二肽基肽酶3(DPP3)通过下调主要组织相容性复合体Ⅰ类链相关基因B(MICB)的表达抑制胃癌细胞的免疫逃逸

目的探究二肽基肽酶3(DPP3)通过调控主要组织相容性复合体Ⅰ类链相关基因B(MICB)的表达对胃癌细胞免疫逃逸的影响。方法敲低MKN-45人胃癌细胞DPP3、过表达MGC-803人胃癌细胞DPP3,观察细胞增殖、迁移能力变化及对自然杀伤(NK)细胞杀伤的反应性;采用全转录组测序筛得MICB基因,在过表达DPP3细胞中敲低MICB验证细胞行为变化。在C57小鼠验证敲除DPP3细胞的体内成瘤能力及组织中CD56+细胞浸润情况。结果敲除DPP3促进胃癌细胞增殖、迁移,降低MICB表达,对NK细胞杀伤效应不敏感;小鼠成瘤能力升高且组织中CD56^(+)细胞浸润降低。过表达DPP3的胃癌细胞则呈现相反结果。敲减MICB后能逆转DPP3高表达引起的细胞表型变化。结论DPP3通过下调MICB表达抑制胃癌细胞的免疫逃逸功能。

肾移植受者术前主要组织相容性复合物Ⅰ类链相关基因A抗体对移植后早期急性排斥反应的影响

目的探讨肾移植受者术前主要组织相容性复合物Ⅰ类链相关基因A（MICA）抗体对肾移植术后早期急性排斥反应和移植肾功能恢复的影响。方法检测2009年~2010年本院197例未使用免疫抑制剂的肾移植受者术前MICA抗体及其特异性,随访其后接受尸体肾移植手术的139例受者的术后早期急性排斥反应（AR）和移植肾功能。结果 197例肾移植受者术前MICA抗体阳性45例（22.84%）。MICA抗体特异性分析发现有11种抗体,其中出现频率最高的是抗MICA019（占65.7%）,出现频率最低的是抗MICA015（占8.6%）和抗MICA017（占8.6%）,高、低频率抗体间的差异具有显著性（χ2=24.48,P〈0.01）。45例阳性受者中单一特异性抗体18例（占51.4%）,多种特异性抗体17例（占48.6%）。197例受者中139例在术后有39例发生早期AR（占28.1%）;其中,45例术前MICA抗体阳性受者中38例接受移植后有14例发生早期AR（占36.8%）;152例术前MICA抗体阴性受者中有101例接受移植后有25例发生了早期AR（占24.8%）。结论中国人群中最常见的MICA抗体中为抗MICA019,推测MICA019为中国人群中较常见基因是其表现出临床上高频率抗体的原因。

肾癌患者血清中可溶性人类主要组织相容性复合体Ⅰ类链相关基因A蛋白的表达和临床意义

目的探讨血清中可溶性人类主要组织相容性复合体Ⅰ类链相关基因A蛋白(sMICA)检测对肾癌患者的临床诊断价值。方法应用酶联免疫吸附试验测定40例肾癌患者(肾癌组)手术前后和40名健康者(对照组)的血清sMICA水平,并对血清sMICA水平与临床特征的关系进行分析。结果肾癌组术前的血清sMICA水平为(366.15±27.89)pg/mL,显著高于对照组的(214.03±22.15)pg/mL(P<0.01)。肾癌组术后的血清sMICA水平为(229.18±45.54)pg/mL,显著低于术前水平(P<0.01),与对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。肿瘤TNM分期中Ⅲ期和Ⅳ期肾癌患者的血清sMICA水平为(443.79±27.21)pg/mL,显著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者的(310.68±40.93)pg/mL(P<0.05),而男性与女性患者间、<65岁与≥65岁患者间血清sMlCA水平的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论血清sMICA水平可作为肾癌的一个辅助诊断指标,且其与肾癌患者的免疫功能状态和临床分期有一定的关系。

骨肉瘤组织中主要组织相容性复合物Ⅰ类链相关A蛋白和基质金属蛋白酶-9的关系

目的:探讨骨肉瘤组织中主要组织相容性复合物Ⅰ类链相关A(MICA)蛋白和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的关系。方法:用免疫组化检测66例骨肉瘤组织中MICA和MMP-9蛋白的表达情况。结果:MICA和MMP-9蛋白在骨肉瘤组织的表达率分别为51.5%和54.5%,两者在骨肉瘤组织的表达呈正相关(r=0.414,P<0.01)。结论:MICA广泛表达于骨肉瘤组织,其与MMP-9表达可能由相同信号通路调控。

人类主要组织相容性复合物Ⅰ类相关链A在肾肿瘤中的表达及临床意义

目的 探讨肾肿瘤患者人类主要组织相容性复合物Ⅰ类相关链A（major histocompatibility complex class-Ⅰ related chain A,MICA）的表达及临床意义. 方法 选取2013年3-7月收治的60例肾肿瘤患者作为研究组,男37例,女23例.年龄34 ～ 76岁,平均46岁.肾透明细胞癌48例,肾血管平滑肌脂肪瘤12例.病理分期：T1期20例,T2期14例,T3期10例,T4期4例.淋巴结转移11例,其他器官转移4例.20例健康体检者为对照组,男10例,女10例.年龄24～50岁,平均31岁.利用ELISA法测定两组血清中分泌型MICA（soluble MICA,sMICA）分子的水平.分析sMICA分子含量与肾肿瘤的性质、肾癌分期、淋巴结及器官转移的关系.免疫组化染色法测定15例肾癌及癌旁组织标本的MICA分子表达情况.实时定量PCR法测定9例肾癌和3例癌旁组织标本的MICA-mRNA表达情况. 结果 48例肾癌、12例肾血管平滑肌脂肪瘤、20例对照组的血清sMICA水平分别为（348.5±32.5）、（289.3±30.4）、（168.4±43.2） pg/ml,研究组与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,肾癌组与肾血管平滑肌脂肪瘤组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.肾肿瘤T1、T2、T3、T4期的sMICA水平分别为（304.3±27.4）、（308.4±26.8）、（368.3±33.4）、（378.4±43.4） pg/ml,T1、T2期间比较差异无统计学意义（P＞0.05）,其余各分期间比较差异有统计学意义（P＜0.05）.伴有淋巴结转移组与无淋巴结转移组的sMICA水平分别为（326.2±32.4）、（319.4±32.5） pg/ml,差异无统计学意义（P＞0.05）.伴有其他器官转移组与无其他器官转移组的sMICA水平分别为（373.4±45.4）、（346.4±31.5） pg/ml,差异有统计学意义（P＜0.05）.免疫组化染色法证实MICA分子在癌组织的细胞表面高表达,而在癌旁细胞表面不表达.实时定量PCR法检测MICA-mRNA在癌组织的表达量（2.03）明显高于癌旁组织（0.77）,差异有统计学意义（P＜0.05）. 结论 MICA在肾肿瘤中高度表达,其表达高低与肾肿瘤的性质、肾癌分期及转移有关.

主要组织相容性复合体I类链相关基因A基因型在1型糖尿病及其亚型中的分布特点

目的探讨主要组织相容性复合体I类链相关基因A（MICA）基因型在1型糖尿病（T1DM）亚型中的分布特点及其与人类白细胞抗原-DQ（HLA-DQ）基因的关系。方法选取1999年6月至2004年12月在中南大学湘雅二医院内分泌科就诊的无亲缘关系的T1DM患者338例为研究对象，其中1A型糖尿病患者193例（TIADM组）、成人隐匿性自身免疫糖尿病患者145例（LADA组），无亲缘关系的体检健康志愿者258名（健康对照组）。用PCR．直接测序法检测T1DM组、LADA组和正常对照组的MICA和HLA-DQ基因型。根据MICA基因外显子5的跨膜区多态性GCT重复序列的数目，确定为MICA4、5、5．1、6,9共5种等位基因。使用卡方检验比较各组之间MICA基因频率的差异，使用SvejgaardRyder检验分析MICA基因和HLA-DQ基因之间的关系。结果（1）MICA4、MICA9等位基因和MICA4／9、MICA9／9基因型的频率在起病年龄〈20岁的T1ADM组患者较正常对照组增多（分别为20-3％比13．2％、26．8％比13．2％、13．0％比3．5％、6．5％比1．9％，X^2=6．501、21．419、12．312、5．269；均P〈0．05），而MICA5、MICA5．1等位基因和MICA5．1／A5．1基因型较正常对照组频率减少（28．9％比37．8％、19．1％比28．9％、4．9％比10．5％。X^2=5．845、8．323、3．286，均P〈0．05）。（2）MICA基因的频率在起病年龄≥20岁T1ADM组以及LADA组患者与正常对照组差异无统计学意义（分别为X^2=0．067～3．078、X^2=0．000-3．954，均P〉0．05）。（3）MICA与HLA．nq基因无连锁不平衡，SvejgaardRyder检验显示，MICA基因的易感作用较HLA-DQ弱[0R（95％C1）：0．266（0．114-0．625）1，只有HLA-DQ基因为易感基因时，MICA才显示其易感作用[3．037（1．448～6．370）]，而HLA-DQ为保护或中性基因时MICA基因无易感作用（均P〉0．05）。结论MICA基因仅在携带HLA-DQ易感基因的T1ADM患者中起作用，MICA基因多态性与起病年龄〈20岁的T1ADM相关，而与起病年龄≥20岁T1ADM和LADA患者无关。

北方汉族MICA基因遗传多态性及与HLA-B连锁不平衡研究

目的 了解MICA等位基因在中国北方汉族的分布及与HLA-B基因型的连锁关系。方法 用直接测序法对北方汉族224个标本的HLA-B和MICA基因的2—6外显子进行测序。用Arlequin软件统计分析2个位点间的连锁关系。结果 发现18个MICA的等位基因,其中MICA~*002(16.07%),MICA~*008(23.21%)和MICA~*010(21.65%)最为常见。MICA~*010-HLA-B~*46∶01,MICA~*045-HLA-B~*13∶01,MICA~*049-HLA-B~*51∶01有明显的连锁关系。结论 北方汉族人群呈现特异MICA等位基因库,MICA与HLA-B具有连锁关系。

食管癌组织中主要组织相容性复合体-I类分子链相关蛋白A／B表达及其临床意义

目的研究食管癌组织中主要组织相容性复合体-I类分子链相关蛋白A／B（MICA／B）基因蛋白的表达情况，探讨其与食管癌患者临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学染色方法检测40例食管癌和癌旁组织中MICA／B蛋白的表达情况，并分析其与食管癌患者临床病理特征的关系。结果MICA／B蛋白在细胞质和细胞膜中呈阳性表达，MICA／B蛋白在食管癌组织中的阳性表达率为75．0％（30／40），在癌旁组织中呈阴性，二者比较差异有统计学意义（P〈0．001）。MICA／B蛋白表达与食管癌组织学分级有关（P〈0．05），与食管癌患者的年龄、性别、分期、浸润深度和淋巴结转移无关（均P〉0．05）。结论MICA／B蛋白表达可能在食管癌的发生发展中起重要作用，并可作为诊断食管癌的分子标志物。

MICA抗体与移植肾慢性失功的研究

目的 探讨肾移植术后患者抗主要组织相容性复合物I类相关链A基因（MICA）抗体与移植肾慢性失功的关系.方法 选择了1986年～2005年间在北京友谊医院接受肾移植的38例患者,男性32例,女性6例,年龄24～68岁,血肌酐和尿素氮水平高于正常值.采用MICA抗体流式筛查技术,于2009年7月检测MICA抗体和PRA抗体,38例肾移植患者PRA抗体均为阴性,而后观察一年后的肾功能变化.结果 38例肾移植术后群体反应性抗体阴性但血肌酐和尿素氮高于正常值的患者中有9例MICA抗体阳性,阳性率达23.68%.9例MICA抗体阳性患者均呈现MICA抗体多特异性.29例MICA抗体阴性患者,经过一年的治疗,7例患者肾功能基本恢复,2例患者恢复透析,20例患者肾功能基本未变.MICA抗体阳性的9例患者中有4例患者恢复透析,其MICA抗体均为强阳性;另5例患者肾功能基本未变,其MICA抗体4例为弱阳性,1例为阳性.MICA抗体阳性和MICA抗体阴性患者之间恢复透析的患者间差异有统计学意义（χ2=4.73,P〈0.025）.结论 高滴度MICA抗体是引起移植肾慢性失功的重要因素之一.

MICA多态性与白血病易感性的关联研究

目的采用直接测序法对主要组织相容性复合物Ⅰ类链相关A基因(major histocompatibility complex classichain-related A,MICA)进行分型,了解MICA等位基因在正常人群、急性淋巴细胞白血病(acute lymphocytic leukemia,ALL)、急性髓性白血病(acute myeloid leukemia,AML)、骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者中分布的差异。方法选取2016年北京市红十字血液中心167份白血病患者DNA样本(病例组)和224份正常人样本(正常对照组),对MICA基因2~6外显子进行测序分型,并判读结果。分析MICA等位基因频率,跨膜区GCT重复次数,MICA-129Met/Val在正常对照组和病例组间的差异。结果发现19个MICA等位基因,与正常对照组比较,大多数MICA等位基因在各组间频率的差异无统计学意义。但MDS组的MICA*010:01频率明显低于正常对照组(P<0.01),而MDS组的MICA*019:01频率明显高于正常对照组、ALL组和AML组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论MICA*010:01和MICA*019:01的分布在MDS患者和正常人群间不同,提示这两个等位基因可能与MDS的易感性相关。

白血病与尿毒症患者MICA*008基因分析

目的探讨MICA*008基因在白血病与尿毒症患者中的分布。方法应用PCR/SSP的方法检测白血病患者66例,尿毒症患者91例和无血缘关系健康人81例的MICA*008基因。结果白血病患者、尿毒症患者和正常健康人的MICA*008基因频率分别为22.2%,18.8%和34.3%。前两者的基因频率无差异(P>0.05),但均低于后者(P<0.05)。结论白血病和尿毒症患者的MICA*008基因频率均低于正常健康人,但两者之间无差异。

甲状腺肿瘤患者的MHC基因频率分布及sMICA表达水平初探

目的初步研究甲状腺肿瘤患者MHC基因频率分布及s MICA表达水平及相互关系。方法提取2个甲状腺肿瘤病例组(44名经术后病理证实为甲状腺癌的患者及87名甲状腺良性肿瘤患者)、1个健康对照组(133名健康体检者)的全血基因组DNA,采用直接测序法做HLA、MICA、MICB高分辨分型;运用Pypop Win32分析各基因位点的基因频率分析;SPSS 17.0分析甲状腺癌患者与MICA/B及HLA等位基因的相关性。运用ELISA法对上述研究对象的血清做s MICA半定量检测。结果 MICB*004∶01在甲状腺癌组、甲状腺良性肿瘤组和健康体检组的频率分别为:1.351%(1/44)、5.769%(6/87)、10.078%(26/133),是免患甲状腺癌患者的保护等位基因[P=0.014,RR(95%CI)=0.122(0.016-0.91)];DRB1*15∶01和DRB1*04∶03为甲状腺良性肿瘤的保护等位基因(P<0.05,RR<1);甲状腺癌患者与甲状腺良性肿瘤及健康体检者血清s MICA水平(ng/m L)分别为:0.233 1±0.244 5 vs 0.1819±0.1947 vs 0.2284±0.2787(P>0.05)。结论 HLA基因与甲状腺肿瘤疾病存在关联,其中MICB*004∶01与患甲状腺癌风险呈负相关。

多发性骨髓瘤患者可溶性MICA和NK细胞NKG2D受体的检测

目的检测多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者血清可溶性主要组织相容性复合物Ⅰ类相关链A(soluble MICA,sMICA)和天然杀伤(NK)细胞表面NKG2D(natural-killer group 2,member D)受体表达的关系。方法 ELISA法检测38例MM患者和40例健康人对照的血清sMICA含量,流式细胞术检测外周血NK细胞表面NKG2D受体的表达。结果 MM患者血清sMICA为(458±207)pg/ml显著高于健康对照组(135±82)pg/ml(t=9.133,P<0.01);Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期MM患者血清sMICA(x-±s,pg/ml)分别为258±126、489±191和585±163,Ⅱ期和Ⅲ期均高于Ⅰ期患者(t分别为3.377和5.172,P均<0.01)。回归分析显示MM患者血清sMICA含量与外周血NK细胞表面NKG2D受体水平呈负相关(r=-0.749,P<0.01)。结论 MM患者血清sMICA含量变化与该病的发生及疾病活动性有一定关联。

miR-10b介导NKG2D调节脑胶质瘤细胞免疫效应的实验研究

目的:观察微小核糖核酸-10b(miR-10b)对脑胶质瘤细胞免疫效应的调节作用并探讨其作用机制。方法:取人脑胶质瘤细胞U251进行培养和传代,获得处于对数生长期的细胞。按照1.0×105个/ml浓度制备细胞悬液,并设置对照组、过表达组、低表达组、空白组,每组6个复孔。对照组、过表达组、低表达组分别采用脂质体转染法转染阴性对照、miR-10b模拟物、miR-10b抑制剂,空白组予以等量无菌生理盐水。分离和培养1例健康志愿者外周血自然杀伤(NK)细胞。MTT法检测不同效靶比时NK细胞的杀伤活性;流式细胞仪检测各组NK细胞表面NK细胞激活受体(NKG2D)表达,并检测各组人脑胶质瘤细胞U251表面主要组织相容性复合物Ⅰ链相关基因A(MICA)、UL16结合蛋白2(ULBP2)、UL16结合蛋白3(ULBP3)表达。结果:对照组、过表达组、低表达组转染效率分别为(93.55±2.05)%、(95.67±3.14)%、(94.18±3.26)%;与对照组和空白组相比,过表达组miR-10b表达升高,低表达组miR-10b表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组和空白组miR-10b表达差异无统计学意义(P>0.05);与对照组和空白组相比,过表达组NK细胞不同效靶比杀伤活性均降低、NKG2D表达降低,低表达组NK细胞不同效靶比杀伤活性均增高、NKG2D表达增高,差异均有统计学意义(P<0.05),各组NK细胞杀伤活性均随效靶比增加而增高,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组与空白组相比,相同效靶比NK细胞杀伤活性、NKG2D表达差异均无统计学意义(P>0.05);与对照组和空白组相比,过表达组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达均降低,低表达组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达均增高,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组与空白组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:抑制miR-10b表达能够增加NK细胞表面NKG2D和人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达,增强NK细胞对人脑胶质瘤细胞U251的杀伤活性。

白藜芦醇抑制结肠癌干细胞增殖并增强MICA/B的表达

目的研究白藜芦醇(Res)对结肠癌干细胞(CCSC)增殖、凋亡和免疫原性的影响。方法采用无血清培养法由HCT116结肠癌细胞诱导培养CCSC,通过检测CCSC标志物CD133、CD44进行鉴定。MTT法检测Res对CCSC增殖的影响;annexinⅤ-FITC/PI双染色结合流式细胞术检测Res对CCSC凋亡的影响;流式细胞术检测Res对CCSC生长周期及主要组织相容性复合体Ⅰ类分子相关链A/B(MICA/B)表达的影响。结果 HCT116细胞在无血清培养下成球生长。球形细胞中CD133+细胞占91.07%±1.79%,CD44+细胞占90.33%±1.78%。与对照组相比,Res能明显抑制CCSC增殖,并且呈时间、剂量依赖性;Res作用48 h后,CCSC细胞周期G0/G1期比例显著升高,S期下降,呈剂量依赖性;随着药物浓度增加,CCSC的凋亡率增加,MICA/B的表达增强。结论从HCT116结肠癌细胞成功诱导培养出CCSC,Res能剂量依赖性地抑制CCSC的增殖,与阻滞细胞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡有关;Res能增强CCSC中MICA/B的表达,增强其免疫原性。

miR-17-5p通过靶向抑制MICB表达降低肝癌细胞对NK细胞杀伤的敏感性

目的:探讨miR-17-5p在HCC细胞系HepG2细胞对NK细胞介导的细胞毒性敏感性中的调控作用。方法:使用含野生型MICB基因3'UTR序列、突变型MICB基因3'UTR序列、miR-17-5p mimic序列、miR-17-5p-NC序列、anti-miR-17-5p序列的质粒载体分别或共转染HCC细胞系HepG2,使用丙戊酸钠处理转染或未转染细胞。应用荧光素酶活性测定检测miR-17-5p对MICB的调控作用。应用实时荧光定量PCR检测细胞或组织中miR-17-5p及MICB mRNA表达情况,利用蛋白免疫印迹法检测MICB蛋白表达情况。对比转染质粒后各组细胞中miR-17-5p和MICB mRNA及蛋白的表达情况,分析Target Scan预测和荧光素酶活性测定结果、miR-17-5p与MICB蛋白在HCC组织中的表达及与临床病理特征的关系、miR-17-5p与MICB蛋白在HCC组织中表达的相关性,并对比各组MICB蛋白表达和NK细胞介导的细胞毒性、丙戊酸钠各组NK细胞毒性。结果:①与miR-17-5p-NC组相比,miR-17-5p-mimic组HepG2细胞中miR-17-5p表达水平较高,MICB mRNA和蛋白表达水平均较低(P <0. 05);与anti-miR-17-5p-NC组相比,anti-miR-17-5p组HepG2细胞中miR-17-5p表达水平均较低,MICB mRNA和蛋白表达水平均较高(P <0. 05);与miR-17-5p-NC+MICB 3'UTR-Wt组相比,miR-17-5p-mimic+MICB 3'-UTR-Wt组荧光素酶活性较低(P <0. 05)。miR-17-5p-NC+MICB 3'UTR-Mut组与miR-17-mimic+MICB 3'-UTR-Mut组的荧光素酶活性差异无统计学意义(P> 0. 05)。②与对应癌旁非肿瘤组织相比,miR-17-5p在HCC组织中的表达水平较高,而MICB蛋白表达水平较低(P <0. 05)。miR-17-5p和MICB蛋白的表达与肿瘤直径、远处转移、TNM分期、分化程度等临床病理特征有关(P <0. 05)。在HCC肿瘤组织中miR-17-5p与MICB蛋白表达水平呈明显负相关(P <0. 05)。③与miR-17-5p-NC组相比,miR-17-5p-mimic组NK细胞毒性、MICB蛋白表达水平均较低(P <0. 05);与miR-17-5p-mimic+MICB 3'UTR-Mut组相比,miR-17-5p-mimic+MICB-3'UTR-Wt共转染组中NK细胞毒性和MICB蛋白表达水平均较高(P <0. 05);与anti-miR-17-5p-NC组相比,anti-miR-17-5p组NK细胞毒性和MIBC蛋白表达均较高(P <0. 05)。④与丙戊酸钠+miR-17-5p-NC组相比,丙戊酸钠+miR-17-5p-mimic组细胞中MICB表达水平较低(P <0. 05)。在不同效靶比时,与Ctrl组相比,丙戊酸钠组NK细胞毒性较高(P <0. 05)。与丙戊酸钠+miR-17-5p-NC组相比,丙戊酸钠+miR-17-5p-mimic组NK细胞毒性较低(P <0. 05)。结论:miR-17-5p通过靶向MICB降低Hep G2细胞对NK细胞介导的细胞毒性敏感性,从而抑制NK细胞对肝癌细胞的毒性。

miR-17-5p靶向MICB减弱NK细胞对肝癌细胞的毒性作用

目的:探讨miR-17-5p在肝细胞癌(HCC)HepG2细胞对NK细胞介导的细胞毒性敏感性中的调控作用。方法:使用含野生型MICB基因3'UTR序列、突变型MICB基因3'UTR序列、miR-17-5p mimic序列、miR-17-5p-NC序列、anti-miR-17-5p序列的质粒载体分别或共转染HCC HepG2细胞,使用丙戊酸钠处理转染或未转染细胞。应用荧光素酶活性测定检测miR-17-5p对MICB的调控作用。应用实时荧光定量PCR或蛋白免疫印迹检测细胞或组织中miR-17-5p及MICB mRNA和蛋白表达情况。结果:(1)与miR-17-5p-NC组相比,miR-17-5p-mimic组HepG2细胞中miR-17-5p表达水平显著升高,MICB mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0. 05);与anti-miR-17-5p-NC组相比,anti-miR-17-5p组HepG2细胞中miR-17-5p表达水平均显著降低,MICB mRNA和蛋白表达水平均显著增加(P<0. 05)。与miR-17-5p-NC+MICB 3'UTR-Wt组相比,miR-17-5p-mimic+MICB 3'-UTR-Wt组荧光素酶活性显著降低(P<0. 05)。miR-17-5p-NC+MICB 3'UTR-Mut组与miR-17-mimic+MICB 3'-UTR-Mut组的荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0. 05)。(2)与对应癌旁非肿瘤组织相比,miR-17-5p在HCC组织中的表达水平显著增加,而MICB蛋白表达水平显著降低(P<0. 05)。miR-17-5p和MICB蛋白的表达与肿瘤直径、远处转移、TNM分期、分化程度等临床病理特征有关(P<0. 05)。在HCC肿瘤组织中miR-17-5p与MICB蛋白表达水平呈明显负相关(P<0. 05)。(3)与miR-17-5p-NC组相比,miR-17-5p-mimic组MICB蛋白表达水平均显著降低(P<0. 05)。与miR-17-5p-mimic+MICB 3'UTR-Mut组相比,miR-17-5p-mimic+MICB-3'UTR-Wt共转染组中NK细胞毒性和MICB蛋白表达水平均显著增加(P均<0. 05)。与antimiR-17-5p-NC组相比,anti-miR-17组NK细胞毒性和MICB蛋白表达水平均显著增加(P均<0. 05)。(4)与丙戊酸钠+miR-17-5p-NC组相比,丙戊酸钠+miR-17-5p-mimic组细胞中MICB表达水平显著降低(P<0. 05)。在不同效靶比时,与Ctrl组相比,丙戊酸钠组NK细胞毒性显著增加(P<0. 05)。与丙戊酸钠+miR-17-5p-NC组相比,丙戊酸钠+miR-17-5p-mimic组NK细胞毒性显著降低(P<0. 05)。结论:miR-17-5p通过靶向MICB降低HepG2细胞对NK细胞介导的细胞毒性敏感性,从而抑制NK细胞对肝癌细胞的毒性。

不同程度低氧对体外培养人胃粘膜上皮细胞株GES-1中MICA表达的影响

目的研究不同程度低氧对体外培养人胃粘膜上皮细胞株GES-1中MICA基因表达的影响。方法建立GES-1细胞体外低氧培养模型。采用RT-PCR和免疫细胞化学技术分别检测模型MICA基因和蛋白的表达变化。结果在缺氧环境下培养0、48和72 h后MICA蛋白表达(57.67±2.30、96.14±1.75、259.59±3.51)及mRNA/β-actin比值(0.22±0.03、0.37±0.02、0.68±0.03)都随缺氧时间不同表达量存在差别(P<0.05),且表达量随缺氧时间延长而升高,直线相关分析显示二者表达呈显著正相关。结论低氧可以刺激胃上皮细胞株GES-1中MICA基因的表达量显著增加。

高龄肾移植患者抗HLA抗体和MICA抗体对肾功能的影响

目的分析年龄大于60岁的肾移植患者术后PRA和MICA抗体对移植肾功能的影响。方法选择>60岁的高龄肾移植患者179例,对血清标本进行PRA和MICA抗体检测,并观察移植肾功能。结果 179例高龄肾移植患者中,抗体阳性患者32例(17.88%)。其中肾功能下降患者28例(87.5%)。抗体阴性患者147例中,肾功能下降患者7例(4.76%)。抗体阳性的肾移植患者,其移植肾功能下降率高于抗体阴性者,差异具有统计学意义(χ2=10.763,P<0.000 1)。移植肾存活大于10年以上的高龄患者91例,抗体阳性患者16例;移植肾存活未达10年以上的高龄患者88例,抗体阳性患者16例,两组患者抗体阳性率的差异无统计学意义(χ2=0.008 2,P>0.05)。移植肾存活已大于10年以上的患者中13例PRA抗体阳性,3例MICA抗体阳性,1例为抗HLA-Ⅰ+Ⅱ类和MICA阳性。16例抗体阳性患者移植肾功能均有不同程度下降。移植肾存活未达到10年的患者中15例PRA阳性,3例患者肾功能正常,为抗HLA-Ⅱ类阳性;12例患者移植肾功能均不同程度下降。结论抗HLA抗体和MICA抗体影响移植肾长期存活。肾移植术后动态监测抗HLA抗体和MICA抗体的变化,对预测移植肾排斥反应的发生、指导临床治疗、预防移植肾功能减退具有重要意义。