乏氧诱导因子-1与肿瘤乏氧的研究进展

乏氧是实体肿瘤发展过程中的普遍现象,它能诱导肿瘤细胞发生一系列基因表达的改变以适应环境。乏氧诱导 因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)是其调控核心。一方面,HIF-1通过与靶基因启动子序列中的HRE结合调控其表达, 增加肿瘤新血管和红细胞生成、改变能量代谢途径等,以增加氧的利用率、减少氧的消耗,同时通过调控细胞周期调节蛋白、 凋亡相关基因的表达改变细胞周期、抑制细胞凋亡;另一方面,HIF-1的表达受多种基因产物的调控,如VHL,PTEN等。HIF-1 有多种生物学功能,如促进红细胞生成、肿瘤血管形成、促进肿瘤的转移和侵袭等。通过药物或基因治疗的方式抑制HIF-1的 活性是治疗肿瘤的一种新途径。

沉默乏氧诱导因子-1α和生存素基因联合X射线照射对乏氧细胞的体外抑瘤效应

为探讨RNA干扰(RNAinterference,RNAi)沉默乏氧诱导因子-1α(Hypoxia induced factor 1α,HIF-1α)和生存素(Survivin)基因联合X射线照射对乏氧人肝癌细胞SMMC-7721的体外抑瘤效应,利用双靶向HIF-1α和Survivin基因载体,采用阳离子脂质体介导法转染SMMC-7721细胞,经乏氧培养36h后,分别以RT-PCR和Western blot法检测HIF-1α和Survivin基因的mRNA及其蛋白表达,分别以四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞术检测细胞存活分数及细胞凋亡。结果表明,转染质粒pGenesil-Survivin-HIF的SMMC-7721细胞中,HIF-1α和Survivin基因mRNA表达水平与对照和阴性干扰组相比明显降低(p<0.05),也未检测到HIF-1α和Survivin蛋白的表达。单、双干扰联合放疗组存活分数较照射组明显降低(p<0.01),双干扰联合放疗组存活分数较其它组也明显降低(p<0.01)。单、双干扰联合放疗组凋亡细胞百分数较对照组明显升高(p<0.01),双干扰联合放疗组凋亡细胞百分数较其它组也明显升高(p<0.01)。结果提示,质粒pGenesil-Survivin-HIF可有效地干扰乏氧SMMC-7721细胞HIF-1α和Survivin基因的mRNA及其蛋白表达。双干扰联合放疗组对乏氧SMMC-7721细胞的体外抑瘤效应明显优于单干扰联合放疗组。

沉默乏氧诱导因子-1α和生存素基因联合放疗对裸鼠移植人肝癌的抑瘤效应

为探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)乏氧诱导因子-1α(Hypoxia induced factor1α,HIF-1α)和生存素(Survivin)基因联合X射线照射对裸鼠移植人肝癌细胞SMMC-7721的抑瘤效应,肿瘤局部注射脂质体包裹的靶向HIF-1α和/或Survivin基因的RNA干扰质粒后,接受5Gy X射线照射。观察各组裸鼠治疗后不同时间肿瘤体积和平均存活时间,以免疫组化染色法检测肿瘤组织Survivin、HIF-1α、增殖细胞核抗原(Proliferation cell nuclear antigen,PCNA)表达和肿瘤间质微血管密度,以TUNEL法检测肝癌细胞凋亡。结果表明,治疗开始后第9-21天,双干扰联合放疗组裸鼠肿瘤体积显著小于单干扰联合放疗组,且平均生存时间明显延长。治疗结束后1天,双干扰联合放疗组裸鼠肿瘤组织Survivin、HIF-1α、PCNA表达和肿瘤间质微血管密度明显低于对照组和放疗组,双干扰联合放疗组移植瘤凋亡细胞百分数较其它组明显升高。结果提示,双干扰联合放疗可有效地抑制裸鼠移植人肝癌细胞增殖和血管生成,促进细胞凋亡,其抑瘤效应明显优于放疗和单干扰联合放疗。

鼻咽癌组织中乏氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子的表达及其临床意义

目的研究乏氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在鼻咽癌组织中的表达情况,并分析其相关性及与患者预后的关系。方法运用免疫组化染色及评分方法检测56例鼻咽癌患者及18例鼻咽部慢性炎症患者鼻腔黏膜组织中HIF-1α、VEGF的表达差异,并进一步分析HIF-1α、VEGF表达水平与鼻咽癌患者临床病理指标之间的关系。结果免疫组化结果显示,在56例鼻咽癌患者中,HIF-1α蛋白表达阳性率为53.6%(30/56),其中"-"26例,"+"11例,"++"12例,"+++"7例;VEGF蛋白表达阳性率为67.9%(38/56),其中"-"18例,"+"17例,"++"13例,"+++"8例;在18例鼻咽部慢性炎症患者中,HIF-1α和VEGF表达阳性率分别为22.2%(4/18)和27.8%(5/18)。同时,在鼻咽癌患者中,HIF-1α、VEGF的表达均与患者年龄、性别、分化程度无相关性(P>0.05),而与临床分期、T分级、淋巴结转移具有相关性(P<0.05)。Spearman分析显示鼻咽癌组织中HIF-1α表达与VEGF表达呈正相关。结论鼻咽癌组织中存在HIF-1α及VEGF的高表达,HIF-1α及VEGF在鼻咽癌组织中的表达呈正相关,协同促进肿瘤新血管形成。

鼻咽癌DCE-MRI定量分析与乏氧诱导因子-1α表达的关系

目的探讨鼻咽癌动态对比增强磁共振扫描(DCE-MRI)参数与乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的相关性,并分析两者与鼻咽癌临床病理特征之间的关系。方法对62例鼻咽癌患者行DCE-MRI扫描,获取感兴趣区域的DCE-MRI参数,并在标记处行鼻咽镜活检,用免疫组化方法检测鼻咽癌组织中HIF-1α的表达水平,另检测20例鼻咽慢性炎性组织的HIF-1α表达用于对照;观察DCE-MRI曲线特征,并对DCE-MRI参数和HIF-1α表达情况以及两者与患者临床病理特征的相关性进行分析。结果鼻咽癌DCE-MRI参数中,增强剂流入肿瘤时间(T1 on set)和最大上升斜率(MS)在不同患者性别、年龄间差异无统计学意义(P>0.05),在T分期、N分期和临床分期间差异有统计学意义(P<0.05)。鼻咽癌组织和鼻咽慢性炎性组织中HIF-1α蛋白的阳性表达率分别为79.0%和0,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05);HIF-1α表达在不同患者年龄、N分期间差异有统计学意义(P<0.05),而在不同患者性别、T分期和临床分期间差异无统计学意义(P>0.05)。HIF-1α的阳性表达与T1 on set和曲线下面积有明显相关(回归系数分别为-1.817和0.014,P<0.05),而与MS和达峰时间无明显相关性(回归系数分别为0.005和1.009,P>0.05)。结论在鼻咽癌中,DCE-MRI相关参数与癌组织HIF-1α蛋白的阳性表达密切相关,且与鼻咽癌的临床病理特征密切相关。DCE-MRI技术的应用有助于评估鼻咽癌组织的乏氧状况,并在鼻咽癌的辅助诊断、临床分期及预后判断中有一定的临床价值。

乏氧诱导因子促进肿瘤侵袭转移的研究进展

肿瘤细胞在乏氧环境中会发生一系列生物学行为的改变,包括肿瘤侵袭性和转移能力的增加,其中乏氧诱导因子-1α(hypoxiainduciactor1α,HIF-1α)起关键作用。HIF-1α可作用于多个环节促进肿瘤转移。在细胞运动方面肝细胞生长因子(HGF)的受体c-Met在乏氧时增加,能促进细胞活动性并通过与肝细胞生长因子结合而增加细胞的侵袭性;基质降解方面肿瘤细胞侵袭转移能力与其产生或诱导MMPs的能力密切相关,HIF-1可引起MMPs的表达增加,进而促进恶性肿瘤的转移;细胞黏附方面HIF-1α可通过对肿瘤细胞黏附分子表达的影响而促进肿瘤转移;血管生成方面乏氧能引起VEGF表达的上调,在肿瘤发生早期向血管生成型转变过程中,HIF-1α介导了VEGF的上调;细胞凋亡方面HIF-1上调凋亡抑制因子Bcl-2,抑制凋亡,从而增强肿瘤转移力。HIF-1α亦可上调凋亡抑制因子p21,从而抑制凋亡使肿瘤恶性程度增加易于转移。对HIF-1α的研究可能是治疗肿瘤、减少恶性肿瘤转移的一种新途径。

靶向乏氧诱导因子-1α和生存素基因的RNA干扰腺病毒穿梭载体的构建

目的构建能同时干扰乏氧诱导因子-1α(hypoxia induced factor1α,HIF-1α)和生存素(survivin)基因表达的RNA干扰(RNA interference,RNAi)腺病毒穿梭载体,并检测其对人肝癌SMMC-7721细胞HIF-1α基因和生存素基因表达的干扰作用。方法根据GeneBank数据库中HIF-1α和生存素基因的cD-NA序列设计干扰序列,构建干扰HIF-1α和生存素基因的重组单基因干扰质粒pGenesil-HIF-1α和pGene-sil-survivin。酶切、测序鉴定正确后,干扰质粒经脂质体介导转染SMMC-7721细胞,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测HIF-1α和生存素基因的mRNA表达水平。将两个单基因干扰质粒的干扰序列和U6启动子序列切下并连入腺病毒穿梭载体pshuttle,构建双基因干扰载体pshuttle-Genesil-survivin-HIF-1α,并检测其对HIF-1α和生存素基因mRNA表达的干扰作用。结果测序和酶切鉴定结果显示,pGenesil-HIF-1α和pGenesil-survivin重组质粒构建正确。SMMC-7721细胞分别被pGenesil-HIF-1α和pGenesil-survivin转染48h后,HIF-1α和生存素基因mRNA水平与正常和阴性对照组相比明显降低。双基因干扰载体pshut-tle-Genesil-survivin-HIF-1α酶切鉴定所得片段大小与预期相符,转染该质粒48h后,SMMC-7721细胞中HIF-1α和生存素基因mRNA的表达明显降低。结论成功构建能同时干扰HIF-1α和生存素基因的腺病毒穿梭载体,可有效地同时抑制SMMC-7721细胞内HIF-1α和生存素基因mRNA的表达。

乏氧诱导因子-1α和生长分化因子-15与脂质运载蛋白-2在急性左心衰竭病程中表达的意义及对预后预测价值分析

目的 探讨乏氧诱导因子(HIF)-1α、生长分化因子(GDF)-15及脂质运载蛋白(LCN)-2在急性左心衰竭(ALHF)病程中表达的意义,并分析其对预后的预测价值.方法 回顾性分析2016年9月至2018年8月呼和浩特市第一医院心内科收治的90例ALHF患者的临床资料,设为观察组;另回顾性分析同期45名健康受试者的临床资料,设为对照组;对比两组性别、年龄、左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、氨基末端脑钠肽前体(NT-proBNP)及血清HIF-1α、GDF-15、LCN-2水平,并采用Pearson相关系数法分析ALHF患者HIF-1α、GDF-15、LCN-2与LVEF、LVEDD、NT-proBNP水平的相关性;根据ALHF患者1年内生存情况将其分为生存组和死亡组,对比两组血清HIF-1α、GDF-15、LCN-2水平,并通过绘制受试者工作特征曲线(ROC),评估HIF-1α、GDF-15、LCN-2水平对ALHF患者1年内发生不良结局的预测价值.结果观察组LVEF水平低于对照组[(49.62±8.30)%比(67.42±7.25)%,P<0.05],LVEDD、NT-proBNP水平高于对照组[(60.38±9.70)mm比(44.16±3.19)mm,(2130.55±312.47)ng/L比(125.84±14.02)ng/L,P<0.05];观察组血清HIF-1α、GDF-15、LCN-2水平高于对照组,差异均有统计学意义[(28.62±5.61)ng/L比(5.20±1.12)ng/L,(2352.60±344.36)ng/L比(1052.89±150.18)ng/L,(156.47±27.10)μg/L比(32.50±6.19)μg/L,P<0.05];HIF-1α、GDF-15、LCN-2与LVEF呈负相关(P<0.05);HIF-1α、GDF-15与LVEDD、NT-proBNP均呈正相关(P<0.05);LCN-2与NT-proBNP呈正相关(P<0.05),与LVEDD无相关性(P>0.05).ALHF出院1年内病死率为15.56%,死亡组血清HIF-1α、GDF-15、LCN-2水平高于生存组,差异均有统计学意义[(47.19±7.30)ng/L比(25.20±4.21)ng/L,(4562.50±534.28)ng/L比(1945.51±210.42)ng/L,(243.18±33.17)μg/L比(140.50±22.93)μg/L,P<0.05];HIF-1α、GDF-15、LCN-2预测ALHF患者1年内发生不良结局的最佳截断点分别为39.05 ng/L、4390.21 ng/L、206.80μg/L,敏感度分别为71.43%、57.14%、64.29%,特异度分别为88.16%、80.26%、75.00%,准确度分别为85.56%、76.67%、73.33%,AUC分别为0.750、0.706、0.648.结论 HIF-1α、GDF-15、LCN-2在ALHF患者中异常高表达,三者对评估ALHF预后有一定临床价值,可作为评估ALHF的参考指标.

乏氧诱导因子结构、表达及调控

乏氧诱导因子(HIF)是乏氧应答中起重要作用的转录因子,一直是乏氧研究的焦点.HIF由α亚基和β亚基组成,α亚基包括HIF-1α、HIF-2α和HIF-3α,其中α亚基因诱导条件不同通过选择性剪接产生不同变体.β亚基包括ARNT、ARNT2和ARNT3.α与β亚基在乏氧等应激反应时形成二聚体HIF启动靶基因转录表达,参与多种细胞生物学功能的调控.目前为止,大多数的研究都集中于野生型HIF-1α,对它的结构、表达调控及其调控做了相对全面而清楚的了解.后来通过多种策略及方法,陆续发现并克隆出了除HIF-1α外的HIF各亚基.研究不再局限于HIF-1α,而是扩展至HIF整个系统,如相继发现的HIF-2α和HIF-3α亚基,以及它们的变体,对HIF-1α的研究也更深入了,但是关于HIF-1α的变体、HIF-2α、HIF-3α及β亚基的表达调控及功能还不明确,是未来研究的方向.本文全面介绍HIF的最新研究进展,阐述HIF各亚基的结构、表达调控及其靶基因的表达情况.

乏氧诱导因子-1α、环氧化酶-2、HER-2在非小细胞肺癌中的表达

应用免疫组织化学技术检测47例非小细胞肺癌(NSCLC)中乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)、环氧化酶-2(COX-2)、HER-2的表达。结果HIF-1α、COX-2和HER-2在NSCLC中的表达分别为57.45%、57.45%和46.81%;HIF-1α阳性表达与HIF-1α阴性表达的NSCLC标本中COX-2的阳性表达率有统计学意义,而HER-2的阳性表达率则无统计学意义。NSCLC中HIF-1α蛋白的表达与COX-2表达存在相关性。

食管鳞癌组织中乏氧诱导因子-1α、血管内皮生长因子及微血管密度测定

目的探讨食管鳞癌组织中乏氧诱导因子(HIF)-1α的表达与血管生成的关系。方法采用免疫组织化学SP技术检测46例食管鳞癌及26例癌旁正常组织中HIF-1α、血管内皮细胞生长因子(VEGF)蛋白的表达,用CD34抗体标记肿瘤组织血管内皮细胞,计算微血管密度(MVD)。结果食管鳞癌组织中HIF-1α、VEGF的阳性率分别为41.31%(19/46)、58.70%(27/46),MVD为46.12±7.64;均高于癌旁正常组织(P<0.05)。HIF-1α、VEGF的表达与食管鳞癌组织学分级和TNM分期无关(P>0.05),与淋巴结转移及浸润深度有关(P<0.05)。食管鳞癌组织中HIF-1α的表达与VEGF表达及MVD均呈正相关(P<0.05)。结论HIF-1α与食管癌新生血管形成有关。

食管鳞状细胞癌组织中乏氧诱导因子-1α蛋白和mRNA的表达

目的:探讨食管鳞癌组织中乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及其临床意义。方法:分别采用免疫组化及RT-PCR技术检测46例食管鳞癌组织和46例正常食管黏膜组织中HIF-1α蛋白及mRNA的表达情况,并分析2者的表达与食管鳞癌患者临床病理特征的关系。结果:食管鳞癌组织中HIF-1α蛋白阳性染色主要位于癌细胞胞质/核内,阳性率为41.3%(19/46),而正常食管黏膜组织中均呈阴性表达。食管鳞癌组织中HIF-1αmRNA的表达水平(1.17±0.25)高于正常食管黏膜组织(0.35±0.12)(t=13.942,P<0.001)。46例食管鳞癌组织中HIF-1αmRNA高表达(高于癌组织中的平均水平)者为24例(52.2%)。食管鳞癌组织中HIF-1αmRNA表达水平与HIF-1α蛋白表达阳性率呈正关联(rP=0.474,P<0.01)。食管鳞癌组织中HIF-1α蛋白的表达与肿瘤的浸润深度(χ2=6.624,P=0.010)和淋巴结转移有关(χ2=7.404,P=0.007),HIF-1αmRNA表达水平与肿瘤的组织学分级(χ2=0.321,P=0.571)、淋巴结转移(χ2=0.708,P=0.400)、浸润深度(χ2=2.333,P=0.127)及临床分期(χ2=0.067,P=0.800)均无关。结论:食管鳞癌组织中HIF-1α在蛋白水平的表达对临床更具有指导意义。

乏氧诱导因子-1α在鼻咽癌细胞表达及其与预后的关系

目的：观察乏氧诱导因子-1α（ HIF-1α）在鼻咽癌细胞中的表达情况及其与预后的关系。方法通过治疗前检测200例鼻咽癌患者HIF-1α的表达情况,并分析阳性、阴性表达组治疗疗效来研究其与鼻咽癌预后的关系。结果200例鼻咽癌患者中 HIF-1α表达阳性者151例（75.5%）,表达阴性者49例（24．5%）。Ⅰ、Ⅱ期表达阴性、阳性患者的疗效比较差异无统计学意义。Ⅲ~Ⅳa期患者表达阳性者的完全缓解率（85.9%、80.4%）低于表达阴性者（91.7%、84.6%）,差异有统计学意义（ P=0.032, P=0．041）,2年局控率表达阳性者（74.6%、69.6%）低于表达阴性者（87.5%、76.9%）,差异有统计学意义（P=0.021、P=0.035）,2年生存率表达阳性者（84.5%、76.1%）低于表达阴性患者（95.8%、84.6%）,差异有统计学意义（ P=0．037、P=0.042）。结论大部分鼻咽癌患者呈现HIF-1α表达阳性,对于Ⅲ~Ⅳa期患者HIF-1α表达阳性与不良预后相关。

恩度联合放射治疗对Lewis肺癌小鼠生长以及碳酸酐酶Ⅸ和乏氧诱导因子表达的影响

目的研究使用抗血管生成药物联合放射治疗的荷瘤小鼠肿瘤组织中碳酸酐酶Ⅸ（CAIX）和乏氧诱导因子-1a（HIF-1a）mRNA的表达变化，并对组织基因表达变化的可能机制进行探讨。方法建立Lewis肺癌模型，将32只成瘤小鼠随机分为对照组（Control组）、恩度组（ES组）、放射治疗组（RT组）和恩度联合放疗组（ES＋RT组），从治疗当天开始，隔日测量肿瘤体积，绘制肿瘤生长曲线。治疗结束后剥离瘤体，使用Real—timePCR方法对各处理组肿瘤组织中CAIX及HIF—lctmRNA的表达情况进行检测。结果从肿瘤生长曲线可以看出：ES＋RT组与其余三组比较差异有统计学意义（P〈0．05），说明联合组抑瘤效果最好。以对照组为参照，ES组、RT组、ES＋RT组CAIXmRNA的扩增倍数均下降，差异均有统计学意义（P〈0．05），ES＋RT组下降最明显。以对照组为参照，ES组、RT组、ES＋RT组的HIF—1a mRNA扩增倍数均下降，RT组、ES＋RT组具有统计学意义（P〈0．05），ES组差异并无统计学意义（P〉0．05）。HIF-1a mRNA与CAIXmRNA表达呈正相关（r=0．68，P〈0．01）。结论恩度联合放疗显著抑制Lewis肺癌小鼠肿瘤的生长；同时能够改善肿瘤乏氧状况，抑制HIF-1a和CAIXmRNA的表达，可能是放疗增敏作用的机制之一。

肿瘤组织~99Tc^m-EC-甲硝唑显像与乏氧诱导因子-1α表达水平的相关性研究

目的探讨肿瘤组织^(99)Tc^m-双半胱氨酸(EC)-甲硝唑 SPECT 显像与乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达水平的相关性。方法建立昆明小鼠 S180肉瘤肿瘤模型12个,对其进行^(99)Tc^m-EC-甲硝唑 SPECT 乏氧显像,测定其肿瘤/对侧肌肉放射性比值(T/M)。显像结束后即刻断颈处死小鼠,取出瘤体,用免疫组织化学法分别测定肿瘤组织 HIF-1α及其调控的下游基因血管内皮生长因子(VEGF)表达水平。结果 12只荷 S180肉瘤昆明小鼠注射^(99)Tc^m-EC-甲硝唑后3 h SPECT 显像的 T/M 为1.93～4.46(中位值3.13)。免疫组织化学结果显示表达 HIF-1α的细胞占31.2%～60.8%(中位值50.4%),与 T/M 呈直线相关(t=2.732,r=0.654,P=0.021);表达 VEGF 的细胞占33.8%～57.5%(中位值53.1%),与 HIF-1α表达细胞亦呈直线相关(t=3.011,r=0.690,P=0.0131)。结论肿瘤组织^(99)Tc^m-EC-甲硝唑 SPECT 显像与其 HIF-1α的表达水平呈线性相关,两者结合能较可靠地反映肿瘤组织的乏氧状况。

乏氧诱导因子相关研究进展

肿瘤细胞的放化疗敏感性除了与肿瘤细胞的类型、恶性程度等有关外,还与肿瘤细胞的供氧及代谢状况有关。实体肿瘤在其生长过程中会产生一定程度的乏氧区域,肿瘤乏氧的存在可导致其侵袭性增强,同时可诱导肿瘤对化放疗产生抗拒,临床研究也显示高度乏氧肿瘤患者的局控率和远期生存率也较低。已有大量研究证实,肿瘤细胞的供血、供氧越好,代谢越旺盛,对放射线越敏感;反之,供血、

分化型甲状腺癌手术联合^(131)Ⅰ清甲治疗后复发与乏氧诱导因子-lα表达的关系

目的:研究分化型甲状腺癌手术联合131I清除剩余甲状腺(清甲)治疗后复发与乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的相关性,探讨HIF-1α对治疗后复发的可能机制。方法:依据甲状腺球蛋白(Tg)、甲状腺球蛋白抗体(TgAb)、B超、X线及全身131I显像的复发判定标准,观察分析173例分化型甲状腺癌手术联合131I清甲治疗成功后3年复发率,将复发病例作为复发组;随机选取相同数量未复发病例作为无复发组。采用免疫组织化学法和RT-PCR技术检测复发组和无复发组患者癌组织中HIF-1α阳性细胞率和HIF-1α基因表达水平。结果:分化型甲状腺癌手术联合131I清甲治疗成功后3年内复发率为5.20%(9/173)。其中乳头状癌复发率为4.90%(5/102),滤泡状癌复发率为5.63%(4/71),2组间比较差异无显著性(P>0.05)。复发组乳头状癌和滤泡状癌组织HIF-1α阳性细胞率和HIF-1α基因表达水平明显高于无复发组(P<0.05)。结论:分化型甲状腺癌手术联合131I清甲治疗成功后仍有少数患者复发,其机制之一可能与癌组织中HIF-1α表达水平明显增高有关。

乏氧诱导因子-1α基因沉默对肺癌细胞乏氧应答相关基因表达的影响

乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)是肿瘤细胞适应乏氧微环境的关键调控因子,具有作为治疗靶基因的潜力,以克服乏氧诱导的治疗抗拒等效应.下调其表达可能影响肿瘤细胞内一系列乏氧应答相关基因的表达.本研究采用已构建的HIF-1αRNAi慢病毒载体转导肺腺癌A549细胞,经杀稻瘟素(blasticidin)筛选建立HIF-1α基因稳定沉默的A549细胞株.应用cDNA微阵列技术检测并比较HIF-1α基因沉默A549细胞株和其亲本细胞株在常氧和乏氧状态下的基因表达谱改变.应用定量RT-PCR方法验证部分cDNA芯片差异表达基因的表达改变.HIF-1α基因稳定沉默细胞株A549/HIF-1α(-),在常氧和乏氧条件下HIF-1α mRNA水平分别较A549细胞下降89.2%和88.1%,HIF-1α蛋白水平分别下降97.2%和88.4%.在乏氧条件下,cDNA微阵列检测的1280个基因中,52个基因表达上调,15个基因表达下调.HIF-1α基因沉默显著影响其中27个基因的乏氧诱导效应.定量RT-PCR验证其中ENO2、BCL-2、CXCR4和MMP11的表达水平,与cDNA芯片结果相符合.结果提示,HIF-1α基因沉默能够在一定程度上阻断肺癌细胞的乏氧应答,在克服乏氧导致的肺癌治疗抗拒方面具有潜力.

脑胶质瘤组织中靶向乏氧诱导因子-1α shRNA表达载体的构建与鉴定

构建人乏氧诱导因子-1α短发卡RNA(shRNA)表达质粒,为小干扰RNA(siRNA)治疗脑胶质瘤奠定基础。依据靶基因序列设计两对siRNA,3′段加入终止信号TTTTTT,两端分别加入限制性内切酶A paI和I-corR I的酶切位点,并加入环状结构(loop),形成shRNA,建立shRNA表达质粒,测序鉴定。认为构建的shRNA表达质粒经酶切、测序分析克隆成功,序列完全正确。为研究siRNA抑制H IF-1α的表达,探讨脑胶质瘤的发病机制和基因治疗奠定了基础。

乏氧诱导因子-1α在口腔鳞状细胞癌颈淋巴转移中的作用

目的:探讨乏氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)蛋白表达在口腔鳞状细胞癌颈淋巴转移中的作用及其在判断预后方面的意义。方法:1993年6月至2010年5月在北京大学口腔医院住院并接受手术治疗的原发口腔鳞状细胞癌患者125例纳入本次研究,收集所有患者的临床病理学资料,制作组织病理切片,应用免疫组织化学方法检测HIF-1α蛋白的表达情况,根据表达情况分为高表达组和低表达组,主要评估指标为颈淋巴转移率和癌相关生存率(disease-specific survival,DSS)。颈淋巴转移率与各项临床病理学参数的关系比较采用秩和检验,组间及组内癌相关生存率的差异性比较采用Kaplan-Meier分析,并应用COX多因素生存分析对DSS的独立预测因子进行统计分析。所有统计学分析均采用SPSS 17.0软件包完成。结果:随访截止日期为2013年6月1日,生存患者的中位随访时间为73个月,有75例HIF-1α高表达,48例HIF-1α低表达,2例无法评估。秩和检验分析发现,HIF-1α高表达组淋巴转移率显著高于HIF-1α低表达组(58.7%vs.37.5%,P=0.027)。Kaplan-Meier生存分析发现,HIF-1α低表达组患者无病生存率显著高于高表达组(60.4%vs.36.0%,P=0.009),癌相关生存率显著高于高表达组(70.8%vs.46.7%,P=0.005)。多因素生存分析表明,HIF-1α表达(HR=2.164,95%CI:1.150~4.074,P=0.017)和T分期(HR=1.387,95%CI:1.066~1.804,P=0.015)均是判断口腔鳞状细胞癌患者预后的独立预测因子。结论:HIF-1α蛋白表达是预测口腔鳞状细胞癌预后的独立因子,且与颈淋巴转移显著相关,能够作为口腔鳞状细胞癌潜在的分子诊断标志物和靶向治疗靶点。