HPV外壳蛋白L1 B细胞共同表位短肽免疫学特性研究

目的：明确一种人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)外壳蛋白L1 B细胞共同表位短肽作为HPV疫苗发展的可能性。方法：通过对几种主要致病型别HPV外壳蛋白L1的三维结构及其氨基酸序列的分析，构建HPV外壳蛋白L1 B细胞共同表位短肽疫苗，以该短肽对动物进行免疫接种诱导抗短肽抗血清，再用ELISA、SDS-PAGE电泳、Western blot及免疫组化等方法对短肽和抗短肽血清的免疫学特性进行检测。结果：短肽自身免疫原性较差，而短肽与Furends完全佐剂合用免疫动物则能诱导较高滴度的抗短肽血清并且该抗血清能与多种型别HPV蛋白发生反应。结论：HPV外壳蛋白L1 B细胞共同表位短肽有望作为HPV疫苗候选物。

噬菌体表达短肽模拟日本血吸虫肝门型童虫表膜抗原表位的研究

目的 从噬菌体随机 12肽库免疫筛选日本血吸虫肝门型童虫表膜抗原 (SjHmAg)的模拟短肽分子 ,探讨其抗日本血吸虫的免疫保护效果。方法 以纯化的SjHmAg免疫血清IgG为配基免疫筛选噬菌体 12肽库 ,按吸附 洗脱 扩增的淘洗过程进行 3轮筛选 ;随机挑取噬菌体克隆用ELISA检测其特异性 ,并测序 ;用混和噬菌体克隆皮下免疫小鼠 3次 ,分别在 0、2、4周进行 ,第 6周每鼠经腹部感染 4 0± 1条日本血吸虫尾蚴 ,4 2d后剖杀冲虫 ,观察减虫及减卵效果。结果 经 3轮筛选 ,特异性噬菌体得到有效的富集 ,产出率为第一轮的 2 10倍 ;随机挑取 2 4个噬菌体克隆经ELISA鉴定 ,有 2 1个克隆能与SjHmAg免疫血清特异性反应 ;自动测序仪测序 ,结果发现它们的外源肽具核心序列 (STRKD) ;与对照组相比 ,混和噬菌体克隆免疫小鼠的减虫率为 16 .2 % ,减卵率为 5 9.0 %。结论 利用噬菌体展示技术可获得模拟SjHmAg短肽 ,这些短肽分子能诱导部分抗日本血吸虫保护力。

从噬菌体短肽库中筛选模拟乳腺血清抗原表位

目的： 从１５ 肽 ＰⅢ融合噬菌体库中筛选乳腺血清抗原（ Ｍ Ｓ Ａ） 的模拟表位， 并验证免疫 Ｐ Ｃ Ｒ 筛选法是否与传统的 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 筛选方法具有一致的结果。方法： 用 Ｍ Ｓ Ａ 的特异单克隆抗体３ Ｅ１２ 作 “诱饵”， 亲和选择法（ｐａｎｎｉｎｇ ） 富集特异噬菌体， 用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 及免疫 Ｐ Ｃ Ｒ 法挑选阳性克隆并验证特异性。结果： 经过四轮ｐａｎｎｉｎｇ ， 特异噬菌体产出率约为第一轮的１８８倍， 说明抗体３ Ｅ１２ 对噬菌体进行了选择性富集。选出了１０ 个 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 反应呈明显阳性克隆， 其中４ 个克隆能抑制天然 Ｍ Ｓ Ａ 抗原抗体的结合。免疫 Ｐ Ｃ Ｒ 的筛选结果与前者基本一致， 但竞争抑制试验中， 未能达到理想效果。结论： 推测这４个克隆表达的短肽与抗体３ Ｅ１２ 识别的表位具有一致或相似的结构。免疫 Ｐ Ｃ Ｒ 的筛选法可以同 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 方法结合起来作为常规方法之一， 但它不适于做竞争抑制试验。

新型ELISA检测戊型肝炎病毒IgM抗体的敏感度与特异度评价

目的 评估基于戊型肝炎病毒（HEV）主要免疫表位多肽及其截短多肽的新型ELISA检测抗HEV IgM的敏感度与特异度.方法 根据抗HEV抗体与主要免疫表位多肽的高反应性以及与截短多肽的不反应性,分别以两种多肽为包被抗原,建立新型ELISA法,检测2007-2012年收集的612例可疑HEV感染者血清抗HEV IgM,并与万泰HEV IgM抗体诊断试剂盒检测结果比较,结果不一致血清用免疫印迹法（Western blotting）确认,χ^2检验比较两种试剂灵敏度和特异度.结果 抗HEV IgM检测中,新型ELISA阳性326例,阴性286例;万泰试剂阳性370例,阴性242例;两种试剂同时阳性320例,同时阴性236例.在万泰试剂阳性而新型ELISA阴性的50例中,Western blotting证实阳性21例,阴性29例;在万泰试剂阴性而新型ELISA阳性的6例中,Western blotting显示阳性与阴性各3例.以两种试剂同时阳性或Western blotting阳性为标准,万泰试剂与新型ELISA灵敏度分别为99.1％（95％ CI：0.972-0.998）和93.8％（95％ CI：0.907-0.961）,差异有统计学意义（χ^2=13.988,P＜0.001）;特异度分别为89.2％（95％ CI：0.847-0.925）和98.9％（95％ CI：0.965-0.997）,差异有统计学意义（χ^2=22.466,P＜0.001）.结论 与万泰试剂相比,新型ELISA检测抗HEV IgM敏感度略低,但特异度较好,可减少抗HEV IgM检测中的假阳性.

HPV L1 C-末端保守氨基酸序列的免疫生物学性质的探讨

目的探讨HPV L1 C-末端保守氨基酸序列的免疫生物学性质。方法以合成HPV L1保守序列短肽、点突变该序列中酰胺化酶作用位点后的短肽以及15个氨基酸残基长的该序列交错合成的4个小肽免疫动物。采用T细胞增殖实验确定各肽是否含有T细胞表位;以ELISA方法确定各肽有无B细胞表位及有效免疫位点。结果不同肽免疫鼠T细胞增殖实验差异无统计学意义(P>0.05),两短肽免疫兔血清中IgG抗体滴度显著强于4个小肽,但兔和鼠分泌物中均未测出抗体IgG。两短肽的免疫血清对相应短肽的反应明显强于交叉反应的强度。原序列短肽的免疫血清对来自于该短肽的N-末端序列短肽的反应略强,而点突变酰胺化酶作用位点后短肽的免疫血清对C-末端序列的短肽反应略强。结论HPV L1保守序列短肽和点突变酰胺化酶作用位点后短肽在诱导体液免疫的能力方面相似,但在交叉免疫反应性及有效免疫位点方面存在差异;两短肽的免疫原性显著强于4个小肽。