人类精子冷冻复苏后乌头酸水合酶的表达变化及其致损伤机制

目的 探讨乌头酸水合酶（AGO2）在人类精子冷冻复苏前后的表达变化及其致精子功能损伤机制.方法 利用计算机精液分析系统（CASA）分析15例冷冻前后人类精子的活力;提取人类冷冻前后精子的总蛋白进行Western blot分析ACO2的含量变化;分析并且进行免疫荧光染色定位ACO2在精子的表达区域;利用化学发光法检测冷冻前后精子三磷酸腺苷（ATP）含量的变化;通过荧光探针JC-1对线粒体鞘染色结果的不同进行线粒体膜电势的检测,同时采用流式细胞仪直接对红色荧光（R1）与绿色荧光（R2）定量分析,比较两组差异.结果 与冷冻前组比较,冻后复苏组的精子活力下降了18％,ATP含量下降了32％,线粒体R1的比例下降了27％,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 AC02作为线粒体蛋白在冷冻复苏后发生了蛋白的降解,线粒体的功能受到了损伤,使得ATP的产量下降,导致了精子运动能力缺失.

层出镰刀菌乌头酸酶家族的功能研究

【目的】层出镰刀菌是引起苜蓿根腐病的主要病原菌之一,探究层出镰刀菌中乌头酸酶家族蛋白的功能特性,为深入认识层出镰刀菌基础生理代谢的分子机制提供依据。【方法】利用hmmsearch工具,对真菌中含有乌头酸酶结构域的蛋白进行检索,并进行系统进化分析;通过实时荧光定量PCR及SWISS MODEL建模技术分别分析FpACO基因的表达模式与蛋白结构;利用同源重组双交换方法构建层出镰刀菌乌头酸酶基因敲除突变体;分析ΔFpACO3、ΔFpACO4-1、ΔFpACO4-2敲除突变体的生长、产孢、孢子形态、环境胁迫响应及致病力等表型变化;进一步测定敲除突变体中线粒体代谢相关生理生化指标的变化情况。【结果】FpACO4-1与FpACO4-2在产孢及孢子形态发生中发挥作用;FpACO3、FpACO4-1、FpACO4-2参与调控层出镰刀菌对细胞壁胁迫及金属离子胁迫的敏感性;FpACO3、FpACO4-1、FpACO4-2影响线粒体代谢,包括总乌头酸酶活性、ATP含量、过氧化氢含量及三羧酸循环关键基因表达等。【结论】乌头酸酶家族参与调控层出镰刀菌产孢、孢子形态分化、细胞壁胁迫及金属离子胁迫响应和线粒体代谢等过程。

木香乙醇提取物对缺氧小鼠肝脏保护作用研究

目的观察木香乙醇提取物对模拟高原缺氧小鼠肝脏线粒体相关生化指标的影响,从线粒体功能角度探讨其对肝脏的保护作用机制。方法Balb/c小鼠随机分为正常对照组、缺氧模型组、乙酰唑胺组、木香70%乙醇提取物低、中、高剂量组,每组10只。乙酰唑胺组给予腹腔注射300 mg/kg乙酰唑胺,低、中、高剂量组分别给予木香70%乙醇提取物125、250、375 mg/kg。给药后缺氧72 h麻醉处死,提取肝脏线粒体,测定线粒体膜电位、线粒体复合体Ⅰ、Ⅱ和苹果酸脱氢酶、顺乌头酸酶、α-酮戊二酸脱氢酶活性。结果木香70%乙醇提取物低、中、高剂量组线粒体膜电位、线粒体顺乌头酸酶、α-酮戊二酸脱氢酶活性和呼吸链复合体Ⅱ活性高于缺氧模型组,高剂量组线粒体苹果酸脱氢酶活性低于缺氧模型组,线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性高于缺氧模型组(P<0.05,P<0.01)。结论木香70%乙醇提取物具有保护缺氧小鼠肝脏线粒体功能的活性。