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应用抑制性消减杂交技术克隆乙型肝炎病毒全S蛋白反式激活基因
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作者 白桂芹 成军 +6 位作者 张树林 刘妍 黄燕萍 蔺淑梅 刘蔚 张黎颖 杨瑗 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2005年第4期336-340,共5页
目的应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建乙型肝炎病毒(HBV)全S蛋白反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,克隆HBV全S蛋白反式激活相关基因。方法以HBV全S表达质粒pcDNA3.1(-)全S转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞... 目的应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建乙型肝炎病毒(HBV)全S蛋白反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,克隆HBV全S蛋白反式激活相关基因。方法以HBV全S表达质粒pcDNA3.1(-)全S转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,从中提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果成功构建人HBV全S蛋白反式激活基因差异表达的cDNA消减文库。文库扩增后得到86个白色克隆,进行菌落PCR分析,均得到100-1000bp插入片段。挑取35个含有插入片段的阳性克隆测序分析,获得33个已知基因序列,和2个未知基因,通过生物信息学分析获得其全长序列,其中之一命名为全S蛋白反式激活基因1(CSTP1),已在GenBank中注册,注册号AY553877。未知基因的功能还正在研究中。结论应用SSH技术成功构建了HBV全S反式激活基因差异表达的cDNA消减文库。该文库的建立为进一步阐明HBV全S反式调节的靶基因及致肝病发生的分子生物学机制提供理论依据。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒全s蛋白 反式激活 抑制性消减杂交 克隆
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乙型肝炎病毒全S蛋白与纤维蛋白原α链的相互作用 被引量:1
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作者 周飞 任建林 +5 位作者 卢雅丕 陈美娅 许鸿志 潘金水 蔡稼燕 董菁 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2008年第23期2581-2586,共6页
目的:筛选人肝细胞cDNA文库中与乙型肝炎病毒(HBV)全S蛋白相互作用蛋白的基因,并反向验证HBV全S蛋白候选结合蛋白之间相互作用.方法:将全S基因定向克隆到酵母表达载体pDEST32,构建正向筛选的诱饵质粒并Westernblot法验证其在酵母中的表... 目的:筛选人肝细胞cDNA文库中与乙型肝炎病毒(HBV)全S蛋白相互作用蛋白的基因,并反向验证HBV全S蛋白候选结合蛋白之间相互作用.方法:将全S基因定向克隆到酵母表达载体pDEST32,构建正向筛选的诱饵质粒并Westernblot法验证其在酵母中的表达.将诱饵质粒与人肝细胞cDNA文库质粒共同转化MaV203酵母细胞,在人肝细胞cDNA文库筛选候选结合蛋白,提取阳性菌落质粒测序,并分析其生物学性质.将筛选出的纤维蛋白原α链中下游序列及不同全S变异株基因,分别定向克隆到pDEST32及pDEST22载体中,利用Westernblot法验证表达.将诱饵质粒与猎物质粒共同转化MaV203酵母细胞,以反向酵母双杂交方法验证初筛结果的可靠性及正确性.结果:正向的酵母双杂交实验,经初筛和再转染实验纤维蛋白原α链可与HBV全S蛋白发生相互作用.再以纤维蛋白原α链为靶基因设计诱饵质粒,以四种变异的HBV全S蛋白为靶基因设计猎物质粒,反向酵母双杂交法证实维蛋白原α链中下游可与不同全S变异体(总差异率2%)发生相互作用,纤维蛋白原α链与全S蛋白的结合域可能为病毒蛋白的前268aa.结论:纤维蛋白原α链中下游可与HBV全S蛋白产生特异性结合,其结合域可能与病毒蛋白的前268aa产生相互作用. 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 s基因 纤维蛋白原α链 酵母细胞双杂交技术
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乙型肝炎病毒全S蛋白反式激活蛋白1基因的克隆化
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作者 白桂芹 成军 +4 位作者 刘妍 吴顺华 蔺淑梅 黄燕萍 张树林 《世界华人消化杂志》 CAS 2004年第11期2581-2584,共4页
目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术及生物信息学(bioin formatics)技术筛选并克隆乙型肝炎病毒(HBV)全S反式激活新型靶基因,进一步阐明HBV感染相关疾病的发病机制. 方法:以HBV全S蛋白表达质粒pcDNA3.1(-)-全S转染HepG2细胞,以空载体pcDN... 目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术及生物信息学(bioin formatics)技术筛选并克隆乙型肝炎病毒(HBV)全S反式激活新型靶基因,进一步阐明HBV感染相关疾病的发病机制. 方法:以HBV全S蛋白表达质粒pcDNA3.1(-)-全S转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,提取mRNA逆转录为cDNA,经RsaⅠ酶切后将实验组cDNA分成2组,分别与2种不同的接头衔接,与对照组cDNA进行二次杂交和二次PCR.并结合生物信息学技术,克隆HBV 全S反式激活作用的新型靶基因. 结果:对于所获基因片段序列分析表明,其中之一为新型基因片段.成功克隆出他的全长序列并测序证实,其可以被全S蛋白反式激活,故命名为全S反式激活蛋白1 (CSTP1),已在GenBank中注册,注册号:AY553877.CSTP1 基因的编码序列全长为945个核苷酸(nt),编码产物由315 个氨基酸残基(aa)组成. 结论:HBV全S蛋白具有反式激活蛋白1基因克隆成功. HBV全S反式激活新靶基因的发现,为进一步研究HBV全S的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定基础. 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 s蛋白 反式激活蛋N1基因 克隆
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乙型肝炎病毒全S蛋白结合蛋白基因的筛选 被引量:4
4
作者 周飞 任建林 +5 位作者 卢雅丕 陈美娅 陈建民 刘明 张波 董菁 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期304-305,共2页
HBV与肝硬化、肝细胞癌的发生发展密切相关,通过其表达的病毒蛋白与肝细胞蛋白相互作用导致疾病进展。本研究中,我们对全S基因编码产物功能进行了探讨,并以其为靶蛋白,利用酵母双杂交技术寻找其与肝细胞相互作用的蛋白质,以进一步... HBV与肝硬化、肝细胞癌的发生发展密切相关,通过其表达的病毒蛋白与肝细胞蛋白相互作用导致疾病进展。本研究中,我们对全S基因编码产物功能进行了探讨,并以其为靶蛋白,利用酵母双杂交技术寻找其与肝细胞相互作用的蛋白质,以进一步探讨HBV致病机制。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 蛋白 s 结合蛋白 酵母双杂文系统
原文传递
cDNA文库噬菌体展示法的建立及乙型肝炎病毒前S1蛋白结合蛋白筛检 被引量:31
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作者 董菁 施双双 +4 位作者 王业东 皇甫竞坤 李莉 张玲霞 成军 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期321-322,共2页
为寻找乙型肝炎病毒 (HBV)前S1蛋白的结合蛋白 ,将前S1蛋白包被于聚苯乙烯平板 ,经过“包被 吸附 洗脱”筛检过程 ,获得前S1蛋白结合蛋白的cDNA序列 ,并将推断的氨基酸序列进行相互比较 ,经生物信息学方法获得结合蛋白的全长序列。共经... 为寻找乙型肝炎病毒 (HBV)前S1蛋白的结合蛋白 ,将前S1蛋白包被于聚苯乙烯平板 ,经过“包被 吸附 洗脱”筛检过程 ,获得前S1蛋白结合蛋白的cDNA序列 ,并将推断的氨基酸序列进行相互比较 ,经生物信息学方法获得结合蛋白的全长序列。共经过 4轮生物淘洗过程。结果提示 ,神经胶质瘤抑制子候选基因区基因 (GLTSCR) 2上游部分序列存在于与HBV前S1结合的重组T7噬菌体中 ,多个克隆的测序结果发现前S1蛋白结合蛋白具有KxPxKSGxxxL结构域。HBV前S1蛋白的结合蛋白可能是GLTSCR 2的编码产物。 展开更多
关键词 CDNA文库 噬菌体展示法 乙型肝炎病毒 s1蛋白结合蛋白 筛检
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乙型肝炎病毒Pre-S_1蛋白与“两对半”、HBV-DNA的相关性 被引量:7
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作者 张兆勤 胡礼仪 +2 位作者 宁良 陈民 陆东阁 《中国现代药物应用》 2009年第18期36-37,共2页
目的探讨乙型肝炎病毒前S1抗原(Pre-S1)与乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、乙型肝癌病毒DNA(HBV-DNA)的关系。方法采用ELISA方法检测192例表面抗原阳性标本的Pre-S1抗原和乙肝"两对半",荧光定量PCR法检测HBV-DNA。结果200例乙肝表... 目的探讨乙型肝炎病毒前S1抗原(Pre-S1)与乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、乙型肝癌病毒DNA(HBV-DNA)的关系。方法采用ELISA方法检测192例表面抗原阳性标本的Pre-S1抗原和乙肝"两对半",荧光定量PCR法检测HBV-DNA。结果200例乙肝表面e抗原(HBeAg)阳性患者血清中前S1抗原阳性率89.5%,HBV-DNA阳性率92.0%;280例乙肝e抗体(抗-HBe)阳性患者血清中前Sl抗原阳性率42.9%,HBV-DNA阳性率32.1%;100例HBeAg和抗-HBe均为阴性乙肝患者中前Sl抗原阳性率27.0%,HBV-DNA阳性率23.0%。P>0.05,差异无统计学意义,前Sl抗原与HBV-DNA总符合率为93.1%。在HBV-DNA的低拷贝(103-106copies/ml)中,前S1抗原的阳性率要明显高于HBeAg的阳性率,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论前S1蛋白能够较好地反映乙肝病毒的复制情况,与HB-VeAg、HBV-DNA呈正相关,对病情的预后和疗效判断具有很好的临床应用价值。 展开更多
关键词 s1蛋白 肝炎病毒 乙型肝炎 HBV-DNA
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乙型肝炎病毒preS2蛋白在转基因小鼠肝脏中的表达 被引量:2
7
作者 金艳花 訾晓渊 +8 位作者 姚玉成 熊俊 李建秀 苏小平 王新民 倪文君 丛文铭 杨康鹃 胡以平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期175-178,共4页
目的 :分析乙型肝炎病毒 pre S2蛋白在 3′末端缺失的 pre S/ S基因转基因小鼠肝脏中的分布及其病理学作用。方法 :采用原核显微注射法将质粒 pc DNA3.1- pre S/ St注射入小鼠受精卵雄原核 ,制备转基因小鼠。PCR法在基因组水平筛选 3′... 目的 :分析乙型肝炎病毒 pre S2蛋白在 3′末端缺失的 pre S/ S基因转基因小鼠肝脏中的分布及其病理学作用。方法 :采用原核显微注射法将质粒 pc DNA3.1- pre S/ St注射入小鼠受精卵雄原核 ,制备转基因小鼠。PCR法在基因组水平筛选 3′末端缺失的 pre S/ S基因转基因小鼠首建者 (founder)及后代 ;免疫组织化学法在蛋白水平检测 pre S2蛋白在这些小鼠中的表达 ;H- E染色分析转基因小鼠肝组织的病理学变化。结果 :经原核显微注射法将目的片段注射入受精卵雄原核后 ,共出生 15只新生小鼠 ,其中存活 7只 ,经 PCR检测后获得 2只 founder转基因小鼠 ,命名为 C5 7- Tg N (pre S/ St) SMMU。免疫组织化学检测发现转基因小鼠肝细胞质中有 pre S 2蛋白表达 ,H- E染色发现转基因小鼠肝组织中央静脉周围有淋巴细胞聚集。将这 2只转基因小鼠与正常同系异性小鼠交配 ,进行传代培育 ,PCR法筛选阳性转基因小鼠 ,目前已传至 F2 代。 结论 :本研究成功建立了稳定遗传 3′末端缺失的 pre S/ S基因并表达 pre S2蛋白的转基因小鼠 C5 7- Tg N((pre S/ St) SMMU,它将是体内研究 3′末端缺失的 pre S/ 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 PREs2蛋白 转基因小鼠 pres/s基因
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鸭乙型肝炎病毒PreS蛋白片段在大肠杆菌中的高效表达及初步应用 被引量:2
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作者 马张妹 李伯良 +1 位作者 熊思东 闻玉梅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第1期1-7,共7页
将编码鸭乙型肝炎病毒(DHBV)前表面抗原(PreS)第9至163位(155个)氨基酸序列的465bpDNA片段,克隆入PL启动子控制下并含有修饰型cIts857基因的表达载体中。利用载体的起始密码子和创建的终止密码... 将编码鸭乙型肝炎病毒(DHBV)前表面抗原(PreS)第9至163位(155个)氨基酸序列的465bpDNA片段,克隆入PL启动子控制下并含有修饰型cIts857基因的表达载体中。利用载体的起始密码子和创建的终止密码子(TAG)构建含部分DHBVPreS基因的表达质粒。在大肠杆菌AR68pRK248中,本质粒经温敏诱导,表达产物为17.5kDa,约占细菌总蛋白的5%。用Westembolt分析,本表达产物可与特异性DHBVPreS/S抗体反应。以表达产物组建固相基质抗体抗原复合物,可部份逆转对DHBV的免疫耐受状态。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 表达 s蛋白
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前S1蛋白与乙型肝炎病毒传染性关系的病例对照研究 被引量:2
9
作者 冯福民 徐应军 +5 位作者 米志宝 韩向午 张习坦 姚瑞平 胡铁中 武英 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 1997年第10期595-596,共2页
随机选择24例前S1抗原阳性慢性乙型肝炎患者为病例组、22例前S1抗原阴性慢性乙型肝炎患者为患者对照组、16例无症状HBsAg携带者为携带者对照组。检测其家庭共同生活成员乙型肝炎病毒(HBV)感染情况。结果表明:病例... 随机选择24例前S1抗原阳性慢性乙型肝炎患者为病例组、22例前S1抗原阴性慢性乙型肝炎患者为患者对照组、16例无症状HBsAg携带者为携带者对照组。检测其家庭共同生活成员乙型肝炎病毒(HBV)感染情况。结果表明:病例组家庭成员HBV感染率,HBsAg、HBsAg、抗HBcIgG3阳性和HBsAg、抗HBe、抗HBcIgG3阳性检出率均高于对照组,而且病例组家庭内HBV感染危险度也大于对照组,比值比(OR值)分别为5.0和6.4,两对照组间未见差别。说明前S1蛋白是HBV传染指标之一。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 s1蛋白 乙型肝炎 病例对照研究
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前S1蛋白作为慢性乙型肝炎患者病毒复制标志物的价值 被引量:2
10
作者 陈占国 郑建建 陶志华 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2007年第4期392-393,共2页
目的探讨乙型肝炎患者病毒血清前S1蛋白(PreS1)作为慢性乙型肝炎病毒复制标志物的价值。方法对210例慢性乙型肝炎患者和67例健康体检者进行HBV-DNA、PreS1、HBeAg测定;采用荧光定量-多聚酶链反应技术(FQ-PCR)对HBV-DNA进行定量检测,采... 目的探讨乙型肝炎患者病毒血清前S1蛋白(PreS1)作为慢性乙型肝炎病毒复制标志物的价值。方法对210例慢性乙型肝炎患者和67例健康体检者进行HBV-DNA、PreS1、HBeAg测定;采用荧光定量-多聚酶链反应技术(FQ-PCR)对HBV-DNA进行定量检测,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对PreS1和HBeAg进行检测。结果210例慢性乙型肝炎患者中,以HBV-DNA>1×103拷贝/m l作为HBV复制的金标准,PreS1和HBeAg与HBV-DNA的总符合率为74.8%和57.6%。177例HBV-DNA阳性患者中,PreS1阳性135例,HBeAg阳性88例,2种检验标志物间差异存在显著性(2χ=26.8,P<0.01)。PreS1、HBeAg和PreS1/HBeAg联合检测作为病毒复制标志的敏感性分别为76.3%、49.7%和87.6%,特异性分别为66.7%、100%和66.7%,准确性分别为74.8%、57.6%和84.3%,阳性预测值分别为92.5%、100%和93.4%,阴性预测值分别为33.3%、100%和50%。结论PreS1与乙型肝炎病毒的复制密切相关,PreS1作为乙型肝炎病毒复制的标志物优于HBeAg。PreS1和HBeAg联合检测更能较好反映HBV病毒感染和复制状态,有利于乙肝病情监测和疗效评估。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 复制 s1蛋白 HBV-DNA
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乙型肝炎病毒前S1前S2蛋白与血清HBV-DNA两对半检测的相关性 被引量:2
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作者 叶俊英 李静 谢建渝 《检验医学与临床》 CAS 2009年第7期520-522,共3页
关键词 乙型肝炎病毒 s1蛋白 s2蛋白 血清标志物
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乙型肝炎病毒前S1抗原(1-42)与核心抗原(1-144)在大肠杆菌中表达的融合蛋白CS1的免疫原性研究 被引量:3
12
作者 赵阳青 詹美云 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期333-337,共5页
对重组乙型肝炎 (乙肝 )病毒前S1抗原 (1- 42 )及核心抗原 (1- 144 )表达的融合蛋白CS1进行了免疫原性的研究分析 ,以便为探索HBV治疗性疫苗的研制提供实验依据。用脂质体转染的方法转染小鼠肥大细胞瘤细胞系P815 ,用乳酸脱氢酶的方法... 对重组乙型肝炎 (乙肝 )病毒前S1抗原 (1- 42 )及核心抗原 (1- 144 )表达的融合蛋白CS1进行了免疫原性的研究分析 ,以便为探索HBV治疗性疫苗的研制提供实验依据。用脂质体转染的方法转染小鼠肥大细胞瘤细胞系P815 ,用乳酸脱氢酶的方法检测了该融合蛋白诱导小鼠的细胞毒T淋巴细胞 (CTL)反应 ,用ELISA方法测定了小鼠的体液免疫反应。结果表明 ,用脂质体转染的方法建立了表达乙肝核心和前S1抗原的细胞系 (P99- 815 ) ,该融合蛋白诱导出小鼠的细胞毒T淋巴细胞 (CTL)反应 ,小鼠的体液免疫反应也较好。这为今后进一步探索慢性乙肝治疗性疫苗奠定了必要的基础。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 融合蛋白 细胞免疫 体液免疫 s1抗原 核心抗原 Cs1
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乙型肝炎病毒前-前-S蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化 被引量:3
13
作者 王春花 成军 +3 位作者 郎振为 李蕴茹 闫杰 张黎颖 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第15期1894-1896,共3页
目的:在大肠杆菌中表达乙型肝炎病毒(HBV)前-前-S蛋白,并进行纯化和鉴定.方法:通过聚合酶链式反应(PCK)获得HBV前-前-S基因,将前-前-S克隆至PET32a+,构建原核表达重组质粒,在大肠杆菌中诱导表达,表达产物进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAG... 目的:在大肠杆菌中表达乙型肝炎病毒(HBV)前-前-S蛋白,并进行纯化和鉴定.方法:通过聚合酶链式反应(PCK)获得HBV前-前-S基因,将前-前-S克隆至PET32a+,构建原核表达重组质粒,在大肠杆菌中诱导表达,表达产物进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),考马斯亮蓝染色.采用凝胶电泳回收纯化.经Westernblot.结果:成功扩增获得HBV的前-前-S编码基因片断,并构建大肠杆菌表达载体.表达载体转化的大肠杆菌经过IPTG的诱导,裂解,SDS-PAGE,结果显示得到了目的蛋白Mr28000.以抗-His的单克隆抗体进行的westernblot杂交实验,结果表明表达、纯化的目的蛋白具有特异性免疫反应识别.结论:成功表达HBV的前-前-S蛋白,对于研究HBV的前-前-S蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了坚实的基础. 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒(HBV) s蛋白 sDs-聚丙烯酰胺凝胶电泳 纯化 大肠杆菌 聚合酶链式反应(PCR) 前-前-s基因 Western 单克隆抗体
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乙型肝炎病毒大S蛋白基因纵向研究方法及应用 被引量:1
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作者 余南 崔进 +2 位作者 周国宝 张云娇 陈晶砺 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2009年第27期2840-2845,共6页
目的:建立乙型肝炎病毒(HBV)大S蛋白基因纵向研究方法,并将其应用于疾病进程中HBV的准种动态研究.方法:以2例HBV感染者(对象A,男,38岁;对象B,女,22岁.对象A研究期间未经任何抗病毒治疗,B则1年持续接受ADV抗病毒药物治疗)体内不同时期的... 目的:建立乙型肝炎病毒(HBV)大S蛋白基因纵向研究方法,并将其应用于疾病进程中HBV的准种动态研究.方法:以2例HBV感染者(对象A,男,38岁;对象B,女,22岁.对象A研究期间未经任何抗病毒治疗,B则1年持续接受ADV抗病毒药物治疗)体内不同时期的血清样本核酸提取物为模板,通过特异性扩增获取病毒大S蛋白基因序列并克隆测序,依据生物信息学方法对发生于序列结构不同区域的变异进行分析,利用比对数据对不同样本HBV准种予以描述与评价.结果:所得24条HBV大S蛋白基因序列中2条源于对象B样本的基因序列PreS2编码区存在30nt的缺失,其余22条序列大小均为1203bp;24条序列的HBV基因型均为C型.对象A大S蛋白基因序列分散值DA、DB、DC分别为:0.29、0.16、0.23,对象B则为0.80、2.30、1.82.来自对象A的全部10条HBV大S蛋白基因序列内部的"a"决定簇与参考基因完全一致;对象B的14条序列期初有2条(29%)期终有6条(86%)存在G145R突变,期终序列中有1条序列"a"决定簇内发现4个位点的突变.结论:人体内感染HBV以准种形式存在且可以用分散值DA、DB、DC对其进行描述,并应用于HBV准种动态的纵向研究.而抗病毒药物ADV的1年期治疗可使本例HBV准种分散性增高,可能增加本例耐药性突变出现的风险,同时增加本例"a"决定簇的变异出现. 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 s蛋白 变异 “a”决定簇 准种
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乙型肝炎病毒前-S2蛋白结合蛋白基因S2-29的克隆化研究 被引量:1
15
作者 陆荫英 陈天艳 +7 位作者 成军 梁耀东 王琳 刘妍 李克 张健 邵清 张玲霞 《世界华人消化杂志》 CAS 2003年第8期1114-1117,共4页
目的:筛选人肝细胞中与乙型肝炎病毒(HBV)前-S2蛋白(Pre-S2)相互作用的蛋白,探寻HBV致病机制。方法:用多聚酶链反应(PCR)技术扩增HBV前-S2基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝... 目的:筛选人肝细胞中与乙型肝炎病毒(HBV)前-S2蛋白(Pre-S2)相互作用的蛋白,探寻HBV致病机制。方法:用多聚酶链反应(PCR)技术扩增HBV前-S2基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,用营养缺陷型培养基及蓝白斑双重筛选阳性菌落,提取酵母质粒转化大肠杆菌并测序,进行生物信息学分析。逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法从HepG2细胞的mRNA中扩增出完整的新基因S2-29,连入另一酵母表达载体pGADT7,并用免疫共沉淀方法再次证实二者间的相互作用。结果:成功克隆出HBV前-S2基因并在酵母细胞中表达,配合后筛选出既能在四缺(SD/-Trp-Leu-His-Ade)培养基又能在铺有X-α-半乳糖(X-α-gal)的四缺培养基上生长并变成蓝色的真阳性菌落26个,其中有1个未知基因S2-29,该基因能在HepG2细胞中表达,免疫共沉淀方法证实二者在体外也有结合作用。结论:成功克隆出与乙型肝炎病毒前-S2蛋白相结合的新基因,为进一步研究HBV前-S2的作用提供了新线索。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 前-s2蛋白结合蛋白基因 s2-29 克隆 多聚酶链反应
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前S_2蛋白与乙型肝炎病毒复制的关系 被引量:11
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作者 李琪玲 《现代中西医结合杂志》 CAS 2005年第22期3035-3036,共2页
关键词 s2蛋白 乙型肝炎病毒 病毒复制 乙型肝炎病毒复制 s2蛋白 乙型病毒肝炎 病毒颗粒 DANE颗粒 血液传播 衣壳抗原 身体健康 传染病
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乙型肝炎病毒前S1蛋白在临床上的诊断价值 被引量:2
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作者 周镇先 龚希平 《河北医学》 CAS 2003年第8期764-765,共2页
关键词 乙型肝炎病毒 s1蛋白 诊断 病毒复制
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应用表达谱芯片技术对乙型肝炎病毒前-S2抗原结合蛋白S2-29反式调节基因的研究 被引量:1
18
作者 陆荫英 刘妍 +5 位作者 成军 梁耀东 陈天艳 邵清 王琳 张玲霞 《世界华人消化杂志》 CAS 2004年第1期58-61,共4页
目的:应用基因表达谱芯片技术,研究未知功能的乙型肝炎病毒(HBV)前-S2(preS2)抗原肝细胞结合蛋白基因S2-29 过表达,对HepG2细胞的基因表达的影响. 方法:应用酵母双杂交技术筛选并验证HBV前-S2的肝细胞结合蛋白基因.反转录聚合酶链反应(R... 目的:应用基因表达谱芯片技术,研究未知功能的乙型肝炎病毒(HBV)前-S2(preS2)抗原肝细胞结合蛋白基因S2-29 过表达,对HepG2细胞的基因表达的影响. 方法:应用酵母双杂交技术筛选并验证HBV前-S2的肝细胞结合蛋白基因.反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从HepG2细胞中扩增S2-29蛋白编码基因片段,经测序鉴定后构建表达载体pcDNA3.1(-)-S2-29,应用基因表达谱芯片技术对pcDNA3.1(-)-S2-29转染的人肝母细胞瘤细胞系(HepG2)细胞和转染空载体的相同细胞的差异表达mRNA 进行检测和分析. 结果:筛选出肝文库中HBV前-S2结合蛋白S2-29的编码基因,构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定鉴定正确.提取转染细胞的总mRNA并进行逆转录成为cDNA,进行DNA芯片技术分析.在1152个基因表达谱的筛选中,发现有9个基因表达水平显著下调,包括真核翻译延伸因子2、MAP激酶激活的死亡域、谷胱甘肽过氧化物酶、肌动蛋白、NDRG、Prosaposin、SUMO-1激活酶亚基1、胰岛素受体和1个未知功能蛋白.1个未知蛋白编码基因的表达上调. 结论:应用基因表达谱芯片成功筛选了HBV前-S2结合蛋白S2—29蛋白的反式调节基因,为进一步阐明S2—29蛋白对细胞表达调控的影响提供了新的依据. 展开更多
关键词 表达谱芯片技术 乙型肝炎病毒 前-s2 抗原结合蛋白 s2—29反式调节基因
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乙型肝炎病毒全S基因疫苗诱导小鼠的特异性免疫应答 被引量:1
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作者 谭德明 刘双虎 +3 位作者 李聪智 刘国珍 燕美玉 孙科柱 《中国病毒学》 CSCD 2001年第3期280-282,共3页
In order to know the specific immume responses after immunization of HBV DNA vaccines and what kind differences of immune responses following the HBV pan-S gene and HBsAg gene vaccination,the DNA vaccines,both pcDNA3-... In order to know the specific immume responses after immunization of HBV DNA vaccines and what kind differences of immune responses following the HBV pan-S gene and HBsAg gene vaccination,the DNA vaccines,both pcDNA3-PS and pcDNA3-HBsAg,in which HBV pan-S gene and HBsAg gene sequences were inserted into downstream of CMV promoter in pcDNA3,respectively,were injected intramuscularly into BALB/C mice.Specific humoral and cellular immune responses were detected after Vaccination.The serum anti-HBs were detected in all of the pcDNA3-PS and the pcDNA3-HBsAg immunized mice,but none in control mice.However,there were no significantly differences of serums anti-HBs level between the pcDNA3-PS and pcDNA3-HBsAg immunized mice.Serum levels of interleukine 2 and interferon gamma,were also significantly higher in pcDNA3-PS and pcDNA3-HBsAg immunized mice than that in controls.It was indicated that the good responses of cellular and humoral immunity can be induced by injection of pbDNA3-PS and pcDNA3-HBsAg in BALB/C mice.No any evidence was showed that HBV pan-S gene vaccine could enhance the immunity of HBsAg gene vaccine. 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 基因疫苗 小鼠 s基因 特异性免疫应答
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乙型肝炎病毒前S蛋白与临床应用 被引量:4
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作者 王庆西 王泽民 《中国误诊学杂志》 CAS 2002年第6期859-861,共3页
关键词 乙型肝炎 蛋白s 临床应用 乙型肝炎病毒 s1抗原 病毒复制 病毒感染
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