不同浓度乙醇制作大鼠角膜上皮瓣的安全性及其组织病理学研究

目的探讨不同浓度乙醇浸润制作角膜上皮瓣的安全性及组织病理学基础。方法以30只近交系Wistar大鼠为研究对象,予15%、20%、30%、40%四种不同浓度的乙醇分别在大鼠角膜中央浸润1 min,予20%乙醇在大鼠角膜中央分别浸润30 s1、min、2 min,观察角膜各层的组织病理学改变情况。并以20%乙醇浸润1 min,制作角膜上皮瓣,对上皮瓣和去上皮角膜进行HE和PAS染色,用光镜和透射电镜观察。结果①不同浓度乙醇处理角膜1 min:15%乙醇对角膜各层细胞形态未产生明显的影响;随浓度的增加,20%乙醇引起表层角膜上皮细胞核浓缩及细胞间连接疏松,此变化3 d后即恢复;30%乙醇产生翼状细胞层核固缩,角膜上皮细胞间和上皮下有大泡,局限性上皮基底膜被破坏;40%乙醇引起角膜上皮细胞核固缩,累及基底细胞,并可见上皮细胞膜被破坏,上皮广泛与基质分离,但基质和内皮未见明显改变。②20%乙醇浸润角膜30 s对各层细胞形态无明显影响,2 min则可见上皮细胞间积水,翼状细胞层细胞核固缩,上皮基底膜被局限性破坏,基质和内皮无明显改变。③20%乙醇处理1 min制作的上皮瓣,见到完整的上皮细胞层以及和上皮相连的前部基底膜,剩余角膜基质和内皮无形态改变,电镜观察可见后部基底膜完整地保留在角膜基质前表面。结论①乙醇对角膜的损伤作用呈浓度时间依赖性,低浓度短时间浸润仅对表层即将脱落的上皮造成轻度损伤,并易于愈合,可用于上皮瓣的制作。②上皮瓣与角膜分离的部位可能位于上皮下基底膜。

Effect and mechanism of β-L-D4A on DNA polymerase α

AIM： To investigate the safety of β-L-D4A on DNA polymerase α.METHODS： Ion exchange chromatography was used to separate DNA polymerase cc from crude extract of human Hela cells. Detailed kinetic parameters were determined for β-L-D4A against DNA polymeraseα . RESULTS： DNA polymerase was purified with 4% yield and 31000 units/mg specific activity. The Michaelis constant （Km = 3.22 i^mol/L）, 50% inhibition concentration （IC50 = 178.49 μmol/L） and inhibition constant （Ki = 126 mol/L） of β-L-D4A were determined by kinetic analysis. CONCLUSION： β-L-D4A is a more safe nucleoside for hepatitis B virus （HBV） infection with a lower host toxicity.