Ross手术治疗先天性主动脉瓣膜疾病

目的 总结 Ross手术治疗先天性主动脉瓣膜疾病的临床经验和手术结果。 方法 自 1998年 3月至2 0 0 2年 7月 ,16例主动脉瓣膜疾病患者 (平均年龄 14 .0± 9.9岁 )接受 Ross手术 ,即自体肺动脉瓣移植术。诊断为主动脉瓣二瓣化畸形 ,主动脉瓣狭窄 9例 ,主动脉瓣发育不良呈穹隆状狭窄 2例 ;主动脉瓣脱垂 5例 ,其中合并室间隔缺损和动脉导管未闭各 1例。 结果 无手术死亡 ,全部患者治愈出院。随访 1～ 4 8个月 ,平均 30± 13个月 ,无远期死亡 ,无瓣膜相关并发症。所有患者心功能 级。超声心动图提示主动脉瓣及同种肺动脉瓣功能良好 ,仅 1例患者主动脉瓣有极少量反流 ;所有患者主动脉瓣跨瓣压差 2 .1± 0 .8mm Hg(1k Pa=7.5 mm Hg) ,左心室流出道及主动脉瓣环随着年龄的生长而增长 ,平均瓣环直径较术后增加 4 .0± 2 .1mm。 结论 Ross手术治疗主动脉瓣膜疾病安全 ,效果好 ,随机体发育而生长 ,可适于某些主动脉瓣瓣膜疾病 ,尤其适于小儿及年轻患者。

主动脉瓣膜间质细胞焦亡在钙化性主动脉瓣疾病中的作用

目的体外培养主动脉瓣膜间质细胞(AVICs)并构建其钙化模型,探讨细胞焦亡在钙化性主动脉瓣膜疾病(calcific aortic valve disease,CAVD)中的作用。方法以钙化诱导培养基诱导AVICs钙化,依据细胞处理方式分为对照组(标准培养基培养)、钙化组(钙化诱导培养基培养)和抑制剂组(VX-765预处理24 h后钙化诱导培养基培养),采用CCK-8法测定各组细胞的存活率,茜素红染色检测各组细胞钙结节表达水平,采用免疫印迹法检测各组细胞中钙化相关蛋白OPN、RunX2,细胞焦亡相关蛋白NLRP3、GSDMD、Caspase-1、GSDMD-N、Cleaved-Caspase-1以及炎症因子IL-1β、IL-18的相对表达水平。结果与对照组相比,钙化组AVICs的钙结节增多,钙化相关蛋白OPN、RunX2及细胞焦亡相关蛋白NLRP3、GSDMD、Caspase-1、GSDMD-N、Cleaved-Caspase-1相对表达水平均增高(t=4.586~15.842,P<0.01);与钙化组相比,抑制剂组AVICs的钙结节减少,钙化相关蛋白OPN、RunX2,细胞焦亡相关蛋白NLRP3、GSDMD、Caspase-1、GSDMD-N、Cleaved-Caspase-1及炎症因子IL-1β、IL-18相对表达水平均降低(t=5.789~19.227,P<0.01)。结论AVICs钙化过程中存在细胞焦亡,应用VX-765干预钙化培养基诱导的AVICs可在一定程度上抑制细胞焦亡过程。

生物信息学联合机器学习探究主动脉瓣膜钙化潜在的诊断标志物

目的:通过机器学习方式从免疫、干细胞、成骨3个层面寻找主动脉瓣膜钙化潜在的诊断标志物。方法:利用R语言将高通量基因表达数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)中GSE51472、GSE12644和GSE554923个数据集的数据进行均一化后合并分析,得到差异表达基因。从Amigo数据库下载免疫、干细胞、成骨相关基因集分别与差异基因取交集,得到钙化瓣膜组织中异常表达的免疫、干细胞、成骨相关基因。利用机器学习方法对差异基因进行深度学习,寻找潜在的诊断生物标志物。进行基因富集(gene set enrichment analysis,GSEA)分析。临床标本结合细胞学实验验证诊断标志物的应用价值。结果:3个数据集合并分析得到102个差异基因,与免疫相关的有51个,与干细胞相关的有1个,与成骨相关的有2个。GSEA分析显示无论是免疫相关基因还是干细胞、成骨相关基因均涉及免疫调控通路。多种机器学习合并分析结果显示白介素受体7(interleu-kin 7 receptor,IL7R)最具有诊断钙化性主动脉瓣病的价值,但临床标本并不支持生物信息分析结果。细胞实验显示IL7R可以促进瓣膜间质细胞增殖、成骨钙化。结论:IL7R可能不是外周血诊断钙化性主动脉瓣疾病(calcific aortic valve disease,CAVD)的标志物,但是它在CAVD疾病演变过程中可能有重要作用,因此进一步探究IL7R在CAVD中的作用很有必要。

自体肺动脉瓣移植术治疗主动脉瓣膜疾病

该院心外科专家日前成功地为一位患有先天性心脏病的患儿施行了自体肺动脉瓣移植术、以治疗主动脉瓣膜疾病。

利用导管损伤制备钙化性主动脉瓣疾病小鼠模型的最优时间选择

目的 探讨利用导管损伤制备钙化性主动脉瓣疾病小鼠模型的最优时间。方法 通过向8周龄小鼠右颈总动脉插入导管,在超声引导下将导管送至主动脉瓣口处损伤主动脉瓣膜,对导管损伤主动脉瓣膜后不同时间段的C57BL6小鼠主动脉瓣膜进行比较,将小鼠分为对照组、造模后4周、造模后8周与造模后16周组,从适应性喂养至造模结束取材均给予普通饲料饮食。使用超声检测小鼠心脏短轴缩短率、主动脉瓣膜峰值流速及主动脉瓣口面积,使用苏木素-伊红染色观察小鼠主动脉瓣膜厚度变化及瓣膜组织结构变化,利用茜素红染色检测小鼠主动脉瓣膜钙盐沉积情况,使用免疫荧光方法检测瓣膜成骨相关蛋白碱性磷酸酶表达。结果 小鼠从造模8周后开始出现心脏短轴缩短率明显下降。导管损伤4周、8周、16周后小鼠主动脉瓣膜明显增厚(P=0.002),4周、8周和16周比较无统计学差异;导管损伤4周、8周、16周后钙盐沉积明显增多(P<0.0001),4周、8周和16周比较无统计学差异;4周、8周、16周后成骨相关蛋白ALP指标表达量明显升高(P=0.0016)。导管损伤4周、8周和16周ALP表达量相比无统计学差异。结论 在保证小鼠生存率的情况下,导管损伤主动脉瓣膜4周后的小鼠模型即可模拟钙化性主动脉瓣膜疾病病理生理改变。

左心房容积指数在无症状重度主动脉瓣狭窄患者中的临床应用

目的探讨左心房容积指数在诊断无症状重度主动脉瓣狭窄(AS)患者中的应用价值。方法收集左心室射血分数(LVEF)>50%重度AS患者48例,根据有无临床症状分为有症状AS组及无症状AS组,每组各24例。采用超声心动图测量左心室腔大小及左心室质量(LVMI),通过Simpson法测得左心房容积指数,PWD测量二尖瓣舒张早期和晚期血流速度峰值(E、A),DTI测量二尖瓣环舒张早期及舒张晚期血流速度峰值(Em、Am)。根据重度AS患者临床症状鉴别标准构建ROC曲线。LAVI与超声参数的相关性采用Spearman和Pearson相关分析;对LAVI增大的其他主要影响因素进行多因素回归分析。结果有症状AS组较无症状AS组AV、MPG、PWT、SWT均增加(P均<0.05);有症状AS组LAVI明显高于无症状AS组(P=0.001)。LAVI预测有症状重度AS患者的最佳界值为39.85ml/m2,曲线下面积0.959,敏感度95.5%,特异度68.2%;LAVI与E/Em、LVMI呈正相关(r=0.639、0.658,P均<0.001)。多因素回归分析结果显示,E/Em和LVMI是LAVI的独立影响因子。结论 LAVI能预测无症状重度AS,且与左心室舒张功能指标有很好的相关性。

BMP9诱导可逆永生化小鼠瓣膜间质细胞成骨能力研究

目的:建立具有快速增殖能力的可逆永生化主动脉瓣膜间质细胞系。方法:体视显微镜下利用弹簧剪夹取瓣膜组织,胶原酶消化后加入逆转录永生化病毒,利用免疫荧光鉴定细胞是否属于间质细胞,显微镜观察细胞形态,结晶紫、CCK-8和流式细胞周期技术检测细胞增殖能力,碱性磷酸酶染色和茜素红钙盐沉积实验检测细胞成骨能力,q-PCR及Western blot检测细胞成骨标志物。结果:经光镜观察和免疫荧光鉴定,成功取到瓣膜间质细胞。加入永生化病毒后,经光镜观察和免疫荧光确认瓣膜间质细胞未发生表型改变,且在永生化的细胞中能够检测到大量SV40T(P<0.001)。结晶紫染色、CCK-8(P<0.001)和流式细胞周期结果提示永生化后的瓣膜间质细胞增殖速度变快。加入成骨诱导因子骨形态发生蛋白-9(bone morphogenetic protein9,BMP9)后永生化瓣膜间质细胞表现出较好的成骨能力,多数成骨标志物在分子层面的RNA和蛋白水平明显升高。去永生化后瓣膜间质细胞形态无明显改变,q-PCR结果显示SV40T明显降低(P<0.001),细胞增殖能力明显下降,且细胞周期被阻滞在G_(0)/G_(1)期。在BMP9诱导下去永生化瓣膜间质细胞同样具有成骨分化能力,且绝大多数成骨标志物都明显上升。结论:本研究成功建立可逆永生化瓣膜间质细胞系,BMP9可诱导其成骨分化,用于后续钙化性主动脉瓣膜疾病研究。

趋化因子受体CX3CR1调控人主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的作用研究

目的:探究趋化因子受体CX3CR1调控人主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的作用和机制,为钙化性主动脉瓣膜疾病的早期干预和治疗提供新思路。方法:取非钙化主动脉瓣(3例)和钙化主动脉瓣(5例),免疫组织化学染色检测成骨相关转录因子Runx2、骨桥蛋白OPN和骨钙蛋白OCN的表达;取3例非钙化的主动脉瓣,采用胶原酶连续消化法分离人主动脉瓣膜间质细胞,观察细胞形态及生长状态,并采用细胞免疫荧光进行表型鉴定。对成骨诱导培养的人主动脉瓣膜间质细胞分别过表达和干扰趋化因子受体CX3CR1,平行设置CM组、OM组和negative control+OM组,采用qPCR和Western blot检测Runx2、OPN和OCN的表达,Western blot检测AKT和p-AKT的表达。茜素红S染色评价晚期钙结节形成情况。结果:临床标本显示钙化的主动脉瓣较非钙化的主动脉瓣高表达CX3CR1(P <0. 05);成功分离人主动脉瓣膜间质细胞,α-SMA和Vimentin阳性,vWF阴性。与CM、OM、negative control组比较,CX3CR1+OM组Runx2、OPN和p-AKT表达上调(P <0. 05),且茜素红S染色可见明显钙结节;与CM、OM、negative siRNA control+OM组比较,si CX3CR1+OM组Runx2、OPN和p-AKT表达下调(P <0. 05),且茜素红S染色可见钙结节减少。结论:趋化因子受体CX3CR1可能通过AKT信号通路促进人主动脉瓣膜间质细胞成骨分化。

自噬负性调节LPS诱导的猪主动脉瓣瓣膜间质细胞成骨样表型转换

该文主要研究自噬对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的瓣膜间质细胞成骨样表型转换的影响与机制。免疫组化检测钙化(3例)与正常人(3例)主动脉瓣膜标本中成骨、炎症、自噬相关指标的表达情况。LPS处理猪原代主动脉瓣膜间质细胞(porcine aortic valvular interstitial cells,pAVICs)(2~6代),Western blot检测成骨、炎症、自噬指标水平变化。自噬激动剂、抑制剂联合LPS处理pAVICs,Western blot检测自噬、成骨、炎症水平变化,转染GFP-LC3病毒以观察自噬激活水平。NF-κB抑制剂联合LPS处理pAVICs,Western blot检测炎症、成骨水平变化。结果显示,成骨指标(RUNX2、OPN)、炎症指标(p-NF-κB)、自噬指标(LC3、Beclin 1)在病变主动脉瓣膜标本中,表达水平皆高于正常对照组;Western blot显示,LPS处理可引起pAVICs的成骨、炎症、自噬水平上调;自噬抑制剂对LPS诱导的自噬激活有抑制作用,对LPS诱导的成骨水平上调有促进作用;自噬激动剂对LPS诱导的自噬激活有促进作用,可明显抑制LPS诱导的成骨水平上调;NF-κB抑制剂可抑制LPS诱导的炎症,成骨水平上调;自噬激动剂、抑制剂可分别抑制与促进LPS诱导的炎症水平上调。结果表明,自噬负性调节炎症刺激因素LPS诱导的瓣膜间质细胞成骨样表型转换,可能是通过抑制炎症通路NF-κB发挥调节作用。