS)、激光粒度分布仪等进行表征,证实了SAB@Cu_(3)(PO_(4))_(2)杂化纳米花的合成并确定其形貌、结构特征。之后,对杂化纳米花的抗氧化性进行探究,发现与游离丹酚酸B相比,杂化纳米花的抗氧化活性提高了92.2%。此外,杂化纳米花的稳定性也有显著提高,其在80℃下放置12h后仍能保留80.57%的抗氧化活性。

丹酚酸B经大鼠肠道菌群的代谢转化

本研究利用UPLC-Q-TOF/MS对丹酚酸B(Salvianolic acid B,SAB)在大鼠体内代谢产物进行研究,共鉴定出14种代谢产物,其中2种代谢物为首次鉴定,推测它们由呋喃环裂解、酯键的水解以及水分子的丢失而产生。同时对先前鉴定的分子质量为538U的代谢物给出了新的结构解释。研究表明,SAB在大鼠体内经肠道菌进行代谢消除,代谢途径涉及酯键水解、呋喃环裂解、碳碳双键的生成与还原、单甲基化和多甲基化。

丹酚酸B抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路改善顺铂诱导的急性肾损伤

目的:探讨丹酚酸B对顺铂诱导小鼠急性肾损伤的影响,并探索其作用机制。方法:C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、模型组及丹酚酸B低(50 mg/kg)、中(100 mg/kg)、高(200 mg/kg)剂量组。各组分别灌胃相应剂量丹酚酸B或生理盐水,1次/d,共5 d。第3天时除正常对照组腹腔注射生理盐水外,其余各组小鼠均以20 mg/kg腹腔注射顺铂建立小鼠急性肾损伤模型,48 h后处死小鼠。收集血清及肾组织,检测血清肌酐、尿素氮水平,HE染色观察肾组织病理学改变,TUNEL染色观察肾组织细胞凋亡情况,免疫组化检测肾组织HMGB1表达,Western Blot检测肾组织Bcl-2、Bax、HMGB1、TLR4、p-NF-κB p65蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型组血清肌酐、尿素氮水平显著升高,肾小管上皮细胞出现空泡样变性、小管管腔内多见管型,TUNEL染色可见较多阳性细胞,肾组织Bax/Bcl-2比值及HMGB1、TLR4、p-NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,丹酚酸B中、高剂量组血清肌酐、尿素氮水平显著降低(P<0.05或P<0.01),肾小管管型减少,TUNEL染色阳性细胞较少,肾组织Bax/Bcl-2比值及HMGB1、TLR4、p-NF-κB p65蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:丹酚酸B可减轻顺铂诱导的小鼠急性肾损伤,其机制可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路有关。

大孔树脂富集丹参中丹酚酸B的工艺过程分析研究

目的探讨大孔树脂纯化丹参中丹酚酸B的工艺过程和吸附原理。方法根据正交试验设计优化丹酚酸B的提取工艺,采用大孔树脂纯化技术方法,考察上样流速、静态吸附时间、上样样品pH值及洗脱剂浓度、洗脱流速等因素对纯化效果的影响,同时分析大孔树脂对丹酚酸B的吸附动力学过程。结果丹酚酸B的最佳提取条件:70%乙醇为溶剂,提取2 h,提取1次。筛选D101型大孔树脂对丹酚酸B的最佳纯化条件:样品溶液pH值为4,吸附流速1 BV/h,静态吸附6 h,70%乙醇为洗脱剂,洗脱流速1 BV/h。通过动力学分析,准二级速率方程能更好描述D101型大孔吸附树脂对丹酚酸B的吸附过程,并且此过程受到薄膜扩散和内扩散的共同影响。结论优化得到的丹酚酸B提取纯化工艺条件可行有效,可为含有丹参的复方及丹酚酸B的制剂的优化开发研究提供参考。

丹酚酸B通过Ctsk/STAT3轴对小鼠口腔癌的抑制作用

目的通过Ctsk/STAT3轴,探讨丹酚酸B对小鼠口腔癌的抑制作用。方法随机将小鼠分为对照组、模型组、丹酚酸B低剂量组(10 mg·kg^(-1))、丹酚酸B高剂量组(40 mg·kg^(-1))、阳性药物组(4 mg·kg^(-1)顺铂),每组20只。HE染色观察口腔颊囊黏膜组织,Brd U免疫组化法观察口腔黏膜细胞增殖指数,比较促炎因子IL-6、IL-1β、VEGF、HIF-1α水平,Ctsk、STAT3、SOCS3 mRNA以及Ctsk、STAT3、p-STAT3、SOCS3蛋白表达。结果与对照组比较,模型组IL-6、IL-1β、VEGF、HIF-1α水平,Ctsk mRNA和蛋白、p-STAT3蛋白水平升高,SOCS3 mRNA和蛋白水平降低(P<0.05);与模型组比较,丹酚酸B低、高剂量组与阳性药物组SOCS3 mRNA和蛋白水平升高,单纯增生、轻度异常增生、重度异常增生、鳞癌病理程度及Brd U细胞增殖指数,IL-6、IL-1β、VEGF、HIF-1α水平,Ctsk mRNA和蛋白、p-STAT3蛋白水平降低(P<0.05);与丹酚酸B低剂量组比较,丹酚酸B高剂量组与阳性药物组SOCS3 mRNA与蛋白水平升高,单纯增生、轻度异常增生、重度异常增生、鳞癌病理程度及Brd U细胞增殖指数,IL-6、IL-1β、VEGF、HIF-1α水平,Ctsk mRNA和蛋白、p-STAT3蛋白水平降低(P<0.05);与丹酚酸B高剂量组比较,阳性药物组SOCS3 mRNA与蛋白水平升高,单纯增生、轻度异常增生、重度异常增生、鳞癌病理程度及Brd U细胞增殖指数,IL-6、IL-1β、VEGF、HIF-1α水平,Ctsk mRNA和蛋白、p-STAT3蛋白水平降低(P<0.05);HE结果显示,丹酚酸B低、高剂量组与阳性药物组口腔颊囊黏膜组织不同病理现象均较模型组出现改善,且丹酚酸B高剂量组与阳性药物组改善明显。结论丹酚酸B对小鼠口腔癌具有抑制作用,可能通过调控Ctsk/STAT3轴相关mRNA和蛋白表达发挥作用。

丹参中丹酚酸B提取工艺优化及抗氧化活性分析

目的在正交试验的基础上结合R语言探究丹参中丹酚酸B的最优提取工艺,利用方差分析研究丹酚酸B的体外抗氧化活性。方法以丹酚酸B提取率为指标,采用单因素和正交试验的方法,结合R语言,利用BP神经网络及遗传算法对正交试验进行目标寻优,得到最优提取工艺;通过DPPH法考察丹酚酸B的抗氧化活性,并进行方差分析。结果丹酚酸B的最优提取工艺的条件是提取1.5 h,提取3次,料液比为1∶8,网络预测值为95.22 mg/g,验证试验平均值为99.66 mg/g,相对误差为4.45%,具有较好的网络预测性;不同工艺提取液的体外抗氧化能力差异较大。结论本实验使用的丹酚酸B提取优化工艺的数学方法为制药工业中丹参提取奠定基础,同时也为丹参临床应用提供参考。

丹酚酸B对小鼠脑出血的神经保护作用研究

目的:探讨丹酚酸B(SalB)对小鼠脑出血(ICH)的神经保护作用及机制。方法:C57BL/6J雄性小鼠108只随机分为Sham组,ICH+Vehicle组,ICH+SalB组,每组36只。Ⅶ型胶原酶制备ICH模型,ICH+SalB组术后2 h尾静脉注射SalB 30 mg/kg,Sham组和ICH+Vehicle组尾静脉注射等量生理盐水,连续3 d。术后第3天,采用mNSS和转角实验观察行为学指标;HE染色观察脑组织损伤情况;脑含水量检测评估脑组织水肿;伊文思蓝(EB)外渗试验评估血脑屏障渗透性;Westernblot检测ZO-1和Occludin蛋白表达水平评估血脑屏障完整性,检测MMP-9和IL-1β蛋白表达水平评估炎症因子水平;TUNEL染色评估凋亡细胞数量;Iba1和MPO免疫荧光染色评估小胶质细胞活化和中性粒细胞渗出情况。结果:mNSS评分结果显示ICH+SalB组神经功能缺损低于ICH+Vehicle组(P<0.05);转角实验结果显示ICH+SalB组右转次数低于ICH+Vehicle组(P<0.05);HE染色结果显示ICH+SalB组脑组织损伤、血肿面积较ICH+Vehicle组降低(P<0.05);脑含水量结果显示ICH+SalB组脑水肿程度轻于ICH+Vehicle组(P<0.05);EB外渗结果显示ICH+SalB组EB外渗低于ICH+Vehicle组(P<0.05);Westernblot结果显示ICH+SalB组MMP-9、IL-1β表达低于ICH+Vehicle组(P<0.05),ICH+SalB组ZO-1、occludin表达高于ICH+Vehicle组(P<0.05);TUNEL结果显示ICH+SalB组凋亡细胞数量低于ICH+Vehicle组(P<0.05);免疫荧光检测显示ICH+SalB组Iba1和MPO水平均低于ICH+Vehicle组(P<0.05)。结论:SalB可能通过减少小鼠ICH后的脑水肿、降低炎症因子、稳定血脑屏障的机制改善神经功能,发挥神经保护作用。

丹酚酸B对肝癌H22小鼠TLR_(4)/MyD88/NF-κB通路及肠道细菌的影响

目的研究丹酚酸B(Salvianolic acid B,Sal B)对肝癌H22小鼠抗肿瘤效果、TLR_(4)/MyD88/NF-κB通路以及肠道菌的影响。方法构建H22肝癌移植瘤小鼠,随机分为模型组、环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX)阳性对照组、丹酚酸B中剂量组(50 mg·kg^(-1))和丹酚酸B高剂量组(100 mg·kg^(-1)),另设置一组正常小鼠为正常对照组。给药15天后计算抑瘤率;苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin staining,HE)染色法观察肿瘤组织病理改变;实时定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)法分别检测肿瘤组织Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR_(4))、髓样分化因子(Myeloid differentiation factor88,MyD88)、核转录因子NF-κB(Nuclear transcription factor-κB,NF-κB)基因和蛋白表达;高通量测序(High-throughput sequencing)法分析小鼠粪便细菌群落结构多样性。结果与模型组比较,丹酚酸B显著抑制肿瘤生长(P<0.05),下调TLR_(4)、MyD88、NF-κB基因和蛋白表达。与正常组比较,模型组小鼠肠道细菌组成结构发生显著改变(P<0.05);与模型组比较,丹酚酸B高剂量组小鼠肠道细菌的群落结构更接近正常组。结论丹酚酸B可抑制H22荷瘤小鼠肿瘤生长,抑制TLR_(4)/MyD88/NF-κB信号通路的激活,对肿瘤小鼠肠道细菌菌群紊乱具有正向的调节作用。