免疫纳米荧光碳点技术快速检测乙型副伤寒沙门菌

目的建立一种以新型纳米材料——纳米荧光碳点(carbon dots,CDs)免疫示踪技术快速检测样本中细菌的方法。方法以检测乙型副伤寒沙门菌为例建立方法。用抗沙门菌Ha因子抗体耦联CDs制备成免疫纳米荧光碳点;用抗沙门菌O4因子抗体耦联磁珠粒对样本中乙型副伤寒沙门菌进行富集后,与抗Ha抗体耦联的CDs进行特异性结合,形成抗O4-磁珠粒-细菌-抗Ha-CDs"三明治"式免疫复合物;再用免疫亲和分离液移除复合物中的磁珠粒,借助荧光光谱仪测定分离液中CDs的荧光强度,推算出样品中致病菌的污染情况。结果抗Ha-CDs可有效结合抗O4-磁珠粒富集的细菌,对乙型副伤寒沙门菌的最低检测限为103CFU/mL,总时间约为2 h。结论建立的CDs技术可用于样本中乙型副伤寒沙门菌的快速检测。

抗乙型副伤寒沙门菌鞭毛抗原McAb的特性分析与初步应用

目的:通过对抗乙型副伤寒沙门菌鞭毛抗原单克隆抗体的特性分析,研制检测乙型副伤寒沙门菌的ELISA法,对副伤寒传染病进行早期诊断。方法:用杂交瘤技术制备单克隆抗体,并进行鉴定,用双抗体夹心ELISA建立检测乙型副伤寒沙门菌鞭毛抗原ELISA方法,对临床标本进行检测。结果:7株抗乙型副伤寒沙门菌鞭毛抗原的单克隆抗体IgG15株、IgG2 a 1株、IgG2b 1株,均不与相关沙门菌、肠道菌反应,用菌体免疫制备的M cAb 3B5、3G12、7H1、2B5,与乙型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌鞭毛抗原反应,而用纯化的鞭毛抗原免疫制备的单克隆抗体1F4、5D3、3H7,只与乙型副伤寒沙门菌鞭毛抗原,3B5与7H1识别同一抗原表位,3B5、7H1与3G12、2B5相互识别不同抗原表位,1F4、5D3、3H7相互识别不同抗原表位。3B5包被、过氧化物酶(HRP)标记3G12建立双抗体夹心ELISA,鞭毛抗原、菌体的最低检出量分别为5 ng/m l、105个/m l。检测159份献血员血清及70份发热待查血清为阴性,1份发热待查血清、9份血培养阳性患者血清为阳性。结论:用纯化的鞭毛抗原免疫制备的单克隆抗体不适于检测乙型副伤寒沙门菌,菌体免疫制备的单克隆抗体特异性强,建立的双抗体夹心ELISA法,可对乙型副伤寒进行早期诊断。

2型糖尿病患者下肢乙型副伤寒沙门菌性脓肿1例报道

副伤寒是一种比较常见的肠道传染病,是我国法定的乙类传染病,其临床表现除肠道病变以外,还有可能导致其他器官或全身感染。近年来由于抗生素、退热药物及激素滥用,临床表现越来越不典型。副伤寒沙门菌分为甲型、乙型和丙型,乙型副伤寒沙门菌临床表现可有:持续高热;食欲不振,腹胀;相对缓脉;表情淡漠,肝脾大;玫瑰疹,而皮肤及皮下组织局部化脓性感染国内尚未见报道。本研究报道1例2型糖尿病患者下肢乙型副伤寒沙门菌性脓肿。

一起乙型副伤寒沙门菌暴发疫情调查

目的确定一起食源性疾病的发生原因。方法通过流行病学、卫生学调查,结合实验室检验,对该疫情进行分析。结果该事件有进食可疑食物史者410人,发病164人,发病率40.0%,均治愈;11份患者排泄物中6份检出乙型沙门菌。结论经流行病学、卫生学调查及实验室检验,确定为一起乙型副伤寒沙门菌污染食物引起的食源性疾病。

1起由乙型副伤寒沙门菌引起的食物中毒

目的分析1起因食用快餐引起的食物中毒的发生原因,探讨预防控制措施。方法通过流行病学调查、临床表现结合实验室鉴定结果进行判断分析。结果结合流行病学调查结果,确认此事件是1起由乙型副伤寒沙门菌导致的细菌性食物中毒。中毒原因为食用了被乙型副伤寒沙门菌污染的快餐。结论此次中毒事件提示有关部门今后应加强食品卫生质量监督与管理,杜绝类似事件的发生。

伤寒、甲、乙、丙型副伤寒沙门菌多重荧光PCR方法的评估及临床应用

目的建立和评估多重荧光PCR方法快速鉴定伤寒、甲、乙、丙型副伤寒沙门菌的方法,并应用于临床血培养样品的检测。方法收集留取医院的可疑伤寒患者的血培养标本,用多重实时荧光PCR法和传统分离培养法同时进行分离鉴定,分析比较双盲实验结果,评价多重实时荧光PCR方法的灵敏度、特异度等检测性能指标。结果共检测临床样本538例,多重荧光PCR法检出阳性218例,比传统培养法多检出6例;阴性320例,与传统培养法一致。以传统检测方法为金标准,多重荧光PCR方法的灵敏度为100%,特异度为98.2%。结论建立的多重荧光PCR检测方法操作简便,可快速、特异、灵敏地检测出伤寒、甲、乙、丙型副伤寒沙门菌,可以应用于临床标本的早期快速分型诊断,提升重大传染病的应急处置能力和监测能力。

基于TaqMan探针四重荧光PCR检测甲型、乙型、丙型副伤寒和伤寒沙门菌

目的建立基于Taq Man探针四重荧光PCR检测甲型、乙型、丙型副伤寒和伤寒沙门菌的方法。方法根据甲型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi A,SPA)、乙型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi B,SPB)、丙型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi C,SPC)和伤寒沙门菌(Salmonella typhi,ST)的特异序列分别设计引物SPAP、SPBP、SPCP和STP,在探针的5'端分别标记TET、ROX、FAM、HEX,建立基于Taq Man探针四重荧光PCR检测方法。结果 SPAP、SPBP、SPCP和STP分别扩增出5株SPA、4株SPB、7株SPC和11株ST,而其他血清型沙门菌和17株非沙门菌扩增结果阴性。SPAP、SPBP、SPCP和STP扩增效率分别为84.5%、101.8%、92.4%和90.9%,线性相关系数(R^2)分别为0.996、0.975、0.996和0.984。结论建立的方法特异性高、敏感性强,可用于SPA、SPB、SPC和ST的特异性检测。

沙门菌食物中毒论述

引起食物中毒的沙门菌属主要是鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌和猪霍乱沙门菌。此外，还有纽波特沙门菌、病牛沙门菌、都柏林沙门菌、山夫顿堡沙门菌、汤卜逊沙门菌、凯桑盖沙门菌、德尔卑沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、丙型副伤寒沙门菌、斯坦利沙门菌、鸭沙门菌、幕尼黑沙门菌等；，沙门菌在温度20～37℃繁殖最快，在水中可生存2—3周，在粪便中可生存1—2个月，在尘埃中可生存80天，在冰冻土壤中可过冬，

伤寒和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌多重PCR及荧光PCR分型方法的建立与评价

目的建立伤寒和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌的快速和特异的检测方法,用于沙门菌属内的分型鉴定。方法根据GenBank公布的伤寒和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌的保守序列设计引物和改良分子信标探针,建立多重PCR检测方法和实时荧光PCR检测方法。结果采用所建立的多重PCR方法可分别检测到伤寒的3条特异性条带、甲型副伤寒沙门菌的2条特异性条带和丙型副伤寒沙门菌的1条特异性条带,但是乙型副伤寒沙门菌未出现特异性条带。建立的实时荧光PCR方法可以快速、特异、灵敏地检测出伤寒和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌,纯DNA和菌液的最低检出限分别可达10 fg/reaction和20 CFU/reaction;对77株细菌的检测正确率达100%。结论建立的实时荧光PCR检测方法比多重PCR方法更能快速、特异、灵敏地检测伤寒和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌。

植物乳杆菌RG-034对大鼠腹泻型肠易激综合征的治疗作用

目的研究植物乳杆菌RG-034的体外抑菌效果以及对大鼠腹泻型肠易激综合征的治疗作用。方法采用活菌计数法测定RG-034菌粉活菌数,利用类“牛津杯法”确定植物乳杆菌RG-034对大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌、金黄色葡萄球菌的抑菌活性。SD大鼠按体质量随机分为对照组、模型组、蒙脱石散组及植物乳杆菌RG-034胶囊组,每组6只。除对照组外,其余大鼠每日ig5g/kg番泻叶联合隔日禁食,持续5周,制备大鼠腹泻型肠易激综合征模型。自造模第3周开始给药,植物乳杆菌RG-034组大鼠igRG-034胶囊(1×10^(9)CFU/粒,15mg),2粒/d;蒙脱石散组大鼠ig0.81g/kg蒙脱石散,1次/d;对照组和模型组大鼠ig等量生理盐水,给药3周。观察大鼠一般状态变化,测定稀便率、稀便级以及腹泻指数,采用16S核糖体RNA测序技术分析大鼠结肠中肠道菌群变化。结果植物乳杆菌RG-034菌粉活菌数为2.5×10^(11)CFU/g,对不同浓度的大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌、金黄色葡萄球菌均有一定的抑制作用,抑菌圈直径为15.90~25.06mm。与模型组比较,植物乳杆菌RG-034胶囊可明显改善大鼠腹泻情况,显著降低稀便率、稀便级以及腹泻指数,增加了肠道菌群多样性。结论植物乳杆菌RG-034对大鼠腹泻型肠易激综合征具有一定的治疗作用,其机制可能与调节肠道菌群多样性有关。

基于上转发光免疫层析技术的常见食源性致病菌快速检测方法研究与评价

目的研制针对4种常见食源性致病菌：甲型副伤寒沙门菌（Salmonella paratyphi A）、乙型副伤寒沙门菌（Salmonella paratyphi B）、大肠埃希菌O157∶H7（Escherichia coli O157∶H7）、副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）的基于上转发光免疫层析技术（UPT-LF）的快速定量检测试纸,并对其检测性能进行评价。方法以上转发光纳米颗粒（UCP-NPs）作为示踪物,基于双抗体夹心检测模型,研制针对上述4种靶标菌的UPT-LF试纸;以4种靶标菌的系列浓度标准菌悬液作为标准样品,评价试纸的敏感性、特异性、线性和精密性,并进行模拟染菌食品的检测,评价模拟样品阳性检出率。结果针对4种靶标菌的UPT-LF试纸均具有良好的线性,相关系数r为0.985-0.996;检测敏感性达10^5-10^6CFU/ml,与其他近缘菌株无交叉反应;对乳制品、饮料、小食品、水产、肉类等细菌污染的食品检出率较高。结论该研究建立的对4种常见食源性致病菌进行快速检测的UPT-LF,简便快速,具有良好的敏感性、特异性和线性定量能力,操作性能可满足食品安全检测的要求。

河南省4起食源性疾病暴发事件的关联溯源分析

目的对4起食源性疾病暴发事件进行病原菌分离鉴定和关联性溯源分析,调查事件发生原因。方法采集相关样品进行实验室检测,利用基质辅助激光解析飞行时间质谱和VITEK 2 compact全自动微生物鉴定仪对分离菌株鉴定,按照试剂盒说明进行血清学分型,利用脉冲场凝胶电泳和BioNumerics 7.6软件对其进行分子生物学分型和同源性溯源分析。结果4起食源性疾病暴发事件暴露人数共475人,患病89例,罹患率18.74%,死亡0例。从4起暴发事件食物样品和病例粪便样品中均检出乙型副伤寒沙门菌,4株食物分离株和3株病例分离株的聚类分析结果显示100%同源性。结论本次食源性疾病暴发事件由乙型副伤寒沙门菌引起,所有分离株均为同一带型,溯源结果显示4起暴发事件原因食品为同一来源。