益智仁-乌药药对调控PI3K/Akt/mTOR通路介导细胞自噬保护肾小球足细胞的作用机制研究

目的研究益智仁-乌药药对通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路促进足细胞自噬治疗糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)的作用。方法60只造模成功的C57BL/KSJ-db/db(以下简称db/db)小鼠随机分为模型组、二甲双胍组、缬沙坦组、益智仁-乌药药对(低、中、高剂量)组,每组10只;另取10只C57BL/KSJ-db/m(以下简称db/m)小鼠为正常组,正常组和模型组给予生理盐水,治疗组小鼠分别给予相应药物,给药8周后检测小鼠肾脏病理学改变,足细胞自噬体数量、结构及相关蛋白表达。结果与模型组相比,益智仁-乌药药对组可显著减轻糖尿病肾病小鼠肾小球基底膜增厚情况,增加足细胞自噬体数量,显著升高自噬相关蛋白表达(P<0.05),降低PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达(P<0.05)。其中益智仁-乌药药对高剂量组各指标改善优于益智仁-乌药低、中剂量组。结论益智仁-乌药药对通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路激活,提高足细胞自噬水平,减轻足细胞损伤,发挥治疗糖尿病肾病的作用。

乌药叶茶联合利拉鲁肽治疗非酒精性脂肪性肝病合并2型糖尿病1例

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指除外过量饮酒和其他明确的损肝因素所致的、以弥漫性肝细胞大疱性脂肪变为病理特征的临床综合征,与胰岛素抵抗和遗传易感性密切相关的获得性代谢应激性肝损伤。2型糖尿病是因胰岛素抵抗和(或)胰岛素分泌不足引起的以血糖水平升高为特征的慢性代谢性疾病。两者危险因素和发病机制相似,是代谢综合征累及肝脏和胰岛β细胞的不同表型。我院收治NAFLD合并2型糖尿病的肥胖学生1例,经乌药叶茶联合利拉鲁肽联合治疗后恢复良好,现报道如下。

乌药中3个新的倍半萜

研究乌药的化学成分。采用硅胶、ODS、Sephadex LH-20、制备液相等多种色谱分离技术进行分离纯化,通过波谱数据分析进行结构鉴定。从乌药90%乙醇提取物中分离得到4个倍半萜,分别鉴定为linderaggredin B1(1)、乌药酮酸A(2)、乌药酮酸B(3)、chlorahupetolide K(4),其中化合物1~3为新化合物,化合物4为首次从樟科中分离得到。

延胡索去甲乌药碱合成酶基因CyNCS1克隆及其表达模式分析

【目的】克隆延胡索去甲乌药碱合成酶(norcoclaurine synthase, NCS)基因,分析其在延胡索异喹啉类生物碱合成中的关键作用。【方法】基于转录组数据库,利用逆转录PCR克隆延胡索CyNCS1基因及其启动子区域序列,采用生物信息学方法分析其编码蛋白的理化性质、结构特征及其启动子区域顺式作用元件,同时进行多序列比对和系统进化树分析,确定其进化关系;利用实时荧光定量PCR对其根、茎、叶及发育早、中、晚期块茎的组织表达模式进行分析;对茉莉酸甲酯(MeJA)、脱落酸(ABA)处理0,4,8,12 h的叶片进行表达谱分析,以体积分数75%酒精溶剂处理为对照(CK),确定该基因的表达特征。【结果】CyNCS1基因开放读码框长873 bp,编码291个氨基酸,编码蛋白分子量为33.09 ku,等电点为6.90,具有去甲乌药碱合成酶保守的催化结构域(GDGGVGTV/IL、YKEKF和MIEGGHLDMG),且不含信号肽,预测定位于细胞核中。多序列比对结果显示,CyNCS1与石生黄堇、罂粟的NCS蛋白同源性较高,分别为83.6%和82.1%;系统进化树结果显示,CyNCS1与石生黄堇CsNCS蛋白聚为一支,说明二者亲缘关系较近。该基因启动子区长2 238 bp,包含多种植物激素及低温、热胁迫等环境因子的顺式作用元件。实时荧光定量PCR结果显示,随着发育推进块茎中CyNCS1的表达量显著增高,且受到MeJA和ABA的诱导,MeJA处理8 h时表达量为0 h的3.10倍,ABA处理8 h为0 h的3.16倍;而对照CyNCS1表达量随时间推移无明显变化。【结论】克隆并鉴定了延胡索NCS酶基因CyNCS1,明确了其在发育进程中的表达模式,并确定该基因表达受MeJA和ABA的诱导。

李果烈应用百合乌药药对临床经验

总结李果烈教授应用百合乌药药对辨治疾病的经验。临床中,李老既传承经典,应用百合乌药药对辨治肝胃不和之胃疾,又开拓创新,秉承异病同治的中医思想,基于脏腑病机理论,将百合乌药药对灵活应用于中晚期帕金森病、糖尿病肾病、抑郁症的临床治疗中,屡获良效。附验案2则。

基于UFLC-QTrap-MS/MS结合多元统计分析的不同产地、不同部位乌药中核苷和氨基酸类成分分析

本研究建立了一种超快速液相色谱-三重四极杆/线性离子阱-串联质谱(UFLC-QTrap-MS/MS)同时测定乌药中11种核苷类和14种氨基酸类成分的分析方法,并结合多元统计分析比较不同产地、不同部位乌药的质量。采用Waters XBridge Amide色谱柱(2.1 mm×100 mm×3.5μm),以0.2%甲酸水溶液(A)-0.2%甲酸乙腈溶液(B)为流动相进行梯度洗脱;在电喷雾正离子模式下,以多反应监测(MRM)进行质谱检测;基于各成分的质量浓度,用方差分析(ANOVA)、主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)、层次聚类分析(HCA)、逼近理想解排序法(TOPSIS)以及灰色关联度分析(GRA),对不同产地、不同部位乌药样品进行综合评价。结果表明,所测成分在一定浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数均大于0.9924;精密度、重复性、稳定性良好,平均加样回收率为94.86%~106.47%,相对标准偏差(RSD)均小于4.55%。不同产地、不同部位乌药样品间存在一定的差异,HCA和PCA 2种方法均将样品分为3类。OPLS-DA模型分析通过VIP值共筛选得到6个差异性化合物,分别为尿苷、丙氨酸、胞嘧啶、黄嘌呤、腺嘌呤、鸟嘌呤。该方法简便、灵敏度高、重现性好,可用于乌药中核苷和氨基酸类成分的同时测定,为药材质量评价和综合利用提供方法参考。

百合乌药泻心汤联合奥美拉唑治疗脾胃湿热型慢性浅表性胃炎的疗效及对胃肠激素的影响

目的 观察百合乌药泻心汤联合奥美拉唑治疗脾胃湿热型慢性浅表性胃炎(CGS)的疗效及对胃肠激素的影响。方法 选取2020年1月—2022年12月黔西南州中医院收治的脾胃湿热型CGS患者50例,按随机数字表法分为单一用药组与联合用药组,各25例。单一用药组给予奥美拉唑肠溶胶囊,联合用药组在单一用药组基础上加用百合乌药泻心汤,2组均治疗2周。比较2组临床疗效、中医证候积分、血清炎性因子[白介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)]、胃肠激素指标[胃泌素(GS)、胃蛋白酶(PG)]、T淋巴细胞亚群(CD4^(+)、CD8^(+)),不良反应。结果 联合用药组总有效率为96.00%,高于单一用药组的68.00%(χ^(2)=4.878,P=0.027)。治疗2周后,联合用药组胃痛胃胀、胃烧灼感、纳差、反酸嗳气积分低于治疗前,且联合用药组低于单一用药组(P<0.01);2组血清IL-6、CRP水平及CD8^(+)低于治疗前,血清PG、GS水平及CD4^(+)高于治疗前,且联合用药组变化幅度大于单一用药组(P<0.01)。联合用药组不良反应总发生率为4.00%,与单一用药组的16.00%比较,差异无统计学意义(χ^(2)=0.889,P=0.346)。结论 百合乌药泻心汤联合奥美拉唑用于脾胃湿热型CGS患者治疗中可提高临床疗效,改善患者的临床症状,促进胃肠激素分泌,缓解炎症,增强机体免疫功能,且安全性较高。

张声生应用百合乌药汤的临证经验

百合乌药汤是治疗脾虚气滞、寒热错杂之胃痛的名方。张声生教授把握百合乌药汤补脾胃阴、降气润燥、调气和血的作用,可将其辨证配伍用于脾胃阴虚、气滞不通导致的吐酸、胃痛、胃痞等病的治疗,遣方用药时重视药物配伍,以求达到增效减毒、扩大治疗范围等目的,临床常用百合25~30 g配伍乌药10 g,以发挥其补虚降逆的作用,并根据其药性组成特点,配伍活血行气之丹参饮以增强治胃痛之功,清热祛湿之左金丸以治吐酸,健脾益气之六君子汤或异功散以治疗胃痞,扩大了本方的使用范围,临床疗效显著。

黄连和三角叶黄连去甲乌药碱合成酶(NCS)基因克隆与原核表达分析

目的:探究黄连和三角叶黄连去甲乌药碱合成酶(NCS)基因的表达差异,为理解同属植物生物碱含量差异机制奠定基础。方法:采集相同生长年限的黄连和三角叶黄连,分析其叶片、根和根茎的生物碱含量和生物碱合成的关键基因表达量,对关键基因进行克隆并构建原核表达载体。结果:黄连和三角叶黄连各部位生物碱含量存在差异,且NCS基因与各生物碱含量关系最密切,生物信息学分析显示NCS基因在两种黄连中无明显差异,同时亲缘关系十分接近;成功构建NCS基因的原核表达载体。结论:黄连和三角叶黄连的NCS基因是生物碱合成的关键基因,其在根的表达差异可能是影响生物碱合成的重要因素。

盐酸去甲乌药碱的合成及产业化

以(4-羟基-苯基)-乙酸为起始原料,先还原为醇再氧化为醛,然后与2-(3,4-二羟基苯基)乙胺发生Pictet-Spengler反应,便得到去甲乌药碱;精制后得到高纯度的目标化合物。该工艺原料易得,操作便捷,且绿色环保,适合产业化生产,总收率达42.2%,含量99.5%。本文还介绍了我们公司质检部门利用高效液相色谱检测盐酸去甲乌药碱的含量,包括溶液配制、样品前处理、液相色谱条件、进样和计算等,从而得到样品的含量。讨论了该工艺涉及两步重要的反应,Pictet-Spengler反应和活化DMSO氧化醇的反应。

裴氏乌药甘草二三汤联合龙骨灸治疗强直性脊柱炎临床观察

目的观察裴氏乌药甘草二三汤联合龙骨灸治疗强直性脊柱炎(AS)的临床效果。方法选择肾虚督寒型AS患者100例,按随机数字表法分为对照组和观察组,各50例。对照组选用西药规范治疗,观察组在对照组基础上加用裴氏乌药甘草二三汤联合龙骨灸治疗。治疗4周后,比较两组患者的总有效率、中医证候积分、疾病活动度、炎症指标及患者满意度等。结果观察组总有效率为96.00%(48/50),高于对照组的78.00%(39/50)(P<0.05)。治疗后,观察组中医证候积分、疾病活动度评估指标和炎症指标均明显低于对照组,满意度高于对照组(P<0.05)。结论裴氏乌药甘草二三汤联合龙骨灸治疗AS效果明确,且能够显著提高患者的总满意度。

百合乌药泻心汤在浅表性胃炎中的治疗效果及中医症候分析

探讨百合乌药泻心汤在浅表性胃炎中的疗效及对中医证候积分的影响。方法 选取我院收治的浅表性胃炎患者共80例作为研究对象,以随机数字表法分为观察组及对照组,对照组应用西药三联治疗,观察组在对照组的基础上应用百合乌药泻心汤治疗,对比两组治疗前后的胃镜粘膜征象、中医证候积分以及治疗有效率。结果 观察组的胃镜粘膜征象改善程度大于对照组(P<0.05),观察组中医证候积分降低程度大于对照组(P<0.05),观察组治疗有效率高于对照组(P<0.05)。结论 百合乌药泻心汤可以显著改善浅表性胃炎患者病情,促进其疾病康复。

不同产地乌药质量评价及其改善IBS-D大鼠肠道低度炎症的机制研究

目的基于高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)对10批次不同产地乌药进行质量评价,并进一步探究乌药对腹泻型肠易激综合征(diarrhea-predominant irritable bowel syndrome,IBS-D)大鼠肠道低度炎症的作用机制。方法采用HPLC对10个不同批次乌药进行质量评价。选取雄性SD大鼠60只,随机分为对照组、IBS-D模型组、乌药低剂量组、乌药中剂量组、乌药高剂量组、阳性药物组。除对照组外,其余大鼠均接受“番泻叶灌胃联合束缚应激”刺激,构建IBS-D大鼠模型。乌药低、中、高剂量组大鼠分别灌胃乌药水提物(0.94、1.88、3.76 g·kg-1),阳性药物组大鼠予以匹维溴铵片水溶液(1.5 g·kg-1);而对照组和IBS-D模型组大鼠灌胃等体积蒸馏水,共计2周;采用HE染色、PAS染色观察大鼠结肠变化;运用免疫组织化学法和Western blot技术检测大鼠结肠组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPAR-γ)、血管细胞黏附分子1(vascular cell adhesion molecular-1,VCAM-1)、原癌基因酪氨酸蛋白激酶(proto-oncogene tyrosine-protein kinase Src,SRC)、Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)蛋白的相对表达水平。结果相似度评价、聚类结果和主成分分析结果显示,除浙江乌药(S6)外,其余批次乌药质量从整体上而言稳定可靠。HE染色和PAS染色结果显示,与对照组相比,IBS-D模型组大鼠结肠隐窝深度明显变浅、隐窝处杯状细胞数量明显减少;与IBS-D模型组相比,中、高剂量的乌药水提物能明显改善IBS-D大鼠结肠组织隐窝深度变浅及杯状细胞减少的状态;免疫组织化学和Western blot结果显示,3个剂量组的乌药水提物均可显著增强IBS-D大鼠结肠中PPAR-γ、YAP和SRC蛋白的相对表达量(P<0.05),同时能显著降低VCAM-1蛋白的相对表达量(P<0.05)。结论不同批次的乌药化学成分和含量差异不大,乌药能显著改善IBS-D大鼠低度炎症,其作用机制可能与调控PPAR-γ/VCAM-1有关。

温脾汤联合乌药散治疗小儿夜啼脾虚中寒证疗效观察

目的探讨温脾汤联合乌药散治疗小儿夜啼脾虚中寒证的临床疗效。方法选择2019年5月—2021年5月在郑州大学附属儿童医院中医科接受治疗的夜啼患儿124例。采取随机数字表法将全部患儿分为两组,即对照组62例与观察组62例。对照组患儿采用西医治疗方法:口服钙剂与维生素D。观察组患儿在对照组治疗方法基础上给予温脾汤和乌药散联合治疗。对比两组患儿的临床疗效。对比两组患儿治疗前后的中医证候评分、睡眠质量、治疗过程中的不良反应情况。结果对照组患儿的治疗总有效率为77.42%(48/62),观察组患儿的治疗总有效率为93.55%(58/62),差异具有统计学意义(χ^(2)=6.799,P<0.05)。经过治疗后,两组患儿的中医证候评分均较治疗前显著降低(P<0.05),另外治疗后观察组中医证候评分均低于对照组(P<0.05)。治疗前,两组夜间睡眠时间、夜醒次数、夜间清醒时间比较,差异没有统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组夜醒次数、夜间清醒时间较治疗前降低,夜间睡眠时间较治疗前增加(P<0.05),观察组夜醒次数、夜间清醒时间均低于对照组,观察组的夜间睡眠时间高于对照组(P<0.05)。两组患儿治疗期间均未出现不良反应。结论使用温脾汤联合乌药散治疗小儿夜啼脾虚中寒证,可明显改善治疗的效果,降低患儿的症状评分,改善患儿的睡眠质量,不增加治疗过程中的不良反应风险。

基于网络药理-分子对接探讨乌药治疗酒精性肝炎的作用机制

目的基于网络药理-分子对接,探讨乌药治疗酒精性肝炎的作用机制。方法通过中药网络药理学数据库鉴定乌药的活性成分;利用BATMAN和Swiss target prediction预测活性成分的靶蛋白;与CTD、GeneCards数据库的疾病相关基因进行整合,取交集作为潜在靶蛋白。然后,进行功能和信号通路富集分析,构建“活性分子-靶点-通路”网络,使用AutoDock对活性分子和靶蛋白进行分子对接。结果筛选活性成分33个,鉴定了1019个靶标,其中27个靶蛋白被认为是乌药治疗酒精性肝炎的关键分子。功能富集分析结果表明,这些靶蛋白主要涉及白细胞迁移、细胞黏附的正向调节、Toll样受体通路、TNF信号通路、酒精性肝病等。分子对接显示,槲皮素、亚油酸和石梓呋喃与关键靶蛋白(CXCL8、IL1B、IL-6等)存在相互作用,且主要通过氢键相互连接。结论本研究揭示了乌药的关键活性成分可通过多种蛋白及通路发挥治疗效应,为进一步研究乌药治疗酒精性肝炎的作用机制提供依据。

基于网络药理学和动物实验探讨乌药治疗慢性盆腔炎的作用机制

目的基于网络药理学预测乌药治疗慢性盆腔炎(CPID)的活性成分和作用靶点,通过动物实验验证并探讨其可能的作用机制,为乌药的临床应用提供科学依据。方法运用网络药理学和分子对接技术筛选乌药治疗CPID的可能有效成分及其作用靶点;采用大肠杆菌,金黄色葡萄球菌和解脲脲原体的混合菌加机械损伤法建立慢性盆腔炎模型大鼠;采用HE染色观察子宫、输卵管及脾脏的病理形态变化;采用试剂盒法检测大鼠血清中一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中白介素(IL)-6、IL-10的表达水平。流式细胞术法检测脾脏CD4^(+)、CD8a^(+)T细胞及CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞(Tregs)数量百分比。结果网络药理学研究共筛选出乌药中9个有效活性成分和4个核心治疗靶点,它们主要影响炎症反应相关的免疫调节。动物研究表明,乌药可显著抑制慢性盆腔炎大鼠子宫肿胀,调节输卵管及脾脏的形态改变,并有效减轻子宫和输卵管的炎性浸润与损伤,改善脾脏功能;乌药可显著降低血清中NO、IL-6和MDA水平,升高IL-10和SOD水平,并提高模型大鼠CD4^(+)T细胞数量百分比、升高CD4^(+)T/CD8a^(+)T细胞比值,降低CD8a^(+)T细胞数量百分比,提高模型大鼠异常降低的CD4^(+)CD25^(+)Tregs数量百分比(P<0.05)。结论乌药通过减轻慢性盆腔炎模型大鼠的氧化应激和炎症水平,同时调节T细胞亚群的免疫功能,从而改善慢性盆腔炎的病理过程而达到治疗效果,其临床价值值得进一步探索。

中药乌药化学成分与药理作用的研究进展

中药乌药主要有效成分包括萜类及其内酯、挥发油、生物碱、黄酮类等,具有抗炎、保肝、调节微生物群、抗肿瘤、降血糖降血脂、保护心血管系统等作用,尤其在防治心血管疾病方面,无论古代临床应用亦或是现代药理研究中均表现出了良好的开发潜力,但相关研究与应用较少。该文试归纳乌药的主要有效化学成分与药理作用,为乌药后续开发与应用提供参考。

百合乌药泻心汤治疗脾胃湿热型浅表性胃炎

目的探讨百合乌药泻心汤对脾胃湿热型浅表性胃炎患者临床症状、胃镜病理表现及胃黏膜细胞因子水平的影响。方法选择120例脾胃湿热型浅表性胃炎患者作为研究对象,随机分为观察组与对照组,各60例。对照组予阿莫西林、奥美拉唑、克拉霉素三联疗法进行治疗,观察组在对照组基础上联合百合乌药泻心汤口服,持续用药2周。比较2组临床疗效、中医证候、胃镜黏膜征象、病理学组织表现和胃黏膜细胞因子。结果观察组治疗后总有效率(95.00%,57/60)与对照组(91.67%,55/60)无显著差异(P>0.05)。治疗后2组胃脘疼痛、痞满不适和恶心欲吐中医证候评分均低于治疗前,且观察组低于对照组(P<0.05)。治疗后2组黏膜血管显露、黏膜皱襞变薄和黏膜色泽异常胃镜黏膜征象评分均低于治疗前,且观察组低于对照组(P<0.05);治疗后2组病理学组织表现明显改善,且观察组优于对照组(P<0.05);治疗后2组血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-8水平均低于治疗前,且观察组低于对照组(P<0.05)。结论百合乌药泻心汤可以显著改善脾胃湿热型浅表性胃炎患者胃脘疼痛、痞满不适和恶心欲吐临床症状,减轻胃黏膜组织病变程度,控制炎症水平。

外源添加红曲霉菌发酵对乌药叶特征成分的影响

目的:分析鉴定添加红曲霉菌发酵前后乌药叶特征成分的变化。方法:首先通过固态发酵制得发酵后乌药叶,采用超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)对发酵前后的乌药叶提取物进行定性分析。UPLC-Q-TOF-MS采用Agilent Eclipse Plus-C18 RRHD色谱柱(2.1 mm × 100 mm,1.8μm),以乙腈-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱。流速0.4 mL•min^(-1),柱温40℃,检测波长254 nm,进样量2μL。质谱分析采用电喷雾正离子模式采集。质谱分析采用电喷雾正离子全扫描模式采集,扫描范围为m/z 100-1500Da。结论:本文通过UPLCQ-TOF-MS对乌药叶红曲霉添加发酵前后样品的提取物的化学成分进行定性分析与比较。鉴定出31种主要成分,显著降低乌药叶中原有的黄酮及酚酸类物质,新增了10多种红曲霉菌发酵物中特有的活性成分,主要为莫纳可林类物质。该方法快速、可靠、高效,能较全面地反映红曲霉发酵的乌药叶的化学成分变化,可为深入开发红曲乌药叶产品提供基础依据。

乌药化学成分及药理作用研究进展

乌药是樟科山胡椒属植物,以干燥的块根入药,最早记载于《日华子本草》,在我国有悠久的药用历史。国内外学者从乌药中分离倍半萜类、生物碱类、挥发油类、环戊烯二酮类、苯类、黄酮类等类型,其中倍半萜类、生物碱类、挥发油类为其主要活性成分。现代药理研究表明,乌药具有抗炎镇痛、保肝、降血脂、抗肿瘤、抗氧化、治疗慢性肾病等生物活性。本文通过检索近十年来相关文献,对国内外有关乌药中化学成分和药理研究作用研究进展进行总结,以期为乌药的进一步研究和开发利用提供参考。