乌骨藤总苷抑制肝癌细胞增殖和AFP分泌

目的研究乌骨藤总苷对肝癌细胞增殖的作用及其机制。方法采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT比色法)或移植瘤小鼠模型,观察不同浓度乌骨藤总苷对人肝癌Bel-7404、HepG2细胞和小鼠肝癌Hepl-6细胞生长的影响;研究乌骨藤总苷抑制HepG2细胞生长与调控甲胎蛋白AFP分泌的关系。结果乌骨藤总苷对人肝癌Bel-7404、HepG2细胞和小鼠肝癌Hepl-6细胞生长有显著的抑制作用,能显著降低AFP的分泌。结论乌骨藤总苷抑制肝癌细胞增殖其机制可能与抑制AFP分泌有关。

乌骨藤总苷对SGC-7901、S_(180)、P_(388)肿瘤细胞的抑制作用研究

目的研究乌骨藤总苷对人胃癌细胞SGC-7901、肉瘤S180、淋巴白血病细胞P388的抑制作用。方法采用MTT比色法观察乌骨藤总苷对人胃癌细胞SGC-7901体外生长的影响;采用瘤体移植法将BALB/c裸鼠接种人胃癌细胞SGC-7901,通过计算肿瘤抑制率评价乌骨藤总苷对人胃癌细胞SGC-7901体内肿瘤生长抑制作用;采用腋窝皮下接种将昆明小鼠接种肉瘤S180,通过计算抑瘤率评价乌骨藤总苷对肉瘤S180体内肿瘤生长抑制作用;DBA/2小鼠腹腔接种淋巴白血病细胞P388,通过计算生命延长率评价乌骨藤总苷对淋巴白血病细胞P388体内生长抑制作用。结果乌骨藤总苷对人胃癌细胞SGC-7901有显著的体外抑制作用,并能显著抑制小鼠人胃癌细胞SGC-7901、小鼠移植S180、小鼠移植P388肿瘤生长。结论乌骨藤总苷具有一定抗癌活性,有望开发成抗癌的中药有效部位新药。

乌骨藤总苷对肺腺癌NCI-H1299细胞糖酵解、凋亡和自噬作用的影响

目的探讨乌骨藤总苷通过Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(KRAS)对肺腺癌细胞糖酵解、凋亡和自噬的影响。方法体外培养NCI-H1299细胞,分为对照组、乌骨藤总苷低剂量组、乌骨藤总苷高剂量组、乌骨藤总苷+Vector组和乌骨藤总苷+KRAS组。对照组用正常培养基作用于细胞,乌骨藤低剂量组用终浓度为5 mg/ml的乌骨藤总苷作用于细胞,乌骨藤高剂量组用终浓度为20 mg/ml的乌骨藤总苷作用于细胞,乌骨藤总苷+Vector组先在细胞内转染入阴性对照载体,再用20 mg/ml的乌骨藤总苷作用于细胞,乌骨藤总苷+KRAS组转染入KRAS过表达载体后,用20 mg/ml的乌骨藤总苷作用于细胞。用qRT-PCR法检测各组细胞中KRAS mRNA的表达情况,用Western blot法检测各组细胞中KRAS蛋白的表达情况,用MTT法检测细胞增殖抑制率,用试剂盒检测各组细胞葡萄糖消耗量和乳酸含量,用流式细胞术检测细胞凋亡率,用Western blot法检测各组细胞中凋亡和自噬相关蛋白的表达水平。结果乌骨藤总苷低剂量组和乌骨藤总苷高剂量组KRAS表达水平、葡萄糖消耗量、乳酸含量、Bcl-2蛋白水平低于对照组,细胞增殖抑制率和凋亡率、LC3-Ⅱ/Ⅰ、beclin-1蛋白和Bax蛋白水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。乌骨藤总苷+KRAS组细胞中KRAS水平、葡萄糖消耗量和乳酸含量、Bcl-2蛋白表达水平均高于乌骨藤总苷+Vector组,差异有统计学意义(P<0.05)。乌骨藤总苷+KRAS组细胞增殖抑制、细胞凋亡率、LC3-Ⅱ/Ⅰ、Bax蛋白和beclin-1蛋白水平低于乌骨藤总苷+Vector组,差异有统计学意义(P<0.05)。乌骨藤总苷高剂量组和乌骨藤总苷+Vector的各项指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论乌骨藤总苷可以通过抑制KRAS的表达,抑制肺腺癌细胞的糖酵解过程,促进肺腺癌细胞凋亡和自噬,从而对肺腺癌细胞起到抑制作用。

乌骨藤总苷H中C_(21)甾体苷的测定

目的建立乌骨藤总苷H中C21甾体苷的测定方法。方法采用茴香醛硫酸显色比色法测定乌骨藤总苷H中C21甾体苷的量。结果选定检测波长432 nm;通光藤苷B在5.05～65.65μg/mL与吸光度呈良好线性关系,回归方程Y=0.012 9 X+0.017 8,R2=0.999 3;平均回收率为99.3%,RSD为2.16%。结论该方法简便、灵敏、准确、重现性好,可用于乌骨藤总苷H中C21甾体苷的测定和质量控制。

乌骨藤总皂苷对对乙酰氨基酚诱导的小鼠肝损伤的保护作用

目的:探讨乌骨藤总皂苷(saponins of Marsdenia Tenacissima,SMT)对小鼠急性肝损伤的保护作用及可能机制。方法:建立对乙酰氨基酚(APAP)诱导的小鼠急性肝损伤模型,分为正常组、模型组、SMT给药组(15,30和60 mg·kg-1),紫外-分光光度法检测各组血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性以及肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,HE染色法观察肝脏病理学改变。结果:与模型组比较,SMT(30和60 mg·kg-1)灌胃给药能明显降低血清中升高的ALT,AST活性,同时发现SMT可降低肝组织匀浆中升高的MDA和SOD水平。SMT可明显改善肝组织坏死范围和程度,减少炎细胞浸润。结论:SMT对APAP所致急性肝损伤小鼠具有一定的保护作用,其机制可能与SMT抗氧化作用等有关。

乌骨藤总皂苷对四氯化碳诱导的雄性大鼠肝纤维化的保护作用

目的:探讨乌骨藤总皂苷(the Saponins of Marsdenia Tenacissima,SMT)对四氯化碳(CCl_4)诱导的大鼠肝纤维化的保护作用及可能机制。方法:将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、SMT给药组(10,20和40 mg·kg^(-1))和秋水仙碱阳性药(0.1 mg·kg^(-1))对照组。通过对大鼠皮下注射CCl_4制备肝纤维化模型,0.3 mL·100 g^(-1),每周2次,共12周。造模4周后给药组分别给予相应剂量的药物灌胃(ig)给药,正常组和模型组ig给予等剂量的0.9%NaCl溶液。12周后处死大鼠,测定肝脾指数;测定血清中HA,LN,CⅣ含量;制备肝脏匀浆,ELISA法测定SOD,GSH-Px活性及HyP,MDA含量;HE,Masson染色观察肝组织病理及胶原沉积变化;免疫组化法检测肝组织α-SMA蛋白表达;Western blot法检测肝组织TGF-β1,Smad7水平。结果:与模型组比较,SMT明显降低肝纤维化大鼠的肝脾指数及HA,LN,CⅣ水平,减少肝组织Hyp,MDA含量,提高SOD及GSH活性,减轻大鼠肝脏病理损伤程度,减少肝组织中α-SMA,TGF-β1的表达,升高Smad7的表达。结论:乌骨藤总皂苷对CCl_4诱导的实验性肝纤维化大鼠有显著的保护作用,其机制可能与抗氧化及抑制TGF-β1/Smad信号通路相关。

乌骨藤总皂苷抑制大鼠肝纤维化的分子机制研究

目的:研究从中药乌骨藤中提取总皂苷(saponins from marsdenia tenacissima,SMT)对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的肝纤维化模型大鼠的影响及作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、SMT低剂量组(10 mg·kg-1)和SMT高剂量组(40 mg·kg-1),每组15只。通过皮下注射CCl4制备大鼠肝纤维化模型,按0.3 m L·100 g-1,每周2次,共12周。造模4周后给药组开始灌胃(ig)给予相应剂量的SMT,同时正常对照组和模型组ig给予等量生理盐水。12周后处死大鼠,测定血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartic aminotransferase,AST)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽-过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层黏连蛋白(laminin,LN)和四型胶原(collagen IV,CⅣ)含量;HE染色观察实验大鼠肝组织病理,Masson染色观察肝脏胶原沉积变化;Western Blot法检测肝组织α-SMA,p-smad2,p-smad3,p-p38MAPK和p-PI3K的蛋白表达水平。结果:病理结果显示,正常组大鼠肝细胞排列整齐、呈放射状排布,可见完整的肝小叶结构和中央静脉,未见明显的炎性和坏死特征以及纤维组织增生;模型组大鼠肝可见明显的细胞变性、坏死和脂肪变性特征,Masson染色可见明显的胶原沉积和肝细胞疏松;SMT各剂量组的大鼠肝组织病理较模型组明显好转,肝细胞坏死及炎细胞浸润程度明显减轻,汇管区胶原沉积减少,尤其SMT高剂量组。血清学指标检测结果显示,与正常组比较,模型组大鼠的血清ALT,AST,HA,LN和CⅣ水平均明显升高(P<0.01);与模型组比较,SMT低剂量组和SMT高剂量组的ALT,AST,HA,LN和CⅣ水平均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。Western Blot实验结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肝组织的α-SMA,p-Smad2,p-Smad3,p-p38MAPK,p-PI3K的蛋白表达水平均显著升高(P<0.01);与模型组比较,SMT低剂量组和SMT高剂量组的α-SMA,p-Smad2,p-Smad3,p-p38MAPK,pPI3K蛋白表达水平均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:SMT对CCl4诱导的大鼠肝纤维化有明显的抑制作用,可减轻模型大鼠肝脏病理损伤程度、降低实验大鼠的血清ALT,AST,HA,LN和CⅣ水平和肝组织α-SMA蛋白的表达水平,机制可能与其调节肝TGF-β/smads,PI3K/Akt和有丝分裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号转导通路有关。本研究可为肝纤维化的预防和治疗提供新思路和一定的理论、实验基础。