一测多评法同时测定丹参配方颗粒中7个酚酸类成分

目的建立一测多评法测定丹参配方颗粒中丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、丹酚酸E、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的含量,验证其准确性及可行性。方法采用HPLC法,色谱柱为Waters Xselect HSS T3(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液,梯度洗脱;流速为1.2 mL·min^(-1);检测波长为286 nm。以原儿茶醛为内参物,计算其他6个成分的相对校正因子。同时采用外标法和一测多评法测定丹参配方颗粒中7个酚酸类成分的含量,比较两种方法的测定结果是否存在差异。结果丹参素、咖啡酸、丹酚酸E、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B在各自质量浓度范围内与峰面积线性关系良好(r>0.999);相对校正因子分别为7.36、1.18、2.82、1.99、2.82、3.31。一测多评法与外标法测得12批样品中7个酚酸类成分的含量结果无显著差异,丹参素、咖啡酸、丹酚酸E、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B相对误差分别在0.43%~0.53%、0.00%~3.70%、0.00%~0.34%、1.71%~2.01%、2.53%~2.93%、1.69%~1.73%。结论建立的一测多评法测定丹参配方颗粒中7个酚酸类成分简便稳定,可用于丹参配方颗粒的定量分析及质量控制。

丹参中酚酸类成分及在水溶液中降解转化研究进展

目前已从丹参中分离鉴定出多种水溶性酚酸类成分,主要包括丹酚酸B、丹酚酸A、丹酚酸E、紫草酸、丹酚酸D、咖啡酸、丹参素和原儿茶醛等。丹参酚酸类成分不稳定,尤其在水溶液中易发生降解及相互转化。综述从丹参中分离鉴定的30余种酚酸类成分及若干丹参酚酸类成分在水溶液中的降解转化研究进展,研究大多以酚酸类成分对照品为实验材料,考察其在不同加热温度和pH等条件下的降解途径,运用HPLC/UPLC-MS结合NMR技术对降解产物进行分离定性,结合产物的种类及化学结构性质进行降解途径的推测。其降解转化途径复杂,主要类型有水解反应、呋喃环开环反应、氧化反应、自由基反应、脱羧反应和脱水反应等,其中自由基反应机理不明确,研究尚欠缺。目前技术手段仅能研究酚酸类成分的表观降解规律,降解过程各成分存在的相互作用尚未阐清,亟待新技术和新方法的运用以进行深入研究。结合酚酸类成分的化学结构特征,归纳若干酚酸类成分在不同条件降解途径并阐述其降解规律的研究难点,旨在为全面研究酚酸类成分降解规律提供依据,为产品工艺的开发和优化提供参考,引发对丹参产品质量控制的深入思考。

不同提取条件对丹酚酸B和E相对含量的影响

通过HPLC、LC-MS等手段确定了丹参提取物中的小组分丹酚酸E,并考察了加水量、提取温度、时间和pH对丹酚酸B、E相对含量及丹酚酸B提取率的影响。结果显示:不同提取条件下,丹酚酸B、E相对含量变化显著,推测两者存在一定转化机制。丹酚酸B的最佳提取工艺为:丹参药材中加入8倍体积水,用1 mol/L盐酸调至pH 4 0,70℃提取60min,丹酚酸B的收率大于90%。

丹参配方颗粒实行国家标准前后样品多成分UPLC含量测定及比较分析

目的 对中药配方颗粒施行国家标准前后多厂家、多批次丹参配方颗粒(Danshen Formula Granules,DFG)进行多成分含量测定和比较分析。方法 收集DFG实行国家标准前4个厂家31批样品和实行国家标准后3个厂家19批样品,采用UPLC法对DFG实行国家标准前、后不同厂家、不同批次样品中丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、丹酚酸D、丹酚酸E、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A和丹参酮Ⅱ_(A) 共10个成分进行含量测定和比较分析。结果 DFG中10种成分线性关系良好(r≥0.999 2),平均加样回收率为92.64%~103.28%,RSD为0.66%~2.60%。DFG施行国家标准前4个厂家样品中10种成分含量均存在显著性差异,而实行国家标准后样品中仅丹参素、丹酚酸A和丹参酮Ⅱ_(A)在个别厂家间存在显著性差异。同一厂家DFG中10种成分在实行国家标准后样品中含量普遍高于实行国家标准前样品中成分含量,且有的厂家中成分含量差异倍数在2倍甚至3倍及以上。结论 该方法稳定可行,可用于DFG的质量控制;实行国标后的DFG质量优于实行国标前样品;且不同厂家DFG中丹酚酸B的含量均符合最新国家药品标准。

基于活细胞固相色谱法联合高分辨质谱及网络药理学的丹参标准汤剂抗神经病理性疼痛作用成分及机制探讨

目的采用活细胞固相色谱法联合高分辨质谱技术快速筛选鉴定丹参标准汤剂中潜在的抗神经病理性疼痛活性成分,通过网络药理学技术分析其作用机制。方法小鼠背根神经元细胞与丹参标准汤剂磷酸盐缓冲液(PBS)溶液共孵育,吸附成分采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Orbitrap HRMS)鉴别;鉴定得到的活性成分基于网络药理学分析其作用机制:采用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)数据库联合Swiss数据库寻找成分作用靶点,以“neuropathic pain”为关键词在Genecards数据库及OMIM数据库检索去重即得疾病靶点,将成分靶点与神经病理性疼痛靶点交集筛选得到共同靶点;将共同靶点导入STRING数据库进行检索,得蛋白质相互作用(PPI)网络,并导入Cytoscape 3.7.2绘图,以度值(degree)为标准选取前10靶点作为关键靶点;将共同靶点采用ClusterProfiler包进行基因本体(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。结果共鉴定得到以酚酸类物质为主的潜在活性成分11个,分别为香草酸、丹参素、咖啡酸、原儿茶酸、原儿茶醛、阿魏酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、异丹酚酸B、丹酚酸E。网络药理学分析结果显示活性成分作用靶点174个,与神经病理性疼痛靶点集交集67个;PPI分析显示信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)、白蛋白(ALB)、原癌基因c-Jun(JUN)、淀粉样β前体蛋白(APP)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、胱天蛋白酶3(CASP3)、toll样受体4(TLR4)、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、环加氧酶2(PTGS2)、转录因子p65(RELA)为关键靶点,“药味成分-靶点”网络拓扑分析显示各活性成分可能存在协同作用;GO富集分析显示与碳酸氢盐转运、对脂多糖反应、对细菌来源分析反应等生物过程,膜筏、膜微区、膜区、分泌颗粒管腔等细胞组成以及碳酸脱水酶活性、水解酶活性、碳氧裂解酶活性等分子功能相关;KEGG富集显示与氮代谢、糖尿病并发症中的晚期糖基化产物(AGE)-晚期糖基化终末产物受体(RAGE)信号通路、脂质和动脉粥样硬化、缺氧诱导因子1(HIF-1)信号通路等通路相关;结合文献分析丹参抗神经病理性疼痛起效机制与炎症和免疫反应、神经元恢复及再生、代谢紊乱、病毒、疼痛递质传导、神经元超敏、疼痛阈等相关。结论应用活细胞固相色谱与高分辨质谱联用技术筛选出丹参标准汤剂中抗神经病理性疼痛活性成分11个,桥接网络药理学分析其作用机制可能与炎症和免疫反应、调节代谢紊乱、抑制超敏等相关。

清心滋肾方水煎液HPLC指纹图谱研究及其15种成分定量分析

目的建立清心滋肾方水煎液(Qinxin Zishen Prescription Decoction,QZPD)的HPLC指纹图谱,并测定15种成分的含量,为清心滋肾方(Qinxin Zishen Prescription,QZP)的质量控制提供依据。方法采用Phenomenex Kinetex C18(100mm×4.60 mm,2.6μm)色谱柱分离,流动相为甲醇、乙腈和0.2%甲酸水溶液,梯度洗脱,检测波长为245、280 nm,柱温40℃。建立10批QZPD的HPLC指纹图谱,并进行相似度评价、对共有峰进行归属及指认,并测定指认出的15个成分的含量。结果 10批QZPD HPLC指纹图谱相似度在0.923~0.998,指认出共有峰33个,其中黄连中有7个峰(P11、P14~P16、P24、P29、P30),莲子心(P7、P19)及酸枣仁(P14、P21)中各有2个峰,丹参(P4、P5、P10、P17、P18、P28、P31~P33)及山茱萸(P1~P3、P6、P8、P9、P12、P13、P20)中各有9个峰,其余5个共有峰(P22、P23、P25~P27)来源未明确,而生地黄、钩藤及浮小麦对共有峰贡献不明显。通过与对照品比对,指认出没食子酸(P2)、5-羟甲基糠醛(P3)、丹参素(P4)、原儿茶醛(P5)、莫诺苷(P9)、咖啡酸(P10)、马鞭草苷(P12)、马钱苷(P13)、木兰花碱(P14)、黄连碱(P24)、紫草酸(P28)、小檗碱(P29)、巴马汀(P30)、丹酚酸B(P31)和丹酚酸E(P33),并对这15种成分进行含量测定,定量结果分别为158.3~248.2、233.6~321.3、45.9~166.0、24.3~38.6、800.7~1 263.6、26.6~54.9、44.5~108.2、470.4~757.3、85.6~178.6、11.1~34.2、56.2~106.4、25.9~138.9、21.0~59.2、951.6~2 244.7、38.6~92.8μg/g。结论所建立的QZPD HPLC指纹图谱及定量测定方法稳定性、重复性好,可为QZP质量控制和评价提供参考。