益智仁-乌药药对调控PI3K/Akt/mTOR通路介导细胞自噬保护肾小球足细胞的作用机制研究

目的研究益智仁-乌药药对通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路促进足细胞自噬治疗糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)的作用。方法60只造模成功的C57BL/KSJ-db/db(以下简称db/db)小鼠随机分为模型组、二甲双胍组、缬沙坦组、益智仁-乌药药对(低、中、高剂量)组,每组10只;另取10只C57BL/KSJ-db/m(以下简称db/m)小鼠为正常组,正常组和模型组给予生理盐水,治疗组小鼠分别给予相应药物,给药8周后检测小鼠肾脏病理学改变,足细胞自噬体数量、结构及相关蛋白表达。结果与模型组相比,益智仁-乌药药对组可显著减轻糖尿病肾病小鼠肾小球基底膜增厚情况,增加足细胞自噬体数量,显著升高自噬相关蛋白表达(P<0.05),降低PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达(P<0.05)。其中益智仁-乌药药对高剂量组各指标改善优于益智仁-乌药低、中剂量组。结论益智仁-乌药药对通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路激活,提高足细胞自噬水平,减轻足细胞损伤,发挥治疗糖尿病肾病的作用。

基于变异系数法-AHP综合加权结合响应面法优选醋炙乌药炮制工艺

目的优化醋炙乌药的炮制工艺,为醋炙乌药的规范化生产和质量控制提供科学依据。方法在单因素实验的基础上,采用多指标-响应面法设计实验,以乌药中6个指标成分(去甲异波尔定、波尔定碱、乌药内酯、异乌药内酯、乌药醚内酯、乌药醇)的含量为评价指标,应用变异系数法结合层次分析法(AHP)综合加权确定各指标的权重系数并计算综合评分(OD),对醋炙乌药炮制过程中的加醋量A、炒制温度B以及炒制时间C等关键因素进行考察并进行验证,优选出醋炙乌药的最佳炮制工艺。结果最佳炮制工艺为每100 g乌药加30 g的米醋(以水稀释至60 g)进行润制90 min后,80℃翻炒20 min,取出摊凉,除去过焦品并筛去碎屑,即得。结论优化所得的最佳工艺可控性和可行性较好,可为后续深入研究以醋炙乌药为代表的乌药特色炮制品种提供基础,也为新时代下的传统特色炮制饮片产业提供新的思路和借鉴。

乌药叶茶联合利拉鲁肽治疗非酒精性脂肪性肝病合并2型糖尿病1例

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指除外过量饮酒和其他明确的损肝因素所致的、以弥漫性肝细胞大疱性脂肪变为病理特征的临床综合征,与胰岛素抵抗和遗传易感性密切相关的获得性代谢应激性肝损伤。2型糖尿病是因胰岛素抵抗和(或)胰岛素分泌不足引起的以血糖水平升高为特征的慢性代谢性疾病。两者危险因素和发病机制相似,是代谢综合征累及肝脏和胰岛β细胞的不同表型。我院收治NAFLD合并2型糖尿病的肥胖学生1例,经乌药叶茶联合利拉鲁肽联合治疗后恢复良好,现报道如下。

基于UFLC-QTrap-MS/MS结合多元统计分析的不同产地、不同部位乌药中核苷和氨基酸类成分分析

本研究建立了一种超快速液相色谱-三重四极杆/线性离子阱-串联质谱(UFLC-QTrap-MS/MS)同时测定乌药中11种核苷类和14种氨基酸类成分的分析方法,并结合多元统计分析比较不同产地、不同部位乌药的质量。采用Waters XBridge Amide色谱柱(2.1 mm×100 mm×3.5μm),以0.2%甲酸水溶液(A)-0.2%甲酸乙腈溶液(B)为流动相进行梯度洗脱;在电喷雾正离子模式下,以多反应监测(MRM)进行质谱检测;基于各成分的质量浓度,用方差分析(ANOVA)、主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)、层次聚类分析(HCA)、逼近理想解排序法(TOPSIS)以及灰色关联度分析(GRA),对不同产地、不同部位乌药样品进行综合评价。结果表明,所测成分在一定浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数均大于0.9924;精密度、重复性、稳定性良好,平均加样回收率为94.86%~106.47%,相对标准偏差(RSD)均小于4.55%。不同产地、不同部位乌药样品间存在一定的差异,HCA和PCA 2种方法均将样品分为3类。OPLS-DA模型分析通过VIP值共筛选得到6个差异性化合物,分别为尿苷、丙氨酸、胞嘧啶、黄嘌呤、腺嘌呤、鸟嘌呤。该方法简便、灵敏度高、重现性好,可用于乌药中核苷和氨基酸类成分的同时测定,为药材质量评价和综合利用提供方法参考。

乌药中3个新的倍半萜

研究乌药的化学成分。采用硅胶、ODS、Sephadex LH-20、制备液相等多种色谱分离技术进行分离纯化,通过波谱数据分析进行结构鉴定。从乌药90%乙醇提取物中分离得到4个倍半萜,分别鉴定为linderaggredin B1(1)、乌药酮酸A(2)、乌药酮酸B(3)、chlorahupetolide K(4),其中化合物1~3为新化合物,化合物4为首次从樟科中分离得到。

延胡索去甲乌药碱合成酶基因CyNCS1克隆及其表达模式分析

【目的】克隆延胡索去甲乌药碱合成酶(norcoclaurine synthase, NCS)基因,分析其在延胡索异喹啉类生物碱合成中的关键作用。【方法】基于转录组数据库,利用逆转录PCR克隆延胡索CyNCS1基因及其启动子区域序列,采用生物信息学方法分析其编码蛋白的理化性质、结构特征及其启动子区域顺式作用元件,同时进行多序列比对和系统进化树分析,确定其进化关系;利用实时荧光定量PCR对其根、茎、叶及发育早、中、晚期块茎的组织表达模式进行分析;对茉莉酸甲酯(MeJA)、脱落酸(ABA)处理0,4,8,12 h的叶片进行表达谱分析,以体积分数75%酒精溶剂处理为对照(CK),确定该基因的表达特征。【结果】CyNCS1基因开放读码框长873 bp,编码291个氨基酸,编码蛋白分子量为33.09 ku,等电点为6.90,具有去甲乌药碱合成酶保守的催化结构域(GDGGVGTV/IL、YKEKF和MIEGGHLDMG),且不含信号肽,预测定位于细胞核中。多序列比对结果显示,CyNCS1与石生黄堇、罂粟的NCS蛋白同源性较高,分别为83.6%和82.1%;系统进化树结果显示,CyNCS1与石生黄堇CsNCS蛋白聚为一支,说明二者亲缘关系较近。该基因启动子区长2 238 bp,包含多种植物激素及低温、热胁迫等环境因子的顺式作用元件。实时荧光定量PCR结果显示,随着发育推进块茎中CyNCS1的表达量显著增高,且受到MeJA和ABA的诱导,MeJA处理8 h时表达量为0 h的3.10倍,ABA处理8 h为0 h的3.16倍;而对照CyNCS1表达量随时间推移无明显变化。【结论】克隆并鉴定了延胡索NCS酶基因CyNCS1,明确了其在发育进程中的表达模式,并确定该基因表达受MeJA和ABA的诱导。

李果烈应用百合乌药药对临床经验

总结李果烈教授应用百合乌药药对辨治疾病的经验。临床中,李老既传承经典,应用百合乌药药对辨治肝胃不和之胃疾,又开拓创新,秉承异病同治的中医思想,基于脏腑病机理论,将百合乌药药对灵活应用于中晚期帕金森病、糖尿病肾病、抑郁症的临床治疗中,屡获良效。附验案2则。

基于电子鼻技术和GC-MS对不同产地乌药的鉴别和挥发油成分分析

目的 利用电子鼻技术和气相色谱质谱联用(GC-MS)法对不同产地乌药进行鉴别以及成分分析。方法 采用电子鼻检测来自10个产地的乌药块根气味信息,采用主成分分析(PCA)、线性判别分析(LDA)和负荷加载分析(LA)构建分类乌药鉴别模型实现快速区分,同时结合GC-MS对其挥发油成分进行定性和定量分析验证。结果 PCA分析表明第一主成分的贡献率为97.57%,总贡献率为99.08%。LDA分析表明第一主成分的贡献率为55.47%,总贡献率为92.61%。GC-MS从10个产地乌药中共检测出145种成分,13种共有成分,49种特有成分。结论 不同产地的乌药由于挥发性成分种类及相对含量有差异,并且电子鼻技术可以对不同产地乌药进行有效区分。可为后续此类药物药效动力学研究和质量控制研究提供科学规范的物质基础。

去甲乌药碱的药理活性及作用机制研究进展

去甲乌药碱(Higenamine,HG)是最初从乌头中分离得到的一种苄基异喹啉类生物碱。HG的药理活性主要表现在强心作用、舒张血管、抗血栓、减轻心肌缺血/再灌注损伤、抗氧化、抗炎、免疫调节、抗肿瘤等方面,对心力衰竭、休克、关节炎、缺血/再灌注损伤、抑郁症及肿瘤等多种疾病表现出潜在的治疗作用。加强对HG药理活性及作用机制研究,促进其新药开发和临床应用转化具有重要意义。

百合乌药泻心汤联合奥美拉唑治疗脾胃湿热型慢性浅表性胃炎的疗效及对胃肠激素的影响

目的 观察百合乌药泻心汤联合奥美拉唑治疗脾胃湿热型慢性浅表性胃炎(CGS)的疗效及对胃肠激素的影响。方法 选取2020年1月—2022年12月黔西南州中医院收治的脾胃湿热型CGS患者50例,按随机数字表法分为单一用药组与联合用药组,各25例。单一用药组给予奥美拉唑肠溶胶囊,联合用药组在单一用药组基础上加用百合乌药泻心汤,2组均治疗2周。比较2组临床疗效、中医证候积分、血清炎性因子[白介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)]、胃肠激素指标[胃泌素(GS)、胃蛋白酶(PG)]、T淋巴细胞亚群(CD4^(+)、CD8^(+)),不良反应。结果 联合用药组总有效率为96.00%,高于单一用药组的68.00%(χ^(2)=4.878,P=0.027)。治疗2周后,联合用药组胃痛胃胀、胃烧灼感、纳差、反酸嗳气积分低于治疗前,且联合用药组低于单一用药组(P<0.01);2组血清IL-6、CRP水平及CD8^(+)低于治疗前,血清PG、GS水平及CD4^(+)高于治疗前,且联合用药组变化幅度大于单一用药组(P<0.01)。联合用药组不良反应总发生率为4.00%,与单一用药组的16.00%比较,差异无统计学意义(χ^(2)=0.889,P=0.346)。结论 百合乌药泻心汤联合奥美拉唑用于脾胃湿热型CGS患者治疗中可提高临床疗效,改善患者的临床症状,促进胃肠激素分泌,缓解炎症,增强机体免疫功能,且安全性较高。

张声生应用百合乌药汤的临证经验

百合乌药汤是治疗脾虚气滞、寒热错杂之胃痛的名方。张声生教授把握百合乌药汤补脾胃阴、降气润燥、调气和血的作用,可将其辨证配伍用于脾胃阴虚、气滞不通导致的吐酸、胃痛、胃痞等病的治疗,遣方用药时重视药物配伍,以求达到增效减毒、扩大治疗范围等目的,临床常用百合25~30 g配伍乌药10 g,以发挥其补虚降逆的作用,并根据其药性组成特点,配伍活血行气之丹参饮以增强治胃痛之功,清热祛湿之左金丸以治吐酸,健脾益气之六君子汤或异功散以治疗胃痞,扩大了本方的使用范围,临床疗效显著。

去甲乌药碱对M1巨噬细胞极化和焦亡的影响及机制研究

目的探讨去甲乌药碱(HG)对M1巨噬细胞(RAW264.7细胞诱导)极化和焦亡的影响及机制。方法采用CCK-8法测定RAW264.7细胞的增殖抑制率,筛选HG最佳实验浓度。将细胞随机分为空白组、白细胞介素(IL)-4+IL-13组、脂多糖(LPS)组、LPS+三磷酸腺苷(ATP)组、IL-4+IL-13+HG组、LPS+HG组、LPS+ATP+HG组。空白组、IL-4+IL-13组、LPS组、LPS+ATP组分别给予等量PBS(IL-4和IL-1320 ng/mL)、1μg/mL LPS、1μg/mL LPS+5 mmol/L ATP干预;各给药组在以上干预基础上均给予50μmol/L HG处理。Real-time PCR检测巨噬细胞极化和焦亡相关mRNA的表达,Western blotting法检测巨噬细胞极化和焦亡相关蛋白的表达,流式细胞术检测巨噬细胞表面标记物,进行M1巨噬细胞全基因转录组测序分析、基因本体(GO)富集分析、基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。显微镜下观察细胞形态,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测转化生长因子(TGF)-β信号通路相关蛋白TGF-β1和血小板反应蛋白(THBS)-1。结果与空白组比较,LPS组IL-1β、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子(TNF)-αmRNA和iNOS、TNF-α蛋白相对表达量均高(均P<0.01);与LPS组比较,LPS+HG组IL-1β、iNOS、TNF-αmRNA和iNOS、TNF-α蛋白相对表达量均低(均P<0.01)。与空白组比较,LPS组CD206、精氨酸酶(Arg)-1蛋白相对表达量低(均P<0.05),CD86蛋白相对表达量及CD86/CD206高(均P<0.01);与LPS组比较,LPS+HG组CD206、Arg-1蛋白相对表达量高(均P<0.01),CD86蛋白相对表达量及CD86/CD206低(均P<0.01)。与空白组比较,IL-4+IL-13组Arg-1、IL-10 mRNA和CD206、Arg-1蛋白相对表达量高(P<0.05,P<0.01);与IL-4+IL-13组比较,IL-4+IL-13+HG组Arg-1、IL-10 mRNA和CD206、Arg-1蛋白相对表达量高(P<0.05,P<0.01)。HG导致M1巨噬细胞337个基因表达下调、148个基因表达上调,在十大核心基因中选择相关性最大的THBS-1基因进行KEGG富集分析,结果显示THBS-1/TGF-β1信号通路在HG调控M1巨噬细胞中具有重要作用。与空白组比较,LPS组THBS-1 mRNA相对表达量高、TGF-β1 mRNA相对表达量低(均P<0.01);与LPS组比较,LPS+HG组THBS-1 mRNA相对表达量低、TGF-β1 mRNA相对表达量高(均P<0.01)。用HG处理LPS+ATP诱导的巨噬细胞焦亡后,显微镜观察发现HG显著改善了焦亡巨噬细胞的细胞肿胀和破裂。与空白组比较,LPS+ATP组NOD样受体蛋白(NLRP)3、半胱天冬氨酸蛋白酶(Casp)-1、IL-1βmRNA和NLRP3、Gasdermins-D Full体(GSDMD-F)、Gasdermins-D N端体(GSDMD-N)、Casp-1蛋白相对表达量高(P<0.05,P<0.01);与LPS+ATP组比较,LPS+ATP+HG组NLRP3、Casp-1、IL-1βmRNA和NLRP3、GSDMD-F、GSDMD-N、Casp-1蛋白相对表达量低(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,LPS+ATP组TGF-β1 mRNA和蛋白相对表达量均低(均P<0.01),THBS-1 mRNA和蛋白相对表达量均高(均P<0.01);与LPS+ATP组比较,LPS+ATP+HG组TGF-β1 mRNA和蛋白相对表达量均高(P<0.01,P<0.05),THBS-1 mRNA和蛋白相对表达量均低(均P<0.01)。结论HG可以抑制M1巨噬细胞极化和焦亡并促进其由M1向M2转化,该作用与THBS-1/TGF-β1通路有关。

黄连和三角叶黄连去甲乌药碱合成酶(NCS)基因克隆与原核表达分析

目的:探究黄连和三角叶黄连去甲乌药碱合成酶(NCS)基因的表达差异,为理解同属植物生物碱含量差异机制奠定基础。方法:采集相同生长年限的黄连和三角叶黄连,分析其叶片、根和根茎的生物碱含量和生物碱合成的关键基因表达量,对关键基因进行克隆并构建原核表达载体。结果:黄连和三角叶黄连各部位生物碱含量存在差异,且NCS基因与各生物碱含量关系最密切,生物信息学分析显示NCS基因在两种黄连中无明显差异,同时亲缘关系十分接近;成功构建NCS基因的原核表达载体。结论:黄连和三角叶黄连的NCS基因是生物碱合成的关键基因,其在根的表达差异可能是影响生物碱合成的重要因素。

盐酸去甲乌药碱的合成及产业化

以(4-羟基-苯基)-乙酸为起始原料,先还原为醇再氧化为醛,然后与2-(3,4-二羟基苯基)乙胺发生Pictet-Spengler反应,便得到去甲乌药碱;精制后得到高纯度的目标化合物。该工艺原料易得,操作便捷,且绿色环保,适合产业化生产,总收率达42.2%,含量99.5%。本文还介绍了我们公司质检部门利用高效液相色谱检测盐酸去甲乌药碱的含量,包括溶液配制、样品前处理、液相色谱条件、进样和计算等,从而得到样品的含量。讨论了该工艺涉及两步重要的反应,Pictet-Spengler反应和活化DMSO氧化醇的反应。

裴氏乌药甘草二三汤联合龙骨灸治疗强直性脊柱炎临床观察

目的观察裴氏乌药甘草二三汤联合龙骨灸治疗强直性脊柱炎(AS)的临床效果。方法选择肾虚督寒型AS患者100例,按随机数字表法分为对照组和观察组,各50例。对照组选用西药规范治疗,观察组在对照组基础上加用裴氏乌药甘草二三汤联合龙骨灸治疗。治疗4周后,比较两组患者的总有效率、中医证候积分、疾病活动度、炎症指标及患者满意度等。结果观察组总有效率为96.00%(48/50),高于对照组的78.00%(39/50)(P<0.05)。治疗后,观察组中医证候积分、疾病活动度评估指标和炎症指标均明显低于对照组,满意度高于对照组(P<0.05)。结论裴氏乌药甘草二三汤联合龙骨灸治疗AS效果明确,且能够显著提高患者的总满意度。

百合乌药泻心汤在浅表性胃炎中的治疗效果及中医症候分析

探讨百合乌药泻心汤在浅表性胃炎中的疗效及对中医证候积分的影响。方法 选取我院收治的浅表性胃炎患者共80例作为研究对象,以随机数字表法分为观察组及对照组,对照组应用西药三联治疗,观察组在对照组的基础上应用百合乌药泻心汤治疗,对比两组治疗前后的胃镜粘膜征象、中医证候积分以及治疗有效率。结果 观察组的胃镜粘膜征象改善程度大于对照组(P<0.05),观察组中医证候积分降低程度大于对照组(P<0.05),观察组治疗有效率高于对照组(P<0.05)。结论 百合乌药泻心汤可以显著改善浅表性胃炎患者病情,促进其疾病康复。

刘沈林辨治化疗引发肠梗阻经验撷要

胃肠肿瘤患者手术后,在应用化疗药物的过程中,可因其毒副反应而导致肠道功能障碍,从而引发非机械性肠梗阻。刘沈林教授审证求因,每从患者的肿瘤分期、前期治疗情况、证候特点等进行病机分析,认为该症多因脏腑虚衰,化疗伤正,寒凝气滞,导致腑失通降,既有“不荣则痛”,又有“不通则痛”。在治疗上,刘教授提出“急则治其标”,以“通”立法,通过通降腑气、温中散寒,达到“通则不痛”的治疗效果。在预防措施上,刘教授强调应重视扶助正气,温补脾肾,补益气血,以治其本,避免肠梗阻复发。

天台乌药的组织培养与快速繁殖

以药用植物天台乌药当年生嫩茎为外植体,新芽萌动后取材,研究不同培养基对其组织培养和植株再生的影响。结果表明,最适的不定芽增殖培养基为MS+6-BA 2.0～3.5 mg.L-1+NAA 0.2 mg.L-1+Na2S2O31.25%(蔗糖3%),最佳的生根培养基为1/4 MS+IBA 1.0 mg.L-1(不加肌醇,蔗糖2%)。

乌药提取物的镇痛、抗炎作用研究

乌药的水提液、醇提物水溶液在5、10g/kg两个剂量组下能够明显延长小鼠热板法痛阈值。20g/kg剂量能够显著抑制小鼠因酒石酸锑钾刺激引起的扭体反应,与生理盐水组比较差异有显著性。20g/kg剂量能对抗混合致炎剂所致小鼠耳肿胀,降低肿胀率。乌药中进一步分离所得组分能够有效对抗角叉菜胶大鼠足跖肿胀。

应用薄层色谱-生物自显影技术评价乌药等三种中药的抗氧化活性

目的采用薄层色谱-生物自显影法研究与评价中药的抗氧化活性。方法用1，1-二苯基-2-苦肼基自由基乙醇溶液（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）和传统显色剂显色，拍摄图像，采用模拟扫描，获得各抗氧化成分的峰面积。结果以总峰面积大小为指标判定不同来源中药的抗氧化能力，结果表明浙江天台产乌药（94340）、四川凉山产厚朴（175647）和收集于上海的紫苏子（153206）清除DPPH自由基能力最强。以化学对照品峰面积与总峰面积的百分比来判定化合物抗氧化活性，表明去甲异波尔定（43．8％～66．0％）、厚朴酚与和厚朴酚（73．2％～93．2％）、木犀草素与芹菜素及成分“U”（47．6％～68．0％）分别是乌药、厚朴和紫苏子的主要抗氧化活性成分。结论本方法在中药抗氧化活性成分筛选及质量评价方面具有操作简便、选择性高、重现性好等优点。