重组抗肿瘤抗病毒蛋白乐复能质控方法与质量标准的建立

目的:建立重组抗肿瘤抗病毒蛋白乐复能(novaferon)的质控方法和质量标准。方法:以WST-1染色法检测Daudi细胞增殖,测定乐复能的抗肿瘤细胞增殖活性;以WISH细胞病变抑制法测定乐复能抗病毒活性;乐复能以胰蛋白酶酶切后,用HPLC分析肽图;其余检测项目按《中华人民共和国药典》(三部)2005年版的规定进行。结果:3批乐复能原液和成品的抗肿瘤比活性均≥2.0×106U/mg、抗病毒比活性均≥1.0×109IU/mg。3批乐复原液的HPLC肽图与参考品一致,乐复原液的蛋白含量、纯度、分子质量、等电点、末端氨基酸序列等指标及成品的细菌内毒素、苯甲酸含量、乙腈残留量等指标均符合规定。根据检定结果建立了乐复能的质量标准。结论:建立的质控方法和质量标准可以保证乐复能的安全、有效和质量可控,可用于乐复能的常规检定。

乐复能对溃疡性结肠炎小鼠疗效及其对小鼠结肠黏膜内TNF-α表达的影响

目的:观察乐复能对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的实验性溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠模型的治疗作用及其对小鼠结肠黏膜中肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor alpha,TNF-α)表达的影响,了解乐复能对UC的治疗作用及可能的机制。方法:70只Balb/C雌性小鼠,8周龄左右,体质量18~22 g/只,清洁级。随机分为7组,分别为正常组、模型组、美沙拉嗪治疗组、泼尼松治疗组以及乐复能低、中、高剂量组,每组10只。采用4%DSS水溶液自由饮用的造模方法制作UC小鼠模型。造模第8天,各组同时分别给予对照剂与实验药物,实验第14天处死小鼠,游离并取出全段结肠,测量回盲部至肛门的长度,记录小鼠疾病活动指数(disease activity index,DAI)、结肠长度、组织学损伤评分、结肠黏膜组织中TNF-α的表达。结果:1)使用DSS的各干预组小鼠均不同程度地出现腹泻、黏液便、大便隐血阳性或血便等症状,随天数增加,小鼠DAI积分逐渐增高。美沙拉嗪、泼尼松、乐复能均能改善小鼠的一般状况,降低小鼠的DAI评分,减轻结肠长度缩短情况,降低组织学损伤评分。2)乐复能低、中、高剂量组,美沙拉嗪组及泼尼松组DAI积分与模型组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01);美沙拉嗪组、泼尼松组与乐复能低剂量组之间比较,差异均无统计学意义(均P>0.05),乐复能中、高剂量组治疗效果明显好于美沙拉嗪组、泼尼松组与乐复能低剂量组(均P<0.01),且乐复能治疗效果呈剂量依赖性,乐复能高剂量组好于乐复能中剂量组(P<0.01)。3)乐复能低、中、高剂量组、泼尼松组、美沙拉嗪组黏膜缺损相对较轻,小部分腺体不完整,炎症细胞较少,与模型组比较,差异有统计学意义(均P<0.01);乐复能高剂量组与乐复能低、中剂量组,美沙拉嗪组与泼尼松组比较,组织损伤明显减轻,组织学评分显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);但在乐复能低、中剂量组,美沙拉嗪组和泼尼松组之间差异均无统计学意义(均P>0.05)。4)乐复能低、中、高剂量组,美沙拉嗪及泼尼松处理组TNF-α的表达明显下调,与模型组相比较,差异均有统计学意义(均P<0.01);美沙拉嗪组与泼尼松组比较,TNF-α表达差异无统计学意义(P>0.05),乐复能低、中、高剂量组之间TNF-α的表达随着剂量增加而减少,所有乐复能治疗组TNF-α的表达均明显低于其它治疗组(均P<0.01)。结论:乐复能能明显改善DSS诱导的UC小鼠DAI评分、小鼠结肠黏膜损伤情况及炎症评分,下调小鼠结肠黏膜组组织内TNF-α的表达,其结果优于美沙拉嗪与泼尼松,且乐复能的作用呈剂量依赖性。

乐复能对LPS介导的健康人外周血单核细胞分泌TNF-α的影响及其机制

目的:探讨乐复能在体外对LPS介导的健康人外周血单核细胞分泌TNF-α及NF-κB mRNA表达的影响,以期为乐复能治疗克罗恩病等免疫性疾病提供理论依据。方法:分离30例健康人外周血单核细胞并进行体外培养,分别按以下5种方法 (5组)进行体外实验:A组为空白对照组;B组为单纯LPS刺激组;C组为LPS与乐复能同时加入组;D组为先加入LPS刺激,后加入乐复能组;E组为先加入乐复能,后加入LPS刺激组。干预后用ELISA法检测培养液内TNF-α浓度,然后采用RT-PCR方法检测单核细胞内NF-κB mRNA表达情况。结果:基础状态下,体外培养的健康人单核细胞分泌少量TNF-α[(470.23±35.24)pg/mL)],加入LPS刺激后,TNF-α的分泌明显增加[(1446.76±72.36)pg/mL)],在LPS刺激后再加入乐复能,TNF-α的分泌明显减少[(1446.76±72.36)pg/mL vs(946.46±46.12)pg/mL,P<0.01],下降约29.7%。而乐复能在LPS刺激前或与LPS同时加入培养细胞内时,对TNF-α分泌无影响[(1446.76±72.36)pg/mL vs(1275.62±87.75)pg/mL,P>0.05;(1446.76±72.36)pg/mL vs(1383.62±86.96)pg/mL,P>0.05]。乐复能明显下调经LPS诱导的单核细胞内NF-κB mRNA表达(0.2829±0.0365 vs 0.4994±0.0604,P<0.01),而对于未提前接受LPS刺激的单核细胞,乐复能对其NF-κBmRNA表达无影响(0.4716±0.0616vs0.4994±0.0604,P>0.05;0.4767±0.0600vs 0.4994±0.0604,P>0.05)。结论:乐复能在体外能抑制LPS介导的健康人外周血单核细胞分泌TNF-α,具有调节单核细胞免疫功能的作用,其抑制TNF-α分泌功能可能与其下调单核细胞内NF-κB表达有关。

乐复能对克罗恩病的免疫调节作用及临床疗效

目的观察乐复能对克罗恩病的临床疗效以及免疫调节作用。方法收集2013年1月至2015年3月黄石市中心医院消化内科诊治的克罗恩病患者76例,使用数字法随机分为观察组和对照组,每组38例。流式细胞仪检测Th17和Treg细胞;ELISA法检测IL-17、IL-10和IL-6的表达;比较两组患者的临床疗效、复发率和不良反应。结果两组患者治疗前Th17和Treg细胞比例以及IL-17、IL-10、IL-6表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05),治疗后观察组在Th17细胞、IL-17和IL-6的降低方面以及Treg和IL-10的升高方面优于对照组(P<0.05)。观察组临床治疗有效率为92.1%,显著高于对照组的73.7%(P<0.05)。观察组复发率为7.9%,显著低于对照组的23.7%(P<0.05)。观察组临床不良反应发生率为10.5%,显著低于对照组的31.6%(P<0.05)。结论乐复能可以改善克罗恩病患者Th17、Treg细胞以及IL-17、IL-10因子失衡,临床疗效显著,使用安全,具有一定的临床应用价值。

乐复能对慢乙型肝炎患者HBsAg的有效性和安全性研究

目的:慢性乙型肝炎(CHB)是导致肝硬化、肝癌的主要病因之一,CHB患者HBsAg的清除可显著降低肝硬化、肝癌的发生率。我们通过重组细胞因子基因衍生蛋白注射液(乐复能)联合核苷酸类药物治疗非活动性乙型肝炎表面抗原携带者(IHC)和经治HBsAg<1500 IU/mL患者,评估乐复能对HBsAg清除的有效性和安全性,探索CHB临床治愈性的可能性。方法:对符合入组标准的46例CHB患者予乐复能联合核苷类酸类治疗24周(研究组),治疗结束停药后随访24周,同时设立18名ICH患者作为对照组观察48周。期间每12周监测HBsAg水平及相关的临床不良反应情况。结果:在接受联合乐复能治疗的46名患者中,有4名患者发生HBsAg消失(8.7%),观察期间,对照组未患者出现HBsAg清除病例,两组间比较没有显著性差异。在24周时,研究组的HBsAg较基线水平显著降低(P<0.05),与对照组比较也呈显著性下降(P<0.05),在48周结束时,研究组HBsAg水平有一定反弹,与对照组比较不具显著性差异。观察期间,研究组患者对乐复能耐受性良好,无严重不良反应。结论:乐复能联合核苷类酸类药治疗CHB患者方案,可显著降低HBsAg水平,实现部分患者CHB临床治愈。研究期间未发生严重不良事件,药物耐受性良好。

重组细胞因子基因衍生蛋白注射液(乐复能)治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的疗效和安全性

目的观察重组细胞因子基因衍生蛋白注射液(乐复能)治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎(CHB)患者的有效性及安全性。方法前瞻性收集2010年6月1日至2011年9月6日中南大学湘雅医院、中南大学湘雅二医院、中南大学湘雅三医院和湖南中医药大学第一附属医院收治的HBeAg阳性CHB患者360例。按照1∶1比例随机分为实验组(n=180)和对照组(n=180),实验组患者予乐复能,对照组患者予人干扰素α-2b,双盲治疗12周后进入开放标签阶段,在患者自愿基础上,实验组患者继续使用乐复能,对照组患者转向使用乐复能,治疗12周后停药随访12周和52周。治疗和随访阶段检查血常规、肝功能、HBV DNA等指标,分析乐复能治疗HBeAg阳性CHB患者的有效性。采用SAS 9.1.3对数据进行统计分析。结果双盲治疗12周后,实验组和对照组的HBeAg血清转阴率分别为27.11%和16.17%,差异具有统计学意义(χ^2=5.98,P<0.05),实验组的HBeAg血清学转换率、丙氨酸转氨酶(ALT)复常率,HBV DNA转阴率均高于对照组,但差异均无统计学意义(P>0.05)。进入开放标签阶段和随访阶段,实验组的HBeAg血清转阴率、HBeAg血清学转换率、HBV DNA转阴率及ALT复常率均继续升高。不良反应事件监测中,实验组患者的头痛、乏力发生率均低于对照组(P<0.05),其余与药物相关的重度不良事件在两组的差异无统计学意义(P>0.05)。结论乐复能可更好地促进CHB患者HBeAg转阴及血清学转换。乐复能治疗HBeAg阳性的CHB患者安全、有效。

慢性乙型肝炎优化治疗策略对公共卫生管理绩效的影响

目的:通过优化HBeAg阳性CHB患者治疗策略,为提高公共卫生管理绩效提供临床依据。方法:选取广东省第二中医院2020年10月至2022年12月诊治的HBeAg阳性慢性乙型肝炎(CHB)患者110例为研究对象,按随机数表法分为对照组和标准治疗组、隔日治疗组和隔2日治疗组。在对照组的基础上,标准治疗组联合重组细胞因子基因衍生蛋白注射液(乐复能)按说明书方案给药(1次10μg,每日1次,连用12周后改为隔日1次,1周3次);隔日治疗组联合乐复能按隔日1次的方案给药(1次10μg,隔日1次);隔2日治疗组联合乐复能按隔2日1次的方案给药(1次10μg,隔2日1次),疗程均为24周。比较治疗前后血清HBeAg水平变化。结果:治疗组较对照组均有更高的HBeAg转阴率;标准治疗组与隔日治疗组间无显著差异,但均优于隔2日治疗组;隔日治疗组有更好的卫生经济学效应。结论:对HBeAg阳性CHB进行乐复能隔日治疗对提高公共卫生管理绩效、改善HBeAg阳性CHB患者的健康结局较标准疗法和隔2日疗法具有更优的卫生经济学效应。

重组高效抗肿瘤抗病毒蛋白注射液治疗经标准治疗失败的转移性结直肠癌的临床研究

目的观察重组高效抗肿瘤抗病毒蛋白注射液(乐复能)单药治疗经标准治疗失败的转移性结直肠癌(mCRC)的疗效、不良反应及其对受试者免疫功能的影响,并在此基础上进行剂量效应的探索研究。方法 2011年5月至2012年12月入组105例受试者接受乐复能注射液或安慰剂肌肉注射。根据治疗方式及最终维持治疗剂量的不同,分为安慰剂组15例(生理盐水)、低剂量乐复能治疗组69例(<40μg/次,3次/周)和高剂量乐复能治疗组21例(40μg/次,3次/周)。采用流式细胞术检测57例患者外周血NK细胞和调节性T细胞(Treg细胞)在乐复能治疗前后水平的变化。结果治疗6周后,高剂量乐复能组的疾病控制率为47.4%,优于安慰剂组的21.4%,差异有统计学意义(P<0.05);乐复能的主要不良反应为"流感样"症状、骨髓抑制、肝功能异常、消化道反应等,不良反应程度均较轻,停药或对症处理后均可恢复;与治疗前相比,高剂量乐复能组受试者治疗后NK细胞水平显著升高,Treg细胞水平显著下降(P<0.05)。结论乐复能治疗转移性结直肠癌具有一定疗效,不良反应可耐受,患者免疫抑制状态改善,生活质量提高。

重组抗肿瘤抗病毒蛋白的三维结构预测及其与受体的相互作用分析

目的:利用计算机模拟的方法分析重组抗肿瘤抗病毒蛋白(乐复能)的抗病毒及抗肿瘤活性优于普通干扰素(IFNα-2b)的机制。方法:通过对乐复能、乐复能与干扰素受体形成复合物的结构预测,分析乐复能与其受体的相互作用。结果:与IFNα-2b相比较,乐复能和受体IFNR1的相互作用力有了明显的提高,结合更加紧密。结论:计算机模拟的方法可以有效地应用于尚无晶体信息的蛋白类药物及其与受体相互作用的结构预测。

标准治疗失败的晚期结直肠癌患者采用重组抗肿瘤抗病毒蛋白注射液联合化疗的临床观察

目的探讨重组高效抗肿瘤抗病毒蛋白注射液(商品名:乐复能)联合常规化疗药物对在标准治疗失败的晚期转移性结直肠癌患者治疗的安全性和有效性。方法对13例经单药乐复能治疗后疾病进展但经研究判断存在获益的晚期结直肠癌患者,联合常规化疗药物治疗,观察用药后的近期疗效、生活质量和不良反应。结果可评价疗效的12例患者中,治疗2个周期以上获部分缓解(PR)2例,疾病稳定(SD)6例,疾病进展(PD)4例。3例生活质量(QOL)改善,6例QOL稳定,3例下降。主要不良反应为流感样症状、乏力、消化道反应和血液学毒性等,患者均可以耐受。结论乐复能联合常规化疗药物治疗晚期转移性结直肠癌有一定疗效且不良反应轻。