胶体金免疫层析法在产碳青霉烯酶肠杆菌目细菌检测中的应用评价

目的评估胶体金免疫层析法在产碳青霉烯酶肠杆菌目细菌(CPE)中的应用价值。方法收集福建医科大学附属第一医院分离的65株肠杆菌目细菌,包括41株碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(CRE)和24株非CRE菌株。采用PCR法检测5种碳青霉烯类耐药基因(bla_(KPC)、bla_(IMP)、bla_(VIM)、bla_(OXA-48-like)、bla_(NDM)),改良碳青霉烯类失活法(mCIM)与EDTA碳青霉烯类失活法(eCIM)以及胶体金免疫层析法检测碳青霉烯酶并分型,以PCR结果为参考,评估各方法的检测性能;挑取其中29株CRE与24株非CRE构建模拟阳性血培养瓶,报阳后以胶体金免疫层析法进行分型检测并评估其性能。结果PCR结果发现25株菌携带bla_(KPC)基因、7株携带bla_(NDM)基因、4株携带bla_(IMP)基因、4株同时携带bla_(KPC+NDM)基因、1株同时携带bla_(KPC+NDM+IMP)基因,另外24株未检出相应耐药基因。41株CRE的mCIM试验结果均为阳性,其中11株eCIM试验结果阳性。24株非CRE菌株的mCIM试验结果均为阴性。mCIM试验与eCIM联合试验检测丝氨酸酶的敏感性与特异性均为100.00%,Kappa值为1.000;检测金属酶的敏感性为68.75%、特异性为100.00%,Kappa值为0.725。胶体金免疫层析法均能准确检出临床分离株与血培养阳性标本中的碳青霉烯酶,与PCR法的分型结果一致,因此其敏感性与特异性均为100.00%,Kappa值为1.000。结论胶体金免疫层析法操作简便、用时较短,具有较高的敏感性与特异性,同时可大大缩短CPE血流感染的诊断时间,适合临床的推广应用。

CIM法应用于鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌耐碳青霉烯类检测的价值

目的:探讨改良Carba NP法和碳青霉烯酶失活(CIM)法应用于鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌耐碳青霉烯类抗菌药物快速检测中的价值。方法:纳入东莞市长安医院2020年3月至2021年3月期间临床分离的88株铜绿假单胞菌及88株鲍曼不动杆菌为研究对象,所有菌株均采用改良Carba NP法和CIM法检测,后以基因检测作为金标准,观察两种方法的检测价值(灵敏度、特异度、阴性预测值与阳性预测值)。结果:铜绿假单胞菌通过CIM法检测的灵敏度(96.15%)、阴性预测值(75.00%)均高于改良Carba NP法(84.62%、29.41%),差异均具有统计学意义(P<0.05);特异度(90.00%)、阳性预测值(98.68%)与改良Carba NP法(50.00%、92.96%)比较,差异均无统计学意义(P>0.05);鲍曼不动杆菌通过CIM法检测的灵敏度(90.67%)、特异度(92.31%)、阴性预测值(63.16%)及(98.55%)均高于改良Carba NP法(78.67%、53.85%、30.43%、90.77%),差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:CIM法应用于鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌耐碳青霉烯类抗菌药物快速检测的价值比改良Carba NP法更高。

imCIM检测B类碳青霉烯酶的效果评价

目的评价抑制剂增强改良碳青霉烯失活法(im CIM)在B类碳青霉烯酶检测中的应用价值,并与EDTA纸片增效试验(EDPT)进行比较分析。方法收集碳青霉烯类抗生素不敏感菌株181株,其中肺炎克雷伯菌44株、大肠埃希菌44株、鲍曼不动杆菌43株、铜绿假单胞菌50株;碳青霉烯类抗生素敏感菌株83株,其中肺炎克雷伯菌25株、大肠埃希菌16株、鲍曼不动杆菌25株、铜绿假单胞菌17株。采用im CIM和EDPT对上述264株菌株进行B类碳青霉烯酶的筛查,以PCR结果作为金标准。应用一致性检验、Wilcoxon符号秩和检验、独立样本Kruskal-Wallis H检验及ROC曲线进行统计学分析。结果 181株碳青霉烯类抗生素不敏感菌株中144株PCR扩增耐药基因阳性,A、B、D类碳青霉烯酶分别为39株、77株、28株;im CIM检测70株阳性,111株阴性,其中166株与PCR结果一致;EDPT检测72株阳性,109株阴性,其中134株与PCR结果一致。碳青霉烯类抗生素敏感菌株83株,PCR扩增耐药基因、im CIM及EDPT检测结果均为阴性。im CIM敏感性和特异性分别为85.71%(66/77)和97.86%(183/187),与PCR结果一致性Kappa值为0.859;EDPT敏感性和特异性分别为66.23%(51/77)和88.77%(166/187),Kappa值为0.561。im CIM抑菌圈差值(Δdim CIM)与EDPT抑菌圈差值(ΔdEDPT)有差别,差异有统计学意义(Z=-6.941,P<0.05)。采用im CIM检测B类碳青霉烯酶的Δdim CIM水平与A、D类酶Δdim CIM总体分布位置不同,差异有统计学意义(χ2=108.887,P<0.05)。im CIM与EDPT的ROC曲线下面积分别为0.988(95%CI:0.977~0.999)和0.936(95%CI:0.909~0.963)。结论 im CIM是一种准确、高效、便捷的碳青霉烯酶表型筛选方法,敏感性、特异性较高,适合用于流行病学监测。

双浓度联合改良碳青霉烯灭活试验筛查CRE的临床应用价值

目的评估双浓度联合改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)筛查碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(CRE)的临床应用价值。方法以VITEK 2 Compact N335卡的体外药物敏感性试验结果为标准,采用双浓度联合mCIM在231株分离自临床样本的肠杆菌科细菌中筛查CRE。结果VITEK 2 Compact N335卡筛选出CRE阳性菌株52株,阴性菌株179株,阳性检出率为22.5%;mCIM筛出CRE阳性菌株52株,双浓度联合mCIM筛出CRE阳性菌株53株,阴性菌株178株,阳性检出率为22.9%。以VITEK 2 Compact检测结果为参考,符合率为98.7%,敏感性为98.1%,特异性为98.9%;将mCIM检测阳性的52株CRE继续进行乙二胺四乙酸改良碳青霉烯灭活试验(eCIM),结果显示有13株肠杆菌科细菌金属-β-内酰胺酶为阳性,金属-β-内酰胺酶占碳青霉烯酶的25%。结论双浓度联合mCIM筛查CRE具有操作简单、不需要特殊仪器、结果易于观察等优点,适合在各级医院的微生物实验室中推广使用。对mCIM阳性菌株加做eCIM非常必要,有利于临床个性化用药。

mCIM与eCIM筛选肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的效果评价

目的评价改良碳青霉烯类失活法(modified carbapenem inactivation method,m CIM)和EDTA碳青霉烯类失活法(EDTAcarbapenem inactivation method,e CIM)对肠杆菌科细菌碳青霉烯酶表型的筛选能力。方法分别收集碳青霉烯类耐药和敏感肠杆菌科细菌102株和53株,采用m CIM和e CIM进行碳青霉烯酶表型筛选试验,PCR法检测blaKPC-2、blaNDM-1、blaIMP-4、blaVIM-1和blaOXA-48耐药基因,并对表型筛选试验结果与基因检测结果的一致性进行统计分析。结果 102株碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌中97株检出耐药基因,包括51株blaKPC-2基因、38株blaNDM-1基因、5株blaIMP-4基因以及3株同时携带blaKPC-2和blaNDM-1基因;m CIM检出阳性98株,阴性4株。98株m CIM阳性菌中,e CIM阳性46株,阴性52株。53株碳青霉烯类敏感肠杆菌科细菌耐药基因检测及m CIM试验均为阴性。m CIM试验筛选碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌碳青霉烯酶产生的敏感性为99.0%,特异性为96.6%,与PCR结果一致性Kappa值为0.959;e CIM筛选金属酶敏感性为93.5%,特异性为94.6%,Kappa值为0.881;e CIM筛选丝氨酸碳青霉烯酶敏感性为92.6%,特异性为95.8%,Kappa值为0.882。结论 m CIM试验与e CIM试验联合检测,不仅可以有效筛选碳青霉烯酶产酶株,而且可同时区分碳青霉烯酶类型,对流行病学调查研究及疾病治疗有重要意义。

mCIM试验与eCIM试验在产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型检测中的联合应用效能

目的 分析改良碳青霉烯类失活法(mCIM)试验与EDTA-碳青霉烯类失活法(eCIM)试验在产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型检测中的联合应用效能。方法 80株对碳青霉烯类药物敏感性降低的肠杆菌科菌株,采用PCR法检测碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM),采用mCIM试验与eCIM试验检测产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型。以碳青霉烯酶基因检测结果为金标准,计算mCIM试验检测产碳青霉烯酶菌株的敏感性和特异性,计算eCIM试验检测产金属-β-内酰胺酶、丝氨酸碳青霉烯酶菌株的敏感性和特异性,分析mCIM试验与eCIM试验在产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型检测中的联合应用效能。结果 80株菌株中,59株碳青霉烯酶基因阳性菌株,其中57株试验菌株mCIM试验结果阳性,即mCIM试验检测产碳青霉烯酶菌株的敏感性为96.6%(57/59)。21株碳青霉烯酶基因阴性菌株,mCIM试验结果均阴性,即mCIM试验检测产碳青霉烯酶菌株的特异性为100.0%(21/21)。33株金属-β-内酰胺酶基因(blaNDM、blaVIM、blaIMP基因)阳性,其中28株试验菌株eCIM试验结果阳性,即eCIM试验检测产金属-β-内酰胺酶菌株的敏感性为84.8%(28/33)。47株金属-β-内酰胺酶基因阴性,eCIM试验结果均阴性,即eCIM试验检测产金属-β-内酰胺酶菌株的特异性为100.0%(47/47)。27株丝氨酸碳青霉烯酶基因(blaKPC基因)阳性,eCIM试验结果均阴性,即eCIM试验检测产丝氨酸碳青霉烯酶菌株的敏感性为100.0%(27/27)。53株丝氨酸碳青霉烯酶基因阴性,其中51株试验菌株eCIM试验结果均阳性,即eCIM试验检测产丝氨酸碳青霉烯酶菌株的特异性为96.2%(51/53)。结论 mCIM与eCIM联合实验检测产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型的敏感性和特异性较高。

肺炎克雷伯菌临床分布及其碳青霉烯酶基因型检测分析

目的探讨肺炎克雷伯菌临床分布特征及检测其碳青霉烯酶基因型,为完善本院分子流行病学资料提供理论依据。方法对2015年1月~2017年12月本院患者送检的临床标本进行分离培养,采用BIOFOSUN微生物鉴定药敏分析系统进行细菌鉴定及药敏分析,采用WHONET5.6进行临床分布及耐药性分析;对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌进行改良碳青霉烯类失活法试验(mCIM),PCR法检测碳青霉烯酶3种基因型(blaKPC、blaNDM、blaIMP),扩增产物使用BLAST软件分析;对mCIM试验结果与PCR结果进行一致性检验。结果共分离888株肺炎克雷伯菌,标本来源主要是痰液595株(67.0%)、尿液86株(9.7%)、分泌物80株(9.0%)、血液71株(8.0%);科室分布主要是新生儿科147株(16.6%)、呼吸科107株(12.0%)、普儿科103株(11.6%)、神经外科89株(10.0%)及ICU73株(8.2%)。肺炎克雷伯菌对大多数抗菌药物存在不同程度的耐药,耐药率低于15%的只有亚胺培南、美罗培南、阿米卡星及哌拉西林/他唑巴坦。对30株(3.4%)亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌进行mCIM试验,其中阳性29株(敏感性为96.7%);30株亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌中有7株扩增阳性,检出均为blaNDM基因型(敏感性为23.3%),mCIM试验结果与PCR结果一致性Kappa值为0.766;与此同时无检出blaKPC、blaIMP基因型。结论blaNDM基因型是本院肺炎克雷伯菌产碳青霉烯酶主要型别及对亚胺培南耐药的主要机制。

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药性及碳青霉烯类失活法检测分析

目的分析临床分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)对临床常用药物的耐药情况及碳青霉烯类失活法(CIM)、改良Hodge试验(MHT)对产碳青霉烯酶的筛选能力。方法使用聚合酶链式反应(PCR)扩增和琼脂糖凝胶电泳的方法检测菌株携带碳青霉烯酶相关基因结果为标准,评估CIM和MHT对医院2016年1月-2017年9月临床分离的非重复30株CRKP及40株敏感菌株的碳青霉烯酶(CSKP)表型筛选能力。结果 30株CRKP对替加环素、阿米卡星、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药率分别为0、13.33%、16.67%,对头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦和美罗培南耐药率分别为86.67%、93.33%、93.33%,对其他9种β-内酰胺类抗菌药物的耐药率为100.00%;除磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、头孢唑林及替加环素外,CRKP对其他抗菌药物的耐药性较CSKP差异有统计学意义(P<0.05)。PCR结果表明30株CRKP均携带碳青霉烯酶基因;CIM和MHT灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为100.00%、100.00%、100.00%和100.00%;96.67%、100.00%、100.00%和97.56%。结论 CRKP对常用抗菌药物表现出较高耐药性,碳青霉烯酶的产生是主要耐药机制,提示临床应加强抗菌药物的管理;与PCR相比,MHT和CIM均具有较高的灵敏度、特异度和预测值,可在常规实验室开展,CIM具有结果更准确、更易于观察、结果读取时间短等优势。

mCIM法与PAE-MHT法检测铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的性能评价

目的评估改良的碳青霉烯类灭活法(mCIM)和铜绿假单胞菌改良Hodge试验(PAE-MHT)法对铜绿假单胞菌(PAE)产金属β-内酰胺酶(MBLs)的表型筛选能力。方法收集176株耐碳青霉烯类PAE,PCR检测IMP和VIM基因,采用mCIM法和PAE-MHT法检测产MBLs菌株,其中mCIM法分别选择亚胺培南(IMP)和美罗培南(MEM)作为药物底物进行筛选能力的研究,对几种方法与PCR检测结果的一致性进行统计分析。结果以IMP为底物mCIM法和以MEM为底物mCIM法检测MBLs的阳性率差异无统计学意义(χ^2=0.01,P>0.05)。以IMP为底物mCIM法、以MEM为底物mCIM法和PAE-MHT法的准确度分别为94.9%,96.6%和94.3%;敏感度分别为90.5%,100%和85.7%;特异度分别为95.5%,96.1%和95.5%。三者在准确度、敏感度和特异度之间两两相比,差异均无统计学意义(χ^2=0.01~2.99,均P>0.05)。三种方法与PCR法均具有良好的一致性。结论PAE-MHT法经济、操作简便,结果易于判读。以MEM为底物的mCIM法具有高敏感度与高特异度,更适合于检测PAE的MBLs。

CRE耐药性分析及eCIM联合mCIM的临床应用

目的了解武汉大学人民医院碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(CRE)的临床感染特点和耐药性,探讨乙二胺四乙酸-碳青霉烯类失活法(eCIM)联合改良碳青霉烯类失活法(mCIM)的临床应用,为有效防控院内感染和合理使用抗菌药物提供依据。方法分析分离自不同类型临床样本的非重复CRE的药物敏感性试验数据。另随机选取80株亚胺培南和/或美罗培南敏感性降低[最小抑菌浓度(MIC)≥2μg/mL]的CRE,联合mCIM和eCIM判断其产金属β-内酰胺酶和丝氨酸碳青霉烯酶的情况。结果共检出329株CRE,以肺炎克雷伯菌为主(59.0%),分布科室广泛,其中重症医学科和神经外科分别占16.4%和16.1%,感染部位多见于呼吸道(39.2%)。CRE总体对米诺环素和替加环素耐药率较低,分别为25.1%和2.9%,对其他常用抗菌药物的耐药率均高于50.0%。随机选取的80株CRE中有57株产碳青霉烯酶,其中产金属β-内酰胺酶的CRE 28株。结论武汉大学人民医院CRE耐药形势严峻,应随时监测,并根据药物敏感性试验结果合理用药。eCIM联合mCIM检测成本低、操作简单,是一种经济、高效的表型筛选方法。