沉默干扰素诱导蛋白16对人主动脉外膜成纤维细胞凋亡的影响

目的探究沉默干扰素诱导蛋白16(IFI16)对人主动脉外膜成纤维细胞(HAAFs)凋亡的影响。方法检测HAAFs凋亡、IFI16、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)及磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白表达。结果基因沉默组IFI16低于另两组(P<0.05),基因沉默组ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达高于另两组(P<0.05),阴性对照组及空白组HAAFs凋亡率、IFI16、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论沉默IFI16表达能够降低HAAFs凋亡率。

川芎、黄芪对自发性高血压大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨川芎、黄芪对自发性高血压大鼠(SHR)胸主动脉外膜成纤维细胞增殖的抑制作用。方法:以单用川芎或川芎黄芪合剂的 SHR 血清检测对培养的 SHR 胸主动脉外膜成纤维细胞~3H-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)掺入的影响。结果:川芎和川芎、黄芪合用对 SHR 的血压和心率没有影响,川芎血清组和川芎黄芪合剂血清组与 SHR 血清组比较,~3H-TdR 的掺入量差异有显著性(P<0.05,P<0.01)。结论:川芎、黄芪能抑制 SHR 胸主动脉外膜成纤维细胞增殖,这些效应可能与它们的钙离子拮抗有关。

罗格列酮及环格列酮对血管紧张素Ⅱ体外诱导大鼠主动脉外膜成纤维细胞增殖的抑制作用

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活型受体(PPAR)γ激动剂罗格列酮、环格列酮对大鼠主动脉外膜成纤维细胞(AF)增殖的影响,并比较电流排除(ECE)、四甲基偶氮唑盐(MTT)2种方法检测增殖的差异。方法:采用组织贴块法原代培养AF并传代。取第5代纯化细胞血清饥饿24h,然后用不同浓度(0、1、5、10、50μmol/L)的罗格列酮、环格列酮加或不加血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激24h,用ECE、MTT2种方法检测细胞增殖活力。结果:与未加AngⅡ组比较,加AngⅡ组的细胞活力升高(P<0.05),10、50μmol/L罗格列酮、环格列酮能够抑制AF增殖(P<0.05),5、10、50μmol/L罗格列酮、环格列酮能够抑制AngⅡ诱导的AF增殖(P<0.05)。ECE与MTT结果相关性好(r=0.667,P<0.001)。结论:罗格列酮、环格列酮能够抑制AngⅡ诱导的AF增殖,ECE法可准确检测细胞增殖。

罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠主动脉外膜成纤维细胞迁移的影响

目的:探讨PPARγ激动剂罗格列酮(ROSI)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠主动脉外膜成纤维细胞(AFs)迁移的影响。方法:采用组织贴块法原代培养AFs并传代。取第5代纯化细胞用于实验,分为空白对照组、AngⅡ组、AngⅡ+0.1μmol/LROSI组、AngⅡ+1.0μmol/LROSI组、AngⅡ+10μmol/LROSI组,采用TranswellChamber测试细胞迁移。另取AFs分为4组:空白对照组、AngⅡ组、AngⅡ+10μmol/L ROSI组和AngⅡ+10μmol/L ROSI+GW9662组,用Western blotting检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白的表达。另取AFs同上分为4组,采用明胶酶谱法检测MMP-2活性。结果:AngⅡ能促进AFs的迁移,ROSI可呈剂量依赖地抑制AFs的迁移(P<0.05)。ROSI能够降低AFs MMP-2蛋白的表达及MMP-2的活性。结论:ROSI可抑制AngⅡ诱导的大鼠AFs的迁移,其机制可能与抑制MMP-2的表达及活性有关。

沉默干扰素诱导蛋白16对人主动脉外膜成纤维细胞凋亡的影响

目的:探讨沉默干扰素诱导蛋白16(IFI16)表达对人主动脉外膜成纤维细胞(HAAFs)凋亡的影响及其部分机制。方法:应用IFI16小干扰RAN(siRNA)、Control siRNA转染HAAFs分别IFI16基因沉默组(IFI16-siRNA组)、阴性对照组(Control-siRNA组),未经干预的HAAFs作为空白组;用流式细胞仪检测凋亡,应用Western blot检测IFI16、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达。结果:与Control-siRNA组或空白组相比,IFI16-siRNA组的细胞凋亡率下降,伴随着IFI16蛋白表达减少,p-ERK1/2水平增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:沉默IFI16表达可减少HAAFs细胞凋亡,其机制可能部分与ERK信号通路有关。

下调干扰素诱导蛋白16对人主动脉外膜成纤维细胞凋亡的影响

目的:探讨下调干扰素诱导蛋白16(IFI16)对人主动脉外膜成纤维细胞(HAAFs)凋亡的影响及机制。方法:在HAAFs中转染IFI16小干扰RNA(siRNA)和Control siRNA,分别作为IFI16基因沉默组(Ⅰ组)、阴性对照组(C组),未经任何干预的HAAFs作为空白组(N组),用流式细胞仪检测凋亡,Western blot检测IFI16、活化凋亡蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(Cleaved PARP)蛋白表达。结果:与C组和N组相比,Ⅰ组中IFI16蛋白表达减少,细胞凋亡率下降(P<0.05),伴随着Cleaved PARP蛋白表达减少。结论:下调IFI16表达可抑制HAAFs细胞凋亡,其机制可能与下调Cleaved PARP蛋白有关。

大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞的培养方法初探

目的:建立大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞组织贴块法培养模型。方法:分离大鼠胸主动脉外膜,切成1 mm×1 mm×1 mm大小组织块,均匀贴于细胞培养瓶壁上,加入含20%血清的细胞培养液DMEM,置入细胞培养箱于37℃,5%CO2条件下传代培养。结果:第3～4 d,少量细胞从组织块周边游出,第6～8 d后,细胞围绕组织块生长至亚融合状态,0.25%胰酶消化后传代,可得到较纯成纤维细胞。结论:利用组织贴块法培养大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞存活率高,操作简单,结果稳定,在血管重塑、血管纤维化、细胞凋亡、细胞表型转变等研究领域具有应用价值。

钩藤生物碱对自发性高血压大鼠胸主动脉成纤维细胞凋亡/增殖及FN、LN的影响

目的研究钩藤碱、异钩藤碱和钩藤总生物碱对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)胸主动脉血管外膜成纤维细胞(vascular adventitial fibroblasts,VAF)凋亡、增殖及Bcl-2、Bax、c-Fos、c-Myc、层黏连蛋白(laminin,LN)、纤维层黏连蛋白(fibronectin,FN)的影响。方法选择8周龄雄性SHR40只,随机分为模型组、卡托普利组(17.5mg/kg)、异钩藤碱组(5.0mg/kg)、钩藤碱组(5.0mg/kg)和钩藤总生物碱组(50.0mg/kg),每组8只。另选取8周龄雄性Wistar大鼠8只作为正常组。模型组和正常组灌胃给予等容量生理盐水。各组给药容积为每次10mL/kg,每周给药6天,连续8周,随体重变化调整给药量。采用AnnexinV-FITC结合PI染色、流式细胞术分析胸主动脉VAF凋亡率;免疫组化法检测胸主动脉VAFBcl-2、Bax、c-Myc、c-Fos、FN及LN蛋白表达;原位杂交法检测胸主动脉VAF转化生长因子-β1(transforming growth factor,TGF-β1)mRNA表达。结果与模型组比较,各用药组干预4、8周大鼠尾动脉收缩压均降低,胸主动脉VAF凋亡率、Bax蛋白均升高,Bcl-2、c-Fos、FN、LN蛋白及TGF-β1mRNA均降低,钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组c-Myc蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与卡托普利组比较,钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组大鼠尾动脉收缩压、c-Fos蛋白表达及TGF-β1mRNA差异无统计学意义(P>0.05);胸主动脉VAF凋亡率升高,Bcl-2、c-Myc及LN蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);钩藤碱组、异钩藤碱组Bax蛋白表达均升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);异钩藤碱组FN蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论钩藤碱、异钩藤碱和钩藤总生物碱可能通过调节原癌基因Bcl-2和Bax蛋白表达,促进SHR胸主动脉VAF凋亡,通过下调c-Fos、c-Myc蛋白和TGF-β1mRNA表达途径抑制SHR胸主动脉VAF增殖,并通过下调FN和LN蛋白表达而减轻细胞外基质的沉积,从而改善胸主动脉外膜重塑,降低尾动脉收缩压。

干扰素诱导蛋白p204过表达抑制大鼠主动脉血管外膜成纤维细胞凋亡、增殖与迁移

目的:观察干扰素诱导蛋白p204过表达对大鼠主动脉血管外膜成纤维细胞(VAFs)凋亡、增殖与迁移的影响。方法:分别应用携带p204基因(Ifi204)的慢病毒颗粒(Ifi204-Lv组)、空载慢病毒颗粒(Con-Lv组)感染VAFs,未经处理的VAFs作为阴性对照组。用噻唑蓝(MTT)比包法检测VAFs增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,细胞划痕法和Transwell法测定细胞迁移情况,应用实时定量逆转录-聚合酶链反应(realtime q RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blotting)分别检测p204、抑癌因子p53及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p21WAF(p21)的mRNA和蛋白表达。结果:Ifi204-Lv组与Con-Lv组、阴性对照组相比较,细胞增殖降低[(吸光度值),48 h:0.53±0.05 vs 0.66±0.03、0.63±0.06;72 h.0.89±0.06 vs 1.02±0.06、1.01±0.07]及迁移距离缩短[(像素),61.00±1.83 vs 74.50±6.25、75.50±7.85]、数量降低(61.75±10.69 vs 155.25±10.21、153.75±9.40),差异均有统计学意义(P均<0.05),但组问比较细胞凋亡率差异无统计学意义。与Con-Lv组、阴性对照组相比,Ifi204-Lv组的p204(3.45±0.15 vs 2.09±0.10、2.06±0.09)、p53(3.41±0.09 vs2.06±0.07、2.10±0.06)及p21(3.0l±0.08 vs2.05±0.06、2.11±0.08)的mRNA和蛋白表达均上调,差异均有统计学葸义(P均<0.05)。结论:p204过表达可抑制大鼠VAFs增殖与迁移,其机制可能部分与激活p53及p21表达有关。

丹参有效成分最佳配伍对载脂蛋白E^(-/-)小鼠血管外膜成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨丹参水溶性有效成分最佳配伍(SABP)对载脂蛋白E^(-/-)小鼠体内和体外血管外膜成纤维细胞(VAFs)增殖的干预作用。方法:对原代培养C57BL/6J小鼠、载脂蛋白E^(-/-)小鼠VAFs,体外分别给予正常培养基、SABP、瑞舒伐他汀。将载脂蛋白E^(-/-)小鼠分为模型组、SABP组、瑞舒伐他汀组,C57BL/6J小鼠作正常对照组,原代培养给药后的各组小鼠VAFs,采用CCK-8法检测VAFs的增殖情况。结果:体外和体内结果均显示,SABP和瑞舒伐他汀均明显抑制了载脂蛋白E^(-/-)小鼠VAFs的增殖,且SABP作用更显著。结论:SABP对载脂蛋白E^(-/-)小鼠VAFs的增殖有明显的抑制作用,有望改善血管重构,成为治疗心血管疾病替代药物。

液氮低温保存对大鼠主动脉平滑肌细胞和成纤维细胞MHC抗原无影响

目的 探讨液氮低温保存对同种异体主动脉移植物抗原性的影响 .方法 采用细胞培养技术和流式细胞仪技术研究液氮低温保存对大鼠主动脉平滑肌细胞和成纤维细胞主要组织相容性抗原 类 (MHC 类抗原 )表达的影响 .建立大鼠同种异体主动脉移植模型 ,采用免疫组织化学实验研究新鲜主动脉和低温保存的主动脉同种异体移植后 MHC 类抗原和 MHC 类抗原表达的区别 .结果 正常培养的大鼠主动脉平滑肌细和成纤维细胞 MHC 类抗原表达的阳性率分别为 (88.7± 4.3) %和 (84.8± 2 .0 ) % ;液氮低温保存的大鼠主动脉平滑肌和成纤维细胞在复苏后 MHC 类抗原表达的阳性率分别为 (89.4± 3.5 ) %和 (81.9± 2 .7) % .统计学分析表明大鼠主动脉平滑肌细胞和成纤维细胞的 MHC I类抗原表达在液氮低温保存前后无显著性差别 .免疫组织化学实验研究表明新鲜主动脉和低温保存的主动脉同种异体移植后MHC 类抗原和 MHC 类抗原表达无显著的差异 .结论 液氮低温保存对大鼠主动脉平滑肌细胞和成纤维细胞

人和大鼠胸主动脉成纤维细胞的原代培养

目的培养成纤维细胞,建立不同种属来源的胸主动脉成纤维细胞的培养方法并比较其形态差异。方法用消化法和贴壁法分离不同来源的成纤维细胞,利用差速培养法纯化成纤维细胞,并对所培养的细胞进行倒置显微镜观察和苏木素-伊红染色,观察成纤维细胞形态,并对培养细胞行波形蛋白免疫染色鉴定。结果接种24h后细胞全部贴壁,48h后人胸主动脉成纤维细胞体积增大并伸出伪足,形状以梭形或不规则形为主;而大鼠胸主动脉的成纤维细胞生长的相对较慢。结论用Ⅰ型胶原消化动脉的成纤维细胞效果较好,用差速生长纯化的成纤维细胞可用于实验研究。

静态与动态下脱细胞猪主动脉瓣种植人成纤维细胞初步研究

目的 探索在脱细胞猪主动脉瓣膜材料上种植人成纤维细胞的方法与效果 ;材料和方法 采用在脱细胞猪主动脉瓣膜材料上静态与动态种植人成纤维细胞 ,并对其结果进行比较研究 ;结果 静态种植不能在猪主动脉瓣叶的两侧形成完整的单层人成纤维细胞融合层 ;而经过动态种植 ,在一定条件下可以在猪主动脉瓣叶两侧形成完整的单层人成纤维细胞融合层 ;

清眩颗粒对高脂饲料喂养大鼠胸主动脉形态及核因子κB、血小板源生长因子B和碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的探讨清眩颗粒对大鼠主动脉病理形态学及核因子κB、血小板源生长因子B、碱性成纤维细胞生长因子阳性表达的影响。方法选取Wistar大鼠50只,随机分为空白对照组(对照组)、模型对照组(模型组)、清眩颗粒高剂量组(高剂量组)、清眩颗粒低剂量组(低剂量组)、银杏叶片对照组(银杏叶组),每组10只。除对照组喂食基础饲料外,其他各组喂食高脂饲料。喂养8周后,分别灌服蒸馏水、高剂量液、低剂量液、银杏叶片液1ml/100g,连续灌胃4周。检测大鼠胸主动脉病理形态学斑块大小及核因子κB、血小板源生长因子、碱性成纤维细胞生长因子阳性表达。结果清眩颗粒高、低剂量组和银杏叶片组大鼠胸主动脉粥样硬化病变程度较模型组明显减轻。与模型对照组相比,清眩颗粒高、低剂量组、银杏叶片对照组粥样斑块面积与管腔面积之比(分别为21.69±9.86、1.96±1.62、4.25±3.01、5.11±2.82)、胸主动脉壁核因子κB(分别为25.45±4.25、10.53±7.09、16.67±5.56、17.18±6.63,P<0.01)、血小板源生长因子(分别为25.18±8.76、8.32±5.17、12.76±4.38、13.32±5.16,P<0.01)、碱性成纤维细胞生长因子(分别为9.99±1.63、1.41±1.77、4.71±3.90、5.00±2.47,P<0.01)阳性细胞百分比降低,清眩颗粒高剂量组显著低于银杏叶片对照组(P<0.05)。结论说明清眩颗粒对动脉粥样硬化的作用可能与抑制动脉壁核因子κB、血小板源生长因子B、碱性成纤维细胞生长因子阳性表达有关。

黄芪-当归6种活性成分配伍对大鼠血管外膜成纤维细胞合成细胞外基质的影响

目的观察黄芪-当归活性成分阿魏酸(ferulic acid,FA)、毛蕊异黄酮苷(calycosinglucoside,CG)、芒柄花素(formononetin,FMN)、黄芪皂苷Ⅰ(astragaloside Ⅰ,ASⅠ)、黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ,ASⅣ)、毛蕊异黄酮(calycosin,CAL)配伍对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)诱导的大鼠血管外膜成纤维细胞(vascular adventitia fibroblasts,VAF)合成细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的影响。方法以AngⅡ诱导VAF增殖模型,采用目标成分“敲除/敲入”的方法,将细胞分为空白组、模型组、IC10配伍组、某一活性成分敲除组、某一活性成分敲入组,分别检测细胞及培养液中纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、层粘连蛋白(laminin,LN)、Ⅰ型胶原(collagen type Ⅰ,COLⅠ)、Ⅲ型胶原(collagen type Ⅲ,COLⅢ)含量,并检测细胞基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)、基质金属蛋白酶组织抑制剂2(tissue inhibitor of metalloproteinase 2,TIMP2)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)蛋白表达,研究黄芪-当归6种活性成分配伍对VAF合成ECM的影响。结果黄芪-当归6种活性成分配伍抑制VAF合成FN、LN、COLⅠ、COLⅢ(P<0.01)。FA、CG、FMN、ASⅠ敲入后抑制FN、LN合成的作用增强(P<0.05或P<0.01),FA、CAL、FMN、ASⅠ、ASⅣ敲入后抑制COLⅠ、COLⅢ合成的作用增强(P<0.05或P<0.01)。黄芪-当归6种活性成分配伍促进MMP2、TIMP2的表达(P<0.01),FA、CG、FMN、ASⅣ、CAL敲入后促进MMP2表达的作用增强(P<0.05或P<0.01),FMN、ASⅣ、CAL敲入后促进TIMP2表达的作用增强(P<0.05或P<0.01);黄芪-当归6种活性成分配伍抑制TGF-β1表达(P<0.05),FA、CG、FMN敲入后抑制TGF-β1表达的作用增强(P<0.05或P<0.01)。结论黄芪-当归6种活性成分配伍可抑制VAF合成ECM,其作用可能是通过调节TGF-β1、MMP2、TIMP2发挥的。

载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化早期血管外膜成纤维细胞增殖活性增强

目的:探讨动脉外膜成纤维细胞增殖与早期动脉粥样硬化病灶形成的关系。方法:选择6周龄载脂蛋白E基因敲除[apoE(-/-)]小鼠和野生型C57BL/6小鼠,高脂喂养2、4和10周后,在各个时点处死动物前24 h经腹腔注射5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU),后选取升主动脉制备连续切片,通过HE染色观察组织形态学的变化,用免疫组化方法观察不同时点血管外膜及内膜BrdU的表达变化。体外培养高脂喂养2周的apoE(-/-)小鼠和C57BL/6小鼠动脉外膜成纤维细胞,通过BrdU掺入法测定细胞增殖活性,流式细胞术测定细胞周期。结果:体内实验发现apoE(-/-)小鼠高脂喂养2周后,在无可见内膜病灶形成之前,首先在主动脉外膜发现BrdU标记的阳性细胞,之后才在损伤内膜观察到BrdU标记细胞。而C57BL/6小鼠在任何时点都未检测到BrdU标记的细胞。体外实验观察到apoE(-/-)小鼠血管外膜成纤维细胞BrdU标记的细胞数显著多于C57BL/6小鼠(P<0.01),apoE(-/-)小鼠血管外膜成纤维细胞S期及G2/M期所占百分比明显高于对照组(P<0.05)。结论:血管外膜成纤维细胞增殖可能参与早期动脉粥样硬化病灶形成。

损伤动脉外膜重塑和成纤维细胞表型的变化

观察兔腹主动脉损伤后血管外膜及外膜细胞增殖和表型特征的变化 ,采用病理形态学、计算机图像分析、免疫组织化学和透射电镜方法观察兔腹主动脉损伤后血管外膜和外膜细胞的变化。结果发现 ,球囊损伤后 3天、7天、14天和 2 8天血管外膜厚度均显著增加。外膜细胞密度在损伤后 3天开始增加 ,7天显著增加。外膜细胞增殖指数在损伤后 3天达到高峰 ,7天仍显著增高。外膜细胞的α actin染色反应在损伤后 3天由阴性转为弱阳性 ,7天和 14天呈强阳性。损伤后 7天和 14天外膜细胞大量微丝和粗面内质网明显扩张 ,呈现出肌成纤维细胞的特征。结果提示 ,动脉损伤后早期血管外膜显著增厚 ,外膜细胞增殖活跃 ,成纤维细胞逐渐转化为肌成纤维细胞 ,伴有收缩蛋白合成增加 。

载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化早期血管外膜成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞

目的探讨动脉外膜成纤维细胞表型转化与早期动脉粥样硬化病灶形成的关系。方法选择6周龄载脂蛋白E基因敲除小鼠和野生型C57BL/6小鼠,高脂喂养2、4和8周后,在各个时间点处死动物后选取升主动脉制备连续切片,用免疫组织化学方法观察不同时间血管外膜α平滑肌肌动蛋白及转化生长因子β1的表达变化。体外培养高脂喂养2周的载脂蛋白E基因敲除小鼠和C57BL/6小鼠动脉外膜成纤维细胞,免疫荧光染色检测α平滑肌肌动蛋白的表达,通过透射电镜观察细胞超微结构,Western Blot检测α平滑肌肌动蛋白及转化生长因子β1蛋白的表达。结果体内实验发现载脂蛋白E基因敲除小鼠高脂喂养2周、4周后血管外膜检测到α平滑肌肌动蛋白的阳性表达,8周后呈现弱阳性,随高脂喂养时间增加,载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉外膜细胞转化生长因子β1表达增强。而C57BL/6小鼠血管外膜细胞一直未检测到α平滑肌肌动蛋白及转化生长因子β1的阳性表达。体外实验观察到载脂蛋白E基因敲除小鼠血管外膜成纤维细胞部分表现为α平滑肌肌动蛋白阳性,肌丝明显增多,α平滑肌肌动蛋白及转化生长因子β1蛋白表达水平都明显高于野生型C57BL/6小鼠(P<0.05),而C57BL/6小鼠血管外膜成纤维细胞则表现为α平滑肌肌动蛋白阴性,超微结构无明显改变。结论动脉粥样硬化病灶形成早期血管外膜成纤维细胞表型即转化为肌成纤维细胞。

NR1D1在血管外膜成纤维细胞增殖和迁移中的作用

目的探讨核受体亚家族1组D成员1(nuclear receptor subfamily 1,group D,member 1,NR1D1)在小鼠血管外膜成纤维细胞(adventitial fibroblasts,AFs)增殖和迁移中的作用及机制。方法培养C57BL/6J小鼠原代AFs,用携带Nr1d1基因的腺病毒转染AFs过表达NR1D1,用SKL2001恢复β-连环蛋白(β-catenin)表达。增殖细胞核抗原(Ki-67)细胞免疫荧光染色和CCK-8试剂盒用于检测细胞增殖,划痕实验用于检测细胞迁移速度。qPCR检测Nr1d1的mRNA水平,Western blot检测NR1D1、β-catenin蛋白水平。为了探究NR1D1在血管内膜增生中的作用,将20只雄性野生型C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、颈动脉内皮损伤组、假手术+SR9009(NR1D1激动剂)组以及颈动脉内皮损伤+SR9009组,每组5只。造模完成后按组分别腹腔注射DMSO或SR9009(100 mg·kg^(-1)·d^(-1)),持续14 d。造模成功28 d后取材,HE染色观察颈动脉内膜增生程度。结果过表达NR1D1明显降低Ki-67阳性细胞率(P<0.01)及总细胞数目(P<0.01),并且使AFs划痕愈合速度减慢(P<0.01)。过表达NR1D1明显抑制β-catenin表达(P<0.05)。SKL2001恢复β-catenin表达后,过表达NR1D1对AFs增殖和迁移的抑制作用消失(P<0.01)。上调NR1D1活性能减轻颈动脉内皮损伤后内膜增生(P<0.01)。结论NR1D1可能通过抑制β-catenin表达,从而抑制小鼠AFs的增殖和迁移。

血管外膜成纤维细胞在动脉粥样硬化及PCI后再狭窄中的作用

血管外膜是动脉粥样硬化(AS)和经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后再狭窄等血管重构疾病的"积极参与者"。血管外膜不仅发挥简单的支持血管、提供营养物质的作用,越来越多的研究表明,外膜还主动参与了AS和PCI后再狭窄的病理过程。作为血管外膜最重要的组成部分,外膜成纤维细胞(AF)通过活化、增殖、迁移,分泌细胞因子和细胞外基质导致血管外膜和内膜的增厚和管腔狭窄。另外,AF活化后还通过参与一氧化氮的调节、氧化应激和炎症反应等促进AS和PCI后再狭窄的形成。