饲料中不同水平蛋白质、糊精对乌克兰鳞鲤生长、体成分及抗氧化能力的影响

采用全因子试验设计,配制含有3个蛋白质水平（32%、30%、28%）和3个糊精水平（15%、20%、25%）共9组试验饲料,每组3个平行,养殖周期为8周,探讨了对乌克兰鳞鲤（Cyprinus carpio）生长、体成分及抗氧化能力的影响。结果表明,蛋白质和糊精对生长性能无交互作用（P〉0.05）。随着蛋白质水平升高,肝体比显著提高（P〈0.05）;随着糊精水平增加,相对增重率、特定增长率出现明显升高。蛋白质和糊精水平对体内脂肪及灰分含量存在明显的交互作用（P〈0.05）。20%糊精组肝胰脏超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性显著高于15%和25%糊精水平（P〈0.05）,并且丙二醛（MDA）含量显著低于25%糊精水平（P〈0.05）。综合分析得出,蛋白水平在30%~32%,糊精水平在20%~25%之间最适宜乌克兰鳞鲤的生长。

饲料中糊精水平对乌克兰鳞鲤生长及糖代谢的影响

为了探讨饲料中糊精水平对乌克兰鳞鲤生长和糖代谢的影响,试验配制蛋白质水平为30%,糊精水平分别为15%和25%的2种试验饲料,以平均体重为3.92 g的乌克兰鳞鲤幼鱼为试验对象,将300尾鱼随机分为2组,每组设3个重复,每个重复50尾鱼。饲养8周后,检测乌克兰鳞鲤生长指标、生化指标和糖代谢酶活性;禁食48 h后再投喂,测定投喂后0、3、6、12、24、48 h肝胰脏和肠道葡萄糖激酶(GK)和葡萄-6-磷酸酶(G6 Pase)mRNA的表达量。结果表明:1)25%糊精组的特定生长率显著高于15%糊精组(P<0.05)。2)25%糊精组的血清甘油三酯、胆固醇和葡萄糖含量显著高于15%糊精组(P<0.05)。3)25%糊精组血清己糖激酶(HK)、GK、丙酮酸激酶(PK)、苹果酸脱氢酶(MDH)活性,肝胰脏HK、GK、G6 Pase活性显著高于15%糊精组(P<0.05),而肝胰脏MDH活性则显著低于15%糊精组(P<0.05)。4)再投喂24 h后25%糊精组肝胰脏GK mRNA的表达量显著高于15%糊精组(P<0.05)。再投喂6 h后,25%糊精组G6Pase mRNA表达量显著高于15%糊精组(P<0.05)。综合分析,在本试验条件下,25%的饲料糊精水平对乌克兰鳞鲤生长和糖代谢的促进作用好于15%的饲料糊精水平。

乌克兰鳞鲤精子超低温冷冻保存方法研究

为研究适用于乌克兰鳞鲤精子的超低温冷冻保存方法,分析比较3种稀释液[Hank′s、Cortland、Freezefish冻精稀释液,精子与每种稀释液均设置3种比例(1∶1、1∶3、1∶5)]及3种体积分数为10%的抗冻剂(二甲基亚砜、1,2-丙二醇和丙三醇)对乌克兰鳞鲤精子低温(4 ℃)保存活力的影响;运用筛选出的冷冻保护液及稀释比例,分析比较3种“3步冷冻法”以及3种解冻温度(20、30、40 ℃)对乌克兰鳞鲤精子活力的影响。试验结果表明,采用Hank′s作为稀释液,10%二甲基亚砜为抗冻剂,精子与稀释液比例为1∶3,平均降温速率为12 ℃/min,解冻温度为30 ℃时,精子活力最高(>68%)。通过对稀释液、抗冻剂、稀释比例、降温速率和解冻温度的层层筛选,建立了适宜乌克兰鳞鲤精子超低温冷冻保存的方法,在其种质保护方面具有重要意义,为开展其他鱼类精子超低温冷冻保存提供参考。

不同水平白藜芦醇对乌克兰鳞鲤部分生化指标的影响

研究旨在探讨白藜芦醇对乌克兰鳞鲤消化酶及非特异性免疫指标的影响。采用单因子浓度梯度法,在饲料中分别添加0、40、80、120、160、200 mg/kg水平的白藜芦醇（RES）,投喂7 d后测定乌克兰鳞鲤肝胰脏和血浆中的部分生化指标。结果表明：饲料中添加160 mg/kg白藜芦醇能提高乌克兰鳞鲤抗氧化能力,其中肝胰脏超氧化物歧化酶（SOD）活性显著提高,丙二醛（MDA）含量明显降低,血浆中过氧化氢酶（CAT）活性也明显提高。与对照组相比,饲料中添加40-160 mg/kg白藜芦醇,能提高乌克兰鳞鲤肝胰脏、前肠和中肠的消化能力。综合分析,饲料中添加80-160 mg/kg白藜芦醇能有效提高乌克兰鳞鲤幼鱼的非特性免疫力和消化功能。

乌克兰鳞鲤同工酶及mtDNA D-loop区段的RFLP分析

[目的]分析乌克兰鳞鲤的遗传结构,以期为乌克兰鳞鲤的遗传育种研究提供依据。[方法]利用水平式淀粉凝胶电泳法对乌克兰鳞鲤(46尾)进行了AAT、α-GPD、GPI、IDH、MDH和PGM共6种同工酶以及肌浆蛋白(PROT)的电泳分析。应用PCR技术扩增了其mtDNA的D-loop区段,利用12种限制性内切酶对其扩增片段进行了RFLP分析;并对2种单倍型的PCR扩增片段进行了序列分析。[结果]同工酶检测出的12个基因座位中,α-GPD*、GPI*和PGM*存在变异,多态基因座位比例及平均杂合度预期值分别为25%和0.092 0。RFLP检测结果表明PCR扩增到约1.6 kb的DNA片段,8种限制性内切酶(AluⅠ、DraⅠ、EcoRⅠ、HaeⅢ、HapⅡ、HinfⅠ、TaqⅠ和XspⅠ)有酶切位点,DraⅠ和TaqⅠ个体间存在变异。将不同酶切类型结果组合后,得到2种单倍型。[结论]根据同工酶检测结果,可以认为乌克兰鳞鲤含有中国鲤与欧洲鲤2种血统;与RFLP分析结果相比,序列分析表明2种单倍型在DraⅠ和TaqⅠ酶切位点以外也存在碱基差异。

乌克兰鳞鲤二、三倍体成鱼肌肉营养成分的对比分析

[目的]通过对乌克兰鳞鲤二、三倍体成鱼肌肉的水分、总灰分、粗脂肪、粗蛋白以及氨基酸和脂肪酸构成等进行对比,为科学评估其营养品质提供基础数据。[方法]分析用样品取自鲤鱼背部肌肉,各指标的测定采用国家标准方法。[结果]三倍体与二倍体肌肉中的水分、总灰分、粗脂肪含量无差异,而三倍体粗蛋白含量在0.05水平显著高于二倍体;乌克兰鳞鲤三倍体成鱼肌肉的脂肪酸种类、脂肪酸总量、必需脂肪酸含量明显高于二倍体;二、三倍体成鱼肌肉中的氨基酸种类相同,均为18种,但三倍体鲜味氨基酸、必需氨基酸以及氨基酸总量和氨基酸评分值均高于二倍体。[结论]乌克兰鳞鲤三倍体比二倍体更具有营养学优势。

州河鲤、乌克兰鳞鲤成鱼肌肉营养成分的对比分析

通过对州河鲤和乌克兰鳞鲤成鱼肌肉的粗蛋白、水分、灰分、粗脂肪以及氨基酸和脂肪酸构成等进行对比分析,为科学评估其营养品质提供基础数据。结果表明:乌克兰鳞鲤成鱼肌肉中的蛋白质(19.20%)、水分(78.76%)和灰分(1.45%)均极显著地高于州河鲤(18.52%、76.83%、1.20%;P<0.01),而州河鲤的脂肪含量(3.76%)又极显著地高于乌克兰鳞鲤(1.79%;P<0.01);州河鲤成鱼肌肉脂肪酸的种类、脂肪酸总量和必需脂肪酸含量(11种、2.88%、0.60%)均高于乌克兰鳞鲤(10种、0.64%、0.10%),且州河鲤脂肪酸的营养价值略高于乌克兰鳞鲤;州河鲤和乌克兰鳞鲤都含有18种氨基酸,而乌克兰鳞鲤的必需氨基酸含量、风味氨基酸含量和氨基酸总量(8.3%、7.58%、20.29%)均高于州河鲤(7.53%、6.48%、17.82%),乌克兰鳞鲤蛋白质的氨基酸组成优于州河鲤。综合以上分析可以得出,乌克兰鳞鲤较州河鲤更具有营养学优势。

流式细胞术检测乌克兰鳞鲤倍性

[目的]筛选测定乌克兰鳞鲤(Cyprinus carpio)倍性的合适的方法。[方法]建立3种流式细胞术样品制备方法:肾组织单细胞悬液法、红细胞甲醛固定法和红细胞乙醇固定法。采用BD FACS tar Puls型流式细胞仪测定倍性。[结果]3种制样方法均能得到结果,但红细胞甲醛固定法最佳。[结论]流式细胞术可精确、快速地检测乌克兰鳞鲤倍性,适应其多倍体产业化的需要。

二、三倍体乌克兰鳞鲤染色体核型分析

以二、三倍体乌克兰鳞鲤为材料,采用植物血球凝集素(PHA)体内注射,肾组织细胞短期培养,常规空气干燥法制备染色体。其核型分析结果:二倍体乌克兰鳞鲤染色体2n=100核型公式为:26m+30sm+30st+14t,染色体臂数NF=156;三倍体乌克兰鳞鲤染色体的核型公式为3n=150=39m+45sm+45st+21t,染色体臂数NF=234,二、三倍体染色体数之比为1:1.5。二倍体核型与已报道的鲤鱼染色体核型相似。未发现性染色体。

乌克兰鳞鲤“津新1号”肌肉营养成分分析与品质评定

利用国标生化方法对乌克兰鳞鲤“津新1号”肌肉营养成分进行了测定分析。结果显示,乌克兰鳞鲤“津新1号”肌肉(鲜样)中蛋白质含量为18.00 g/100 g、脂肪含量为5.60 g/100 g;肌肉中含有18种氨基酸,总量(TAA)为16.54 g/100 g,其中8种必需氨基酸(EAA)的含量为6.91 g/100 g,4种鲜味氨基酸的含量为6.27 g/100 g,分别占氨基酸总量(TAA)的41.78%、37.91%,必需氨基酸(EAA)与非必需氨基酸(NEAA)的比值为71.75%,符合FAO/WHO理想蛋白源评价标准;肌肉中富含镁、锌、硒等元素;肌肉中含有23种脂肪酸,饱和脂肪酸(SFA)占脂肪酸总量的25.49%,不饱和脂肪酸(UFA)占脂肪酸总量的74.51%,EPA和DHA的含量分别为0.0211 g/100 g和0.158 g/100 g。可见,乌克兰鳞鲤“津新1号”是一个具有较高营养价值和保健功能的优良养殖品种。

乌克兰鳞鲤丙酮酸激酶基因全长cDNA克隆及组织表达分析

采用RT-PCR和RACE方法克隆乌克兰鳞鲤丙铜酸激酶基因全长cDNA序列,试验结果表明,乌克兰鳞鲤丙酮酸羧激酶基因cDNA全长1913bp,其中开放阅读框1617bp,编码538个氨基酸,预测蛋白分子质量为58.72ku,等电点为6.57,3′非翻译区长154bp及多聚腺苷酸尾巴,5′非翻译区长143bp。具有活性位点和结构域边界。乌克兰鳞鲤丙酮酸羧激酶基因保守性较好,与已知的草鱼、斑马鱼和绿河鲀的相似性为84%~92%,与哺乳类(人类丙酮酸羧激酶)的相似度为68%。以β-actin基因为内标,采用半定量RT-PCR方法对丙酮酸羧激酶基因在肝胰脏、脑、肾脏、心脏、肌肉、肠道等组织的表达进行研究,结果表明,低糖组丙酮酸羧激酶基因在各组织中均有表达,在肝胰脏、脑和心脏中表达较丰富;高糖组丙酮酸羧激酶基因在肝胰脏、脑、肾脏和肠道中有明显表达,其中在肝胰脏和脑中的表达量较丰富,在心脏和肌肉中的表达很微弱。

乌克兰鳞鲤和建鲤苗种池塘养殖对比试验研究

通过对乌克兰鳞鲤和建鲤苗种池塘养殖对比试验研究,结果表明,在同等条件下,乌克兰鳞鲤苗种的长势比建鲤苗种平均快29.8%,饵料系数平均为1.41,667m2产量比建鲤高出近200kg,净利润比建鲤高出471.2元/667m2。

乌克兰鳞鲤苗种健康繁育技术

乌克兰鳞鲤作为我国审定的优质鲤鱼品种,具有耐低温、耐低氧、抗病力强、生长速度快、耐长途运输、肉味鲜美等特点,是非常优质的池塘增养殖品种。本文结合博罗县乌克兰鳞鲤苗种繁育实际,对乌克兰鳞鲤苗种健康繁育技术进行了总结,以期为养殖朋友提供参考。

乌克兰鳞鲤夏花当年养成鱼技术

常规品种经多年养殖出现近亲繁殖严重,种质退化,抗病能力下降,生长速度缓慢,养殖成本增加等影响养殖效益的问题,只有不断引进新品种,提高良种覆盖率,才能实现渔业增效渔民增收,新品种乌克兰鳞鲤具有耗氧率低,耐低温,易驯化,开食早,生长速度快,饲料转化率高,适应性和抗病力强的优点。由夏花直接养成商品鱼,缩短了养殖周期,提高了池塘利用率和生产力,该技术值得在"三北"地区大面积推广。

天津:乌克兰鳞鲤无SVC、KHVD疫病苗种场建设经验

鲤春病毒血症(SVC)、锦鲤疱疹病毒病(KHVD)是严重危害鲤科鱼类的重要疫病,在农业农村部《一、二、三类动物疫病病种名录》中被分别列为一类和二类动物疫病。在农业农村部全国水产技术推广总站的提议和支持下,天津成为全国五个无规定疫病苗种场试点省市之一。天津市水生动物疫病预防控制中心选取水产养殖公司开展了乌克兰鳞鲤无SVC、KHVD苗种场建设试点。经过近几年的试点工作,基本建成一座有效隔离、全程监控、管理规范。

5种类型鲤鱼线粒体DNA D-loop及邻近区段的遗传多样性分析

采用PCR技术对乌克兰鳞鲤、德国镜鲤、框鳞镜鲤、红镜鲤和州河鲤共97尾个体的线粒体DNA D-loop及邻近区段进行了扩增,经测序后获得碱基顺序排列清晰的DNA片段,长度分别为1342、1343、1344 bp。共得到8种单倍型(GenBank序列号为MG786481~MG786483,MG786485~MG786487,KC292935,KC292936)。使用Mega 6.0软件计算出5个群体的组内及组间遗传距离,并构建邻接系统树。线粒体DNA D-loop及邻近区段、单独D-loop区段的碱基序列分析结果表明,单倍型Ⅰ至Ⅳ为欧洲血统,碱基差异位点数较多,变异程度较高;单倍型Ⅴ至Ⅷ为亚洲血统,碱基差异位点数较少,变异程度较低。在线粒体DNA D-loop及邻近区段内,德国镜鲤组内平均遗传距离为0.00462,核苷酸多样性指数为0.00458,平均核苷酸差异性为6.150,遗传多样性最大;州河鲤组内的平均遗传距离为0.00065,核苷酸多样性指数为0.00065,平均核苷酸差异性为0.870,遗传多样性最低。

乌克兰鳞鲤早繁试验

通过亲鱼的室外室内强化培育和连续升温刺激、人工催产和体外受精实现了乌克兰鳞鲤苗种的提早繁育。在这次早繁试验中,利用130组乌克兰鳞鲤亲鱼共获得受精卵746万枚,孵化时间为60h,孵化率为42%,培育出200万尾水花鱼苗。

6种鱼mtDNA D-loop及其邻近区段的序列比较分析

采用PCR技术对乌克兰鳞鲤Cyprinus carpio、鲫Carassis auratus、鲢Hypophthalmichthys molitrix、鳙Aristichthys nobilis、草鱼Ctenopharyngodon idellus和乌苏里拟鲿Pseudobagrus ussuriensis共28个个体(分属于天津市动植物抗性重点实验室应用PCR-RFLP方法已检测出的不同单倍型)的mtDNA D-loop及其邻近区段进行扩增并测序,获得了大小为1 500～1 800 bp的扩增产物。用Clustal 1.83软件与GenBank中的鲤、金鱼、鲢、草鱼、长吻鮠5种鱼的mtDNA全序列进行排序比较,确定扩增产物包含完整的tRNAPro、D-loop、tRNAPhe序列以及12S rRNA长度约为400 bp的部分序列。将6种鱼共28个样本的序列提交GenBank后获得序列号为KC292921～KC292948。运用Mega 4.0软件计算出6种鱼的碱基组成和碱基差异,基于Kimura双参数模型计算种间的遗传距离,并与GenBank中5种鱼的mtDNA序列一起构建NJ系统树。序列结构分析表明,在6种鱼序列的4个区段中,D-loop区段在种内、种间的差异性均高于另外3个区段。6种鱼NJ系统树的结果与传统分类方法一致,可为鱼类分类以及种类鉴定提供科学依据。另外,6种鱼各种单倍型均在所测得序列中找到相应的酶切位点,印证了RFLP实验结果,在酶切位点以外也发现了同种鱼的不同单倍型间存在碱基差异。