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表达GⅡ.4型诺如病毒VP1复制缺陷型腺病毒构建与鉴定
1
作者
施鹏
林晓晨
+7 位作者
周艳
李娇春
宋泽鑫
鲁辰星
谭银珍
胡晓青
陈蓉
李鸿钧
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第6期7-11,共5页
人诺如病毒(norovirus,NoV)在体外难以培养,不宜采用经典疫苗的方式进行疫苗研发,以腺病毒为载体的重组腺病毒疫苗为诺如病毒疫苗的研发提供另一种路线选择。构建表达人GⅡ.4型诺如病毒VP1蛋白的重组腺病毒为该技术路线的疫苗研发奠定...
人诺如病毒(norovirus,NoV)在体外难以培养,不宜采用经典疫苗的方式进行疫苗研发,以腺病毒为载体的重组腺病毒疫苗为诺如病毒疫苗的研发提供另一种路线选择。构建表达人GⅡ.4型诺如病毒VP1蛋白的重组腺病毒为该技术路线的疫苗研发奠定基础。首先使用PCR扩增诺如病毒VP1片段,通过酶切、连接、转化,克隆含VP1基因的pshuttle-CMV-VP1穿梭质粒,再与腺病毒骨架质粒进行同源重组,重组质粒鉴定正确后使用PacⅠ酶切线性化,转染至HEK293细胞进行病毒包装,包装成复制缺陷型的完整腺病毒颗粒命名为rAd-VP1,病毒传代后进行滴度测定,并感染HEK293细胞,通过Western Blot方法鉴定重组腺病毒外源蛋白VP1的表达情况。结果表明,包装传代后的重组腺病毒浓缩后滴度达到CCID_(50)=5×10^(9)/mL,并且能在HEK293细胞成功表达VP1蛋白。研究为rAd-VP1的动物免疫评价和诺如病毒的疫苗研发提供基础。
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关键词
诺如病毒
主要结构蛋白vp1
腺病毒载体
同源重组
病毒包装
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题名
表达GⅡ.4型诺如病毒VP1复制缺陷型腺病毒构建与鉴定
1
作者
施鹏
林晓晨
周艳
李娇春
宋泽鑫
鲁辰星
谭银珍
胡晓青
陈蓉
李鸿钧
机构
中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室
出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第6期7-11,共5页
基金
云南省应用基础研究计划项目(202201AT070236)
云南省重大科技专项(202202AA100006)
中国医学科学院医学与健康科技创新工程重大协同创新项目(2021-I2M-1-043)。
文摘
人诺如病毒(norovirus,NoV)在体外难以培养,不宜采用经典疫苗的方式进行疫苗研发,以腺病毒为载体的重组腺病毒疫苗为诺如病毒疫苗的研发提供另一种路线选择。构建表达人GⅡ.4型诺如病毒VP1蛋白的重组腺病毒为该技术路线的疫苗研发奠定基础。首先使用PCR扩增诺如病毒VP1片段,通过酶切、连接、转化,克隆含VP1基因的pshuttle-CMV-VP1穿梭质粒,再与腺病毒骨架质粒进行同源重组,重组质粒鉴定正确后使用PacⅠ酶切线性化,转染至HEK293细胞进行病毒包装,包装成复制缺陷型的完整腺病毒颗粒命名为rAd-VP1,病毒传代后进行滴度测定,并感染HEK293细胞,通过Western Blot方法鉴定重组腺病毒外源蛋白VP1的表达情况。结果表明,包装传代后的重组腺病毒浓缩后滴度达到CCID_(50)=5×10^(9)/mL,并且能在HEK293细胞成功表达VP1蛋白。研究为rAd-VP1的动物免疫评价和诺如病毒的疫苗研发提供基础。
关键词
诺如病毒
主要结构蛋白vp1
腺病毒载体
同源重组
病毒包装
Keywords
norovirus
major structural protein
vp
1
adenoviral vector
homologous recombination
virus packaging
分类号
R392-33 [医药卫生—免疫学]
下载PDF
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
表达GⅡ.4型诺如病毒VP1复制缺陷型腺病毒构建与鉴定
施鹏
林晓晨
周艳
李娇春
宋泽鑫
鲁辰星
谭银珍
胡晓青
陈蓉
李鸿钧
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023
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