作为基因转移载体的乙型肝炎病毒衣壳对肝癌细胞的靶向性

目的:探讨乙型肝炎病毒衣壳作为基因转移载体对肝癌细胞的靶向性和有效性。方法:采用PEG8000病毒浓缩法、β-丙内脂法从能持续产生HBV的HepG2.2.15细胞上清液中制备乙型肝炎病毒衣壳(hepatitisBvirusenvelope,HBVE),用它包裹绿色荧光蛋白质粒(pIRS2-EGFP)后得到基因转移载体复合物HBVE-GFP,用脂质体包裹pIRS2-EGFP后得到基因转移载体复合物Liposome-GFP。用HBVE-GFP及作为对照的Liposome-GFP转染人成肝细胞瘤HepG2细胞来研究其转导效率;用HBVE-GFP分别转染HepG2细胞及作为对照的人肺腺癌细胞A549、人宫颈癌细胞HeLa、人皮肤成纤维细胞FB来研究其靶向性;荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况,流式细胞术检测细胞发光率。结果:(1)有效性检测:Liposome-GFP组及HBVE-GFP组均可见绿色荧光蛋白的表达,HBVE-GFP组的荧光强度较Liposome-GFP组更强(P<0.01);Liposome-GFP组的转染效率为(49.97±2.37)%,而HBVE-GFP组为(70.65±3.15)%,两者差异显著(P<0.01)。(2)靶向性检测:各种细胞均可见绿色荧光蛋白的表达,HepG2细胞较其他细胞具有更强的荧光强度(P<0.01),HepG2细胞的转染效率为(71.35±0·03)%,显著高于其他3组(P<0.01)。结论:乙型肝炎病毒衣壳作为基因转移载体对肝癌细胞具有较好的转染有效性和靶向性。

Hep G2细胞中乙肝病毒衣壳包裹绿色荧光蛋白质粒表达的研究

目的:观察乙型肝炎病毒衣壳(hep-atitis B virus envelope,HBVE)包裹绿色荧光蛋白质粒在肝癌细胞株(Hep G2细胞)中的表达效果是否优于脂质体包裹绿色荧光蛋白质粒。方法:采用PEG8000病毒浓缩法、β-丙内脂法从Hep G2.2.15细胞上清液中制备HBVE基因转移载体,分别用HBVE及脂质体包裹绿色荧光蛋白质粒(pIRS2-EGFP)后转染Hep G2细胞,通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况,流式细胞仪检测细胞发光率。结果:荧光显微镜下观察可见,脂质体组及HBVE组均可见绿色荧光蛋白的表达,HBVE组较之脂质体组具有更高的荧光强度;流式细胞仪检测结果显示,脂质体组的转染效率为49.97%,而HBVE组转染效率为70.65%,其转染效率及荧光强度明显高于脂质体组,P=0.000。结论:HBVE包裹绿色荧光蛋白质粒较之脂质体包裹在HepG2细胞中具有更好的转染效果。

乙肝病毒衣壳作为肝癌基因转移载体对肝癌是否有靶向性

背景与目的：乙型肝炎病毒（HBV）具有嗜肝性的主要原因在于病毒衣壳（HBVE）上镶嵌的外衣壳蛋白PreS1,利用此生物特性有可能将HBVE改造成肝癌靶向性基因转移载体.本研究探讨乙型肝炎病毒衣壳作为基因转移载体对肝癌是否有靶向性.方法：采用PEG 8000病毒浓缩法、β-丙内脂法从Hep G 2.2.15细胞上清液中制备乙型肝炎病毒衣壳（HBVE）,用它包裹绿色荧光蛋白质粒（pIRS2-EGFP）后得到基因转移载体复合物HBVE-GFP,用HBVE-GFP分别转染Hep G2、A549、HeLa、FB细胞,通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况,通过流式细胞仪检测细胞发光率.结果：荧光显微镜下观察可见,各组均可见绿色荧光蛋白的表达,Hep G2组较之其他3组具有更高的荧光强度;流式细胞仪检测结果显示,Hep G2组的转染效率为（71.35±0.03）%,显著高于其他3组（P＜0.001）,且其荧光强度是其他3组的3～4倍（P＜0.001）.结论：乙型肝炎病毒衣壳作为载体对肝癌具有较好的靶向性.

wCTLA-4胞外段与HBc融合DNA疫苗的构建和真核表达

目的构建土拨鼠细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白-4(wCTLA-4)细胞外部分和人乙型肝炎病毒核衣壳(HBc)融合蛋白表达质粒pwCTLA-4-HBc并在真核细胞中表达。方法通过限制性酶切和T4连接,以HBc基因片段置换pwCTLA-4-WHc质粒中的WHc片段,得到质粒pwCTLA-4-HBc,分别转染幼仓鼠肾细胞系(BHK)和人宫颈癌细胞系(Hela),间接免疫荧光和化学发光免疫法检测融合蛋白的表达。结果融合蛋白编码质粒转染BHK细胞后可检测到HBc抗原免疫荧光,转染Hela细胞后细胞裂解液和培养上清中均可检测到融合蛋白。结论成功构建wCTLA-4胞外段和HBc融合蛋白表达质粒pwCTLA-4-HBc,融合蛋白可以在真核细胞表达并分泌到细胞外。