乌奴龙胆组培快繁体系研究

为了建立乌奴龙胆的组培快繁体系,该研究选用采自西藏自治区拉萨市堆龙德庆区羊达乡境内的乌奴龙胆植株进行组培快繁实验。实验对乌奴龙胆的合适外植体、HgCl2溶液最佳消毒时间、最佳不定芽诱导分化培养基、最佳生根培养基进行了筛选。结果表明:带节茎段适合作为乌奴龙胆组培实验中的外植体,叶片块不适合作为外植体;HgCl2溶液最佳消毒时间为6min,平均未污染率为66.67%±3.33%,平均成活率为63.33%±3.33%;最佳不定芽诱导分化培养基为:P7处理组(MS+0.1g/L肌醇+30g/L蔗糖+5g/L琼脂粉+2.0mg/L 6-BA+1.0mg/L IAA pH5.6),平均芽增殖倍数为2.47±0.12,平均芽长度为17.07±1.56mm,平均未玻璃化率为80.00±5.57%;最佳生根培养基为:T5处理组(1/2MS+0.1g/L肌醇+30g/L蔗糖+5g/L琼脂粉+0.3mg/L NAA+0.3mg/L IBA pH5.6),平均生根率为100%,平均生根数为3.63±0.09条,平均根长度为39.03±0.30mm,平均根健康率为85.27%±1.22%.

乌奴龙胆苷D酰胺衍生物的合成

目的:为挖掘乌奴龙胆苷D的药用潜力,对乌奴龙胆苷D进行结构修饰。方法:以天然乌奴龙胆苷D为原料,经乙酰化反应得到全乙酰化乌奴龙胆苷D(1),化合物1经N,N'-二环己基碳二亚胺活化、4-二甲氨基吡啶催化,与胺类化合物缩合,合成乌奴龙胆苷D酰胺衍生物。结果:高效合成了4个乌奴龙胆苷D酰胺衍生物,分别为2',3',4',6'-四乙酰化乌奴龙胆苷D甲酰胺(2)、2',3',4',6'-四乙酰化乌奴龙胆苷D乙酰胺(3)、2',3',4',6'-四乙酰化乌奴龙胆苷D二甲酰胺(4)、2',3',4',6'-四乙酰化乌奴龙胆苷D苄酰胺(5)。化合物1~5均为新衍生物,所有衍生物的结构经波谱学方法确证。结论:该合成方法操作简单,反应条件温和,总收率高,反应的重现性好。

乌奴龙胆乙醇提取物不同极性部位体外抗氧化性研究

本文以BHT和VC为对照,采用分光光度法,通过四种不同体系对乌奴龙胆乙醇提取物的各个极性部位体外抗氧化活性进行比较研究。结果表明,各极性部位对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基均有一定的清除作用,也具有一定的还原能力。其中氯仿部位、乙酸乙酯部位效果最佳,其总还原力和对DPPH自由基的清除作用均优于BHT,本实验结果为扩展乌奴龙胆的应用范围和进一步研究其抗氧化活性成分及新型天然抗氧化剂的开发提供了理论依据。

乌奴龙胆的化学成分研究

目的研究龙胆科龙胆属植物乌奴龙胆Gentiana urnulaH.Smith全草的化学成分。方法运用硅胶、Sephadex LH-20凝胶和MCI色谱进行分离和纯化,通过现代波谱学方法,包括红外光谱、紫外光谱、旋光谱、质谱和核磁共振进行结构鉴定。结果 12个单体化合物从乌奴龙胆乙酸乙酯部位中分离获得,分别鉴定为:莨菪亭(1);3,5-二羟基-6,7,3′,4′-四甲氧基黄酮(2);1,5,8-三羟基-3-甲氧基■酮(3);1,5,7-三羟基-3-甲氧基■酮(4);1,3,7,8-四羟基■酮(5);1,7-二羟基-3,8-二甲氧基■酮(6);1,3,8-三羟基-7-甲氧基■酮(7);2-羰基坡曼酸(8);19α-羟基-3-乙酰基乌苏酸(9);槲皮素(10);科罗索酸(11)和苜蓿素(12)。结论除化合物3和5,其余化合物均为首次从该植物中分离获得。

乌奴龙胆中五个新的环烯醚萜甙

从藏药乌奴龙胆（ＧｅｎｔｉａｎａｕｒｎｕｌａＳｍｉｔｈ）（龙胆科）的全草中分离到５个新的环烯醚萜甙，命名为乌奴龙胆甙（ｇｅｎｔｉｏｕｍｏｓｉｄｅ）Ａ－Ｅ；它们的结构主要通过光谱分析得以确定。其中，乌奴龙胆Ａ－Ｃ是二聚环烯醚萜甙，而乌奴龙胆甙Ｄ和Ｅ为马钱素型的环烯醚萜甙，所有这些化合物的分子中都具有一个２，３－二羟基苯甲酰基或其衍生物的取代基。

乌奴龙胆的挥发性成分分析

目的建立顶空-气质联用(HS-GC-MS)分析乌奴龙胆挥发性成分的方法,分析乌奴龙胆挥发性成分种类,为乌奴龙胆临床的应用提供参考。方法采用顶空-气相色谱质谱联用技术(HS-GC-MS)对乌奴龙胆的挥发性成分进行分离和鉴定,通过NIST谱库检索,确定各样品中挥发性成分的组成,并按峰面积归一化法进行相对含量分析。结果从乌奴龙胆挥发性成分中共鉴定出57种化学成分,主要是醛类、烯烃、酮类、酯类物质。结论在检测鉴定出的挥发性成分中,均以希烃类成分为主,含量最高的是(+)一柠檬烯(45.055%),本次还从乌奴龙胆中新发现了异戊醛、香叶醇、柠檬醛、芳樟醇天水醛钠、反式石竹烯、橙花醇等物质,为乌奴龙胆药材的挥发性成分,为进一步研究和产品开发提供数据支撑。

藏药乌奴龙胆的生药鉴定

目的:对乌奴龙胆Gentiana urnula H.Smith的全草进行鉴定。方法:来源,性状,显微及理化鉴定。结果:详细描述了乌奴龙胆生物生药性状,显微特征,理化鉴定。结论:实验结果为藏药乌奴龙胆的生药鉴定、开发利用及质量标准的制订提供参考依据。

藏药乌奴龙胆的黄酮含量测定研究

目的:分别测定乌奴龙胆不同批次、不同部位的总黄酮含量,并比较所含总黄酮含量。方法:将3批乌奴龙胆及第3批乌奴龙胆的茎、叶、花分别粉碎,用超声提取,得提取液,采用紫外-可见分光光度法,以芦丁为对照品测定总黄酮含量。结果:3批乌奴龙胆的总黄酮含量分别为33.33 mg·g^(-1)、32.48 mg·g^(-1)、40.23 mg·g^(-1);第3批乌奴龙胆茎、叶、花中总黄酮含量为32.34 mg·g^(-1)、57.74 mg·g^(-1)、72.15 mg·g^(-1)。结论:不同批次的乌奴龙胆总黄酮含量会有所差异;乌奴龙胆茎、叶、花中都含有黄酮类成分,花中的含量最多,茎中的含量最少。

藏药乌奴龙胆质量标准研究

乌奴龙胆为常用的藏药,但其质量标准仅有性状鉴别项。作为2015年版《中国药典》民族药质量标准提高的拟定品种,该研究建立该品种质量控制方法与标准。参照《中国药典》2010年版附录相关方法,对乌奴龙胆药材水分、灰分、酸不溶性灰分及醇溶性浸出物进行测定;以乌奴龙胆苷A为对照物质,建立薄层鉴别方法;采用HPLC建立主要成分乌奴龙胆苷A的含量测定方法。结果以三氯化铝试液为显色剂,乌奴龙胆中各成分在紫外光灯（366 nm）下检视,能得到较好的分离,在与对照品的相应位置上显示相同的颜色荧光斑点;含量测定方法学研究结果表明,乌奴龙胆苷A在0.009 95~0.398 g·L-1呈良好的线性关系,回归方程为Y=1 467.1X＋41.407（r=0.999 9）,平均回收率为98.3%（RSD 2.2%）。15批乌奴龙胆药材样品的测定结果表明,乌奴龙胆苷A的质量分数为0.175%~1.83%;醇溶性浸出物为29.2%~35.2%,水分为8.60%~9.93%;10批代表性样品总灰分范围在10.2%~17.2%;酸不溶性灰分范围在5.26%~10.8%。以上结果表明建立的标准具有较好的专属性和准确性,可用于乌奴龙胆药材的质量控制。建议规定乌奴龙胆药材的水分含量不超过12.0%;总灰分不得过15.0%;酸不溶性灰分不得过8.0%;浸出物不得少于26.0%;含乌奴龙胆苷A（C40H52O22）不得少于0.80%。

藏药乌奴龙胆水提多糖的体外抗氧化活性研究

基于对我国传统民族藏药的认识及研究进展,用热水浸提的方法制备乌奴龙胆多糖提取液,采用分光光度法探讨60℃和100℃ 2种不同温度条件下乌奴龙胆水提多糖的还原能力及对清除DPPH自由基、羟基自由基、ABTS+自由基和超氧阴离子自由基的能力上是否存在差异。结果表明:在一定浓度范围内,60℃条件下乌奴龙胆水提多糖对DPPH自由基的清除能力较好,而在100℃条件下,其对羟基自由基和ABTS+自由基的清除能力较好。总之,在两种提取温度条件下,乌奴龙胆水提多糖均具有良好的抗氧化活性。

一测多评法测定大花龙胆中环烯醚萜类和黄酮类成分的含量

目的拟用一测多评法同时测定大花龙胆Gentiana szechenyii中的环烯醚萜类成分和黄酮类成分的含量,并验证该方法在大花龙胆质量评价应用中的可行性和适用性。方法采用HPLC,以大花龙胆药材中2个典型成分大花龙胆苷A、异荭草苷为内参物,测定其与马钱苷酸、獐牙菜苷、乌奴龙胆苷D、平龙胆酯苷、异金雀花素-2″-O-吡喃葡萄糖苷、异金雀花素的相对校正因子,并用该相对校正因子计算其他几种成分的含量,实现一测多评;采用外标法测定药材中这8种成分的含量,并比较两者差异,以验证一测多评法的准确性和可行性;同时对不同产地药材质量进行评价。结果以大花龙胆苷A为内参物,马钱苷酸、獐芽菜苷、乌奴龙胆苷D、平龙胆酯苷的相对校正因子分别为1.901、0.994、0.974、1.398;以异荭草苷为内参物,异金雀花素-2″-O-吡喃葡萄糖苷、异金雀花素的相对校正因子分别为1.511、0.969。各相对校正因子重复性良好。一测多评法与外标法对24批大花龙胆中8个成分含量的测定结果无显著差异。结论所建立的一测多评法结果准确、可靠、重复性好,可为大花龙胆多指标质量评价提供参考。

藏兽医治疗家畜常见内科病验方

藏兽医是青藏高原藏医师在长期与动物疫病做斗争的经验总结,也是祖国兽医学不可分割的组成部分,在广大藏区,藏兽医师利用本地植物、矿物等药用资源,通过近千年的收集、挖掘和整理,总结出一些适合青藏高原动物疫病治疗的验方。收集、整理、使用这些验方,一是可以培养本地藏兽医人才、二是可使治疗动物疫病成本降低,为藏区新时期动物疫病防控打下良好的基础,在保障畜牧业生产起到更大的作用。

藏药大花龙胆正丁醇部位的化学成分研究

目的研究藏药大花龙胆Gentiana szechenyii花枝乙醇提取物的正丁醇部位的化学成分。方法通过制备高效液相色谱法分离纯化,利用各种谱学技术鉴定化合物的结构。结果从大花龙胆花枝乙醇提取物的正丁醇部位分离得到6个化合物,分别鉴定为大花龙胆酯苷A(1)、大花龙胆苷A(2)、异金雀花素-2″-O-吡喃葡萄糖苷(3)、异金雀花素(4)、乌奴龙胆苷D(5)和平龙胆酯苷(6)。结论化合物1为1个新的环烯醚萜苷类化合物,命名为大花龙胆酯苷A。

藏药白花龙胆质量标准研究

为了对藏药白花龙胆药材进行有效的质量控制,该研究建立了白花龙胆药材的质量控制方法与标准。参照《中国药典》2010年版附录相关方法,对白花龙胆药材的水分、灰分及醇溶性浸出物进行测定;采用薄层色谱法,以硅胶G为薄层板,乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸（7∶1.5∶1∶0.2）为展开剂,以大花龙胆及乌奴龙胆苷A为对照物质,建立其薄层鉴别方法;采用HPLC建立主要成分乌奴龙胆苷A的含量测定方法：采用Ultimate XB-C18色谱柱,以甲醇-0.02%磷酸水（52∶48）为流动相,流速1.0 m L·min-1,柱温25℃;检测波长240 nm。结果以三氯化铝试液为显色剂,白花龙胆中各成分在紫外光灯（366 nm）下检视,能得到较好的分离,在与对照药材和对照品的相应位置上均显示相同的颜色荧光斑点;含量测定方法学研究结果表明,乌奴龙胆苷A在10.01~400.32 mg·L-1呈良好的线性关系,回归方程为Y=1 539.5X-33.339（r=0.999 7）,平均回收率为99.68%（RSD 1.92%）。19批白花龙胆药材样品的测定结果表明,乌奴龙胆苷A的质量分数为14.48~31.51 mg·g-1;醇溶性浸出物的结果为24.21%~31.60%,水分为11.25%~12.74%;10批代表性样品总灰分为4.64%~6.12%。以上结果表明建立的标准具有较好的专属性和准确性,可用于白花龙胆药材的质量控制。

8种藏药体外抑菌作用研究

目的测定8种清热解毒类藏药异叶青兰、甘青乌头、獐芽菜、乌奴龙胆、五脉绿绒蒿、铁棒锤、蒺藜、兔耳草体外抑菌活性。方法用琼脂扩散法和微量稀释法研究8种清热解毒类藏药体外抑菌活性,以抑菌圈和最小抑菌浓度（MIC）为评价指标。结果藏药水提取物和醇提取物对所选菌种都具有一定的抑制作用,形成抑菌圈直径范围为8~22 cm,MIC范围为1.56~50.00 mg.mL-1。其中异叶青兰和甘青乌头抑菌活性最强,五脉绿绒蒿基本没有抑菌作用。结论8种藏药水提取物,抑菌活性异叶青兰〉甘青乌头〉獐芽菜〉兔耳草〉铁棒锤〉蒺藜〉乌奴龙胆〉五脉绿绒蒿;而对于醇提取物,异叶青兰〉甘青乌头〉铁棒锤〉兔耳草〉蒺藜〉獐芽菜〉乌奴龙胆〉五脉绿绒蒿。