鸡主要组织相容性复合体分子结构与抗病性关系研究进展

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC)作为鸡免疫系统中的一个重要部分,主要负责将抗原表位递呈到特异性T淋巴细胞中,诱导免疫应答反应。鸡MHC优势表达1个MHCⅠ分子BF2和1个MHCⅡ分子BLB2,其中MHCⅠ分子结合来自细胞质中蛋白多肽,MHCⅡ分子结合来自细胞内囊泡中蛋白多肽和细胞外源性多肽。MHC等位基因多态性对其分子空间结构和结合肽段特性非常重要。不同单倍型MHC由于等位基因的差异其肽结合基序也存在差异,进而影响MHC分子递呈抗原肽数量,影响T细胞免疫应答强度,最终导致不同单倍型鸡对同一病原体表现出抗性或易感性。与人MHC分子相比,紧凑且简单的鸡MHC优势表达单个Ⅰ类分子的特性可以决定鸡是否会对某种病原体存在抗性。为了更好地认识鸡MHC分子在病毒感染过程中的作用及抗病性机制,解析其结构并进行功能研究非常必要。作者主要介绍了鸡MHC的分子结构特征,重点比较了不同单倍型MHC分子结构差异与抗病性的关系,总结了鸡MHC肽结合基序和禽流感病毒抗原肽的鉴定工作,为进一步理解MHC分子递呈肽给T淋巴细胞的机制和开发T细胞表位疫苗奠定基础。

卵巢上皮性癌组织及血清中MICA的表达和含量及临床意义

目的:检测卵巢上皮性癌组织及血清中主要组织相容性复合体相关蛋白A(MICA)的表达和含量,探讨其与卵巢上皮性癌细胞分化程度、组织学类型、临床分期的关系及临床意义。方法:免疫组化SP法检测卵巢上皮性癌(59例)及卵巢上皮性良性肿瘤组织(12例)、正常卵巢上皮组织(15例)膜型主要组织相容性复合体相关蛋白A(mMICA)的表达;ELISA法检测卵巢上皮性癌、卵巢上皮性良性肿瘤及健康人(15例)血清可溶性主要组织相容性复合体相关蛋白A(sMICA)的含量。结果:①mMICA在卵巢上皮性癌和卵巢上皮性良性肿瘤组织表达阳性率分别为72.88%、8.33%,差异有高度统计学意义(P<0.01)。在卵巢上皮性癌低分化组和中分化组表达阳性率分别为90.48%、63.16%,Ⅰ～Ⅱ期组和Ⅲ～Ⅳ期组表达阳性率分别为45.45%、79.17%,差异均有统计学意义(P<0.05)。在正常卵巢上皮组织不表达。②血清中sMICA含量,卵巢上皮性癌20.79±8.37ng/ml、卵巢上皮性良性肿瘤9.98±1.75ng/ml、健康人6.47±1.69ng/ml,差异有高度统计学意义(P<0.01)。在卵巢上皮性癌低分化组含量高于中分化组,Ⅲ～Ⅳ期组高于Ⅰ～Ⅱ期组,差异有统计学意义及高度统计学意义(P<0.05,P<0.01)。③在卵巢上皮性癌不同组织学类型的卵巢上皮组织中mMICA的表达阳性率及血清中sMICA含量比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:卵巢上皮性癌组织mMICA表达阳性率及血清中sMICA含量均较高,且均与卵巢上皮性癌细胞分化程度、临床分期有关。检测血清sMICA含量可能作为辅助诊断及评价卵巢上皮性癌病情的一个指标。

玻璃红鲤MHCⅡ类基因多态性与组织表达分析

以cDNA为模板进行PCR扩增和克隆分析,从7尾玻璃红鲤(Cyprinus carpio var.wananensis)的70个有效克隆中,获得长度为624 bp的MHC IIα/β不同编码序列25/31个,分属于7/10个不同等位基因,揭示玻璃红鲤MHC II类基因的多态性仍较丰富。其中Cyca-DXA17*01和Cyca-DAB1*1201、Cyca-DAB1*1301、Cyca-DAB3*1901、Cyca-DAB3*2001、Cyca-DAB3*2101、Cyca-DAB3*2201为新发现的7个基因。分析表明,α1/β1结构域的核苷酸/氨基酸变异位点数明显高于α2/β2结构域;α1、β1结构域抗原结合位点(PBR)的ω值(ω=dN/dS,5.209和1.703)都大于1,揭示玻璃红鲤MHC II类基因在进化过程中受到正向选择作用。半定量分析显示,玻璃红鲤MHC II类基因在肾和脾中有较强表达,中等程度表达于胃、肝和肠,而鳃、心和眼的表达较弱。

鸡MHC与传染性疾病遗传抗性的相关性研究进展

鸡是我国主要的家禽品种,抗病分子育种在鸡的疾病尤其是传染病控制中有着重要地位,抗性基因选择是其技术关键。鸡主要组织相容性复合体(MHC)基因具有高度多态性,与多种传染性疾病抗性紧密相关,受到家禽育种专家的高度关注。文章介绍国外有关鸡MHC与传染性疾病抗性的相关性及抗性基因研究进展,并展望其在鸡抗病育种中的应用前景。

草鱼MHC class Ⅰ基因多态性及其与鱼体抗柱形病能力关系分析

用1对引物HMC6-S和MHC6-A分别从草鱼(Ctenopharyngodon idellus)40尾抗病个体和40尾易染个体的基因组DNA中扩增MHC基因片段,扩增产物长度为262bp。在262bp的核苷酸序列中,有50个(19%)多态位点。在其编码的87个氨基酸位点中,有16个多态位点(18.39%),其中有10个位点发生在多肽结合位点上(62.5%)。对核苷酸替代的类型和位点进行分析,发现多肽结合位点的非同义碱基替代率与同义碱基替代率均大于非多肽结合位点的非同义碱基替代率与同义碱基替代率,表明氨基酸替代替换集中出现在多肽结合位点(PBR)上。分析80个个体的测序结果,发现有17种不同的MHC classⅠ等位基因,编码17种不同的氨基酸序列。等位基因A、B、C、D是2个群体共有的,其中等位基因A出现的频率最高,占总样本数量的36.25%;等位基因E、F、G、H、I、P只出现在抗病个体中,等位基因J、K、L、M、N、O、Q只出现在易染个体中。

长江草鱼群体MHC Class ⅡB的多态性和进化分析

克隆及测序草鱼（Ctenopharyngodon idella）长江3个群体的主要组织相容性复合体（MHC）Class II B基因编码β1和β2区的第2和第3个外显子及两个外显子之间的内含子,分析了草鱼MHC的进化模式和种群遗传结构。结果显示：实验共定义了34个等位基因,每条序列包括长为130~136 bp的第2个外显子,长为218 bp的第3个外显子以及长81~371 bp的内含子。序列分析揭示,第2个外显子有106个核苷酸变异位点（78%）和40个氨基酸变异位点（88%）,而第3个外显子有100个核苷酸变异位点（45%）和41个氨基酸变异位点（56%）,β1变异要大于β2区。用β1和β2区序列分别构建的邻接（NJ）系统树均显示5个具有高支持率的谱系,结合序列变异特点和内含子长度,推测草鱼至少存在5个MHC Class II座位。分别计算β1的肽结合位点（PBR）、非肽结合位点及β2的非同义替换率（dN）和同义替换率（dS）,PBR的dN/dS为2.03（P〈0.05）,非肽结合位点和β2则小于1,表明草鱼MHC受到歧化选择作用。根据等位基因在群体中的分布频率作分子方差分析（AMOVA）,得出FST为0.37%,提示长江草鱼MHC没有遗传分化。

云南高峰牛MHC-DQB基因外显子2遗传多态性分析

本研究采用PCR直接测序和PCR-RFLP法研究了云南高峰牛MHC-DQB基因外显子2(DQB.2)的遗传多态性,并利用DNAMAN软件分析了云南高峰牛与部分物种DQB.2相应核苷酸序列的同源性。结果发现,共检测到了17个等位基因,其中HaeⅢ酶切位点存在10种基因型,由A、B、C、D和E 5个复等位基因控制;RsaⅠ酶切位点存在22种基因型,由A、B、C、D、E、F、G、H、I、J和K共11个复等位基因控制;TaqⅠ酶切位点只出现了1种基因型。分析发现,云南高峰牛DQB.2基因的12、25、63、96、106、126、152、156、165、204位的碱基表现出了多态性。所分析的物种该基因片段大小相同均为270bp,云南高峰牛第224位碱基缺失及236位碱基插入现象。云南高峰牛与人、猪、马、绵羊、黄牛×瘤牛的核苷酸序列的同源性分别为81.4%、83.3%、78.1%、87.7%、86.6%。经χ2检验结果表明,HaeⅢ和TaqⅠ酶切位点处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),而RsaⅠ酶切位点则未达到Hardy-Weinberg平衡状态(P<0.05)。

白鹭MHCⅡDABⅠ基因第二外显子的多态性与进化

克隆测序白鹭(Egretta garzetta)5个种群138份个体组织样本的主要组织相容性复合体Ⅱ类B基因(MHCⅡDABⅠ)第二外显子(exon2)序列,分析探讨exon2的多态性、进化选择、系统关系和种群遗传结构.主要结果如下:白鹭MHCⅡDABⅠexon2序列长度为270bp,共计定义了139个等位基因;序列分析显示exon2有101个核苷酸变异位点(37.4%)和31个氨基酸变异位点(34.4%);基于贝叶斯法构建的系统树显示白鹭MHCⅡDABⅠexon2有5个高支持率的谱系;肽结合位点(PBR)、非肽结合位点(non-PBR)的非同义替换率(dN)和同义替换率(dS)比值计算显示,PBR的dN/dS为1.99(p<0.05),而non-PBR的dN/dS则略小于1(p>0.05),表明白鹭MHCⅡDABⅠexon2受到正选择作用;根据等位基因在群体中的分布频率作分子方差分析(AMOVA),得到群体间分化指数(FST)为0.194 1(p<0.000 1),提示白鹭MHCⅡDABⅠexon2存在显著的种群遗传结构分化.

胎盘组织中人类主要组织相容性抗原G mRNA的表达变化与特发性胎儿生长受限发病的关系

目的探讨人类主要组织相容性抗原G(HLA G) mRNA在特发性胎儿生长受限(IFGR)产妇胎盘组织中的表达及其与IFGR发病的关系。方法采用原位杂交法,检测20例IFGR产妇(IFGR组)及28例正常产妇(对照组)胎盘组织中HLA GmRNA的表达水平和表达部位,并对两组产妇的胎盘组织进行病理学观察。结果( 1 )IFGR组产妇胎盘出现病理改变的发生率为75%(15 /20), 主要为慢性绒毛膜炎、胎盘梗死及绒毛发育迟缓;明显高于对照组的18% (5 /28),两组比较,差异有统计学意义(P=0 001)。(2)IFGR组产妇胎盘HLA GmRNA的阳性表达率为45% ( 9 /20),明显低于对照组的79% ( 22 /28 )。两组比较,差异有统计学意义(P= 0 017 )。( 3 )HLA GmRNA的阳性表达部位主要位于胎盘绒毛外细胞滋养细胞及合体滋养细胞的细胞质内,呈紫蓝色的颗粒状沉淀,轮廓清晰。(4)HLA GmRNA表达阴性者,出现胎盘病理改变的例数较HLA GmRNA表达阳性者明显增多(r=-0 638,P=0 008 )。结论IFGR产妇胎盘组织中HLA GmRNA表达水平明显下降,HLA GmRNA的异常表达可能参与了IFGR的发病过程。

MICA基因多态性与胃癌发病风险相关性

目的探讨正常人群与胃癌患者的人类组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类相关基因A(MICA)各等位基因,特别是等位基因5.1(A5.1)的基因频率和表型频率的差异,评价胃癌患者中幽门螺杆菌(Hp)感染与MICA各等位基因分布的关系。方法选取100名胃癌患者与220名无血缘关系健康个体对照,采用特异引物聚合酶链法,分析MICA基因的多态性分布;以ureC基因扩增产物确定是否有Hp感染。结果胃癌组MICA的A5.1基因的表型频率和等位基因频率均高于正常人群对照组(P<0.05);同时,MICA A5.1的表型频率和等位基因频率低于正常人群对照组(P<0.05)。结论有MICA A5.1等位基因的个体可能有更大患胃癌的风险,而A5等位基因可能是一个保护性因素。

中华菊头蝠MHC Ⅱ-DRB基因遗传多态性及进化

采样自云南同一种群的中华菊头蝠共16个个体,用于DRB基因的分子进化和多态性研究。利用翼膜组织提取DNA基因组,并PCR克隆测序分析。获得了相差3 bp的两种不同长度序列类型,A序列类型263 bp,在研究群体中有15个等位基因;B序列类型260 bp,在研究群体中有8个等位基因。在分析的74个氨基酸变异位点上检测到12个正向选择位点。在9个个体中检测到分布频率最高的等位基因,也有多个等位基因只存在一个个体中。单个个体中最多存在6个等位基因。遗传多态性分析表明中华菊头蝠DRB基因具有较高的多态性。中华菊头蝠DRB基因可能至少存在3个重复座位。利用已发表的翼手目DRB第二外显子序列构建的系统进化树表明中华菊头蝠MHCⅡ-DRB基因处于独立进化支。

寒凝血瘀型原发性痛经与MHC基因多态性的关联研究

目的:探讨北方地区汉族人寒凝血瘀型原发性痛经(PD)与人类主要组织相容性复合MHC基因多态性的关系。方法:应用顺序特异性引物和聚合酶链反应(PCR-SSP)技术,对64例原发性痛经患者及85例无血缘关系的健康人的MHC各等位基因及亚基因进行了检测分析,并将该方法与其它检测MHC等位基因的方法进行对比。结果:结果表明,MHC-DRB1*09(RR=4.202,P<0.05)基因与PD正相关,显著高于对照组,两组之间比较差异有显著性意义,而其它MHC-DRB1*各等位基因未见异常,均无统计学差异。结论:本项研究结果提示,MHC-DRB1*09基因可能是我国北方汉族人PD致病的易感基因,为揭示PD的发病机制中免疫遗传学作用提供了重要信息和依据。

扬子鳄种群MHCⅡ类B基因第3外元多态性分析(英文)

分析了取自安徽宣城野生种群、安徽省扬子鳄繁殖研究中心和浙江长兴养殖种群的14条扬子鳄MHCII类B基因第3外元的多态性。在这些扬子鳄样本中共检测到34个单倍型,每个亚种群内检测到的单倍型数量分别为15,9和10个,与其他一些动物如哺乳动物和鲤科鱼类相比,扬子鳄MHCII类B基因第3外元多态性较高。另外,非同义替换率显著小于同义替换率,这可能表明扬子鳄种群MHCII类B基因第3外元的多态性不是由平衡选择保持的。Tajima的中性检测拒绝了扬子鳄MHCII类B基因第3外元多态性是由遗传漂变引起的零假设。D=-0.401也暗示了扬子鳄种群中存在较多的稀有变异。同时我们也分析了核苷酸多样性和系统发生关系,结果表明扬子鳄的3个种群遗传多样性无显著性差异。

辽东湾斑海豹MHC-DQB基因的遗传多样性分析

本文从25份斑海豹样本中获得141bp片段,发现21个变异位点,定义了12个MHC-DQB等位基因,氨基酸变异率为25.5%。等位基因之间的遗传距离范围是0.0071～0.1064,平均值为0.0577,不同等位基因之间的碱基差异是1～15bp,平均差异数为8bp。与其他鳍足类动物对比后发现,斑海豹MHC-DQB表现出较丰富的多态性。非同义替换率明显高于同义替换率,由此造成的氨基酸替换集中在肽结合位点PBR附近,表明DQB基因受到强烈的平衡选择作用。11个样本出现多于两条等位基因的情况,推测存在基因重复现象。

三个品系蛋鸭β2m基因的克隆及多态性研究

为明确鸭主要组织相容性复合体Ⅰ(major histocompatibility complex,MHCⅠ)β微球蛋白(β2-microglobulin,β2m)分子的多态性和特征,推进相关免疫研究,本试验对我国3个地方品系蛋鸭的多条β2m基因进行克隆,序列经特征分析、同源比对和遗传进化分析后,进行了高变异位点的计算,并将重要变异位点在3D结构上进行了定位。结果表明,鸭β2m基因高度保守,仅个别碱基发生突变,序列中半胱氨酸、免疫球蛋白超基因家族的特征基序"Yx Cx Vx H"和与重链相互作用的位点均保守性存在;筛选的47条β2m氨基酸序列同源性为95%~100%,完全一致序列普遍存在;鸭β2m氨基酸序列与鸡同源性最高,与鱼类和两栖类最低,结果与遗传进化分析相一致;成熟肽中高变异位点和与重链相互作用的变异位点多位于β折叠上,但不会对β2m的功能产生影响。综合来看,鸭β2m基因保守性高,仅存在一种类型,与MHCⅠ重链的作用方式也相对固定。本试验结果有助于深入理解鸭β2m的分子特性,推动MHCⅠ相关免疫研究的开展。

改变鼻咽癌细胞免疫原性对其迁移能力的影响

目的探讨改变鼻咽癌细胞的免疫原性对鼻咽癌迁移能力的影响。方法运用激光扫描共聚焦显微镜观察鼻咽癌细胞MHC-I、MHC-II分子的表达,划痕迁移实验检测鼻咽癌细胞的迁移能力。细胞分为四组:A组:鼻咽癌CNE-2Z细胞;B组:鼻咽癌CNE-2Z细胞+IL-2;C组:鼻咽癌CNE-2Z细胞+IFN-γ;D组:鼻咽癌CNE-2Z细胞+IL-2+IFN-γ。对各组结果进行比较分析。结果 A组鼻咽癌细胞的MHC-I、MHC-II分子几乎不表达,B组、C组和D组鼻咽癌细胞的MHC-I分子增强,MHC-II分子没有明显变化,其免疫原性增强。细胞划痕迁移实验表明,与A组比较,B组、C组和D组鼻咽癌细胞的迁移能力减弱,有统计学意义(P<0.05)。结论改变鼻咽癌细胞的免疫原性对其迁移能力有影响,使鼻咽癌细胞的免疫原性增强,其迁移的能力减弱。

急性早幼粒细胞白血病与MHC—DRB1*基因的相关研究

目的探讨北方地区汉族人急性早幼粒细胞白血病(APL)与人类主要组织相容性复合体MHC—DRB1*基因多态性的关系。方法应用顺序特异性引物和聚合酶链反应(PCR-SSP)技术,对21例急性早幼粒细胞白血病患者及32例无血缘关系的健康人的MHC—DRB1*各等位基因及亚基因进行了检测分析,并将该方法与其它检测MHC等位基因的方法进行对比。结果结果表明,MHC—DRB1*09(RR=1.59,P<0.05=;MHC—DRB1*14(RR=1.59,P<0.05=基因与APL呈正相关,显著高于对照组,两组之间比较差异有显著性意义,而其它MHC—DRB1*各等位基因未见异常,均无统计学差异。结论本项研究结果提示,MHC—DRB1*09和14基因可能是我国北方汉族人APL致病的易感基因,为揭示APL的发病机制中免疫遗传学作用提供了重要信息和依据。

急性早幼粒细胞白血病与MHC-A^＊基因的相关研究

目的探讨北方地区汉族人急性早幼粒细胞白血病(APL)与人类主要组织相容性复合体MHC—A*基因多态性的关系。方法应用顺序特异性引物和聚合酶链反应(PCR-SSP)技术,对21例急性早幼粒细胞白血病患者及29例无血缘关系的健康人的MHC—A*各等位基因及亚基因进行了检测分析。结果结果表明,MHC—A*11(RR=5·333,P<0·05=;和MHC—A*24(RR=3·60,P<0·05=基因与APL呈正相关,显著高于对照组,两组之间比较差异有显著性意义,而其它MHC—A*各等位基因未见异常,均无统计学差异。结论本项研究结果提示,MHC—A*11和24基因可能是我国北方汉族人APL致病的易感基因,为揭示APL的发病机制中免疫遗传学作用提供了重要信息和依据。

活性肽与MHC结合能力预测的免疫信息学方法研究进展

综述活性肽与MHC(主要组织相容性复合体,major histocompatibility complex)结合能力预测的免疫信息学方法的最新进展,介绍常用的肽与MHC分子结合预测的相关工具及方法,分析了各类方法的特点、研究重点和难点,以期为寻找免疫活性肽提供更快捷的方法。

中华鲟野生群体及迁地群体的MHCⅠa基因遗传多样性变异研究

利用特异性引物MHCⅠf和MHCⅠr,分别从30尾野生中华鲟(Acipenser sinensis)、30尾中华鲟子一代和30尾中华鲟子二代的基因组DNA中扩增MHCⅠa基因的多肽结合位点(PBR)片段,扩增产物长度为127 bp。中华鲟野生群体30个样品265个有效克隆中共检测出50条特异序列(单倍型),中华鲟子一代群体30个样品的278个有效克隆中共检测出66条特异序列(单倍型),中华鲟子二代群体30个样品的257个克隆中检测出64条特异序列(单倍型)。单倍型Acsi-UAB*0101在3个群体中所占的百分比最高,分别为58.1%、38.8%和60.7%。单倍型分布及群体内遗传多样性参数分析表明,中华鲟子一代群体的MHC基因遗传多样性最丰富,野生中华鲟群体的MHCⅠa基因遗传多样性较低。中华鲟野生群体非同义替代与同义替代比率为1.33,分析表明正向选择可能是中华鲟MHCⅠa多态性的主要因素。该研究结果提供了中华鲟从野生群体到子二代群体MHCⅠa基因的部分遗传信息和遗传变异规律,为中华鲟全人工种群优化和繁殖管理提供理论依据。