乙型肝炎病毒表面抗体衰减儿童加强免疫效果研究

目的探索乙型肝炎(乙肝)病毒表面抗体(抗-HBs)衰减儿童加强免疫的效果。方法按照0、1、6个月免疫程序,使用重组乙肝疫苗(Hepatitis B Vaccine,HepB)(汉逊酵母)对673名抗-HBs衰减儿童进行加强免疫,剂量分别为10μg和20μg。加强免疫1剂和3剂后采集研究对象的血液标本,检测乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、抗-HBs和乙肝病毒核心抗体(抗-HBc)。对加强免疫1剂后抗-HBs<10毫国际单位/毫升(mIU/ml)的研究对象,进一步检测细胞因子干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-4和乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)含量,同时按照1:1配对原则,从抗-HBs>100mIU/ml的儿童中选择性别相同、年龄±1岁的个体作为阳性对照,检测IFN-γ和IL-4。结果两剂量组重组HepB(汉逊酵母)加强免疫后均能刺激机体恢复高浓度的抗-HBs,组间差异无显著的统计学意义(P>0.05)。加强免疫1剂后,研究对象的抗-HBs阳性率>90%,53名抗-HBs<10mIU/ml研究对象的细胞免疫状态(IFN-γ阳性细胞百分比、IL-4阳性细胞百分比和IFN-γ/IL-4比值)也达到阳性对照组水平(P>0.05);加强免疫3剂后,研究对象抗-HBs阳性率达到100%,且几何平均浓度(GMC)显著高于加强免疫1剂后的效果(P<0.001)。结论抗-HBs衰减儿童加强免疫1剂10μg重组HepB(汉逊酵母)能产生良好的免疫应答。

乙型肝炎病毒表面抗原和抗体双阳性样本的产生机制研究

目的 研究乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）和抗体（HBsAb）双阳性样本的产生机制.方法 运用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测技术在血清HBsAg阳性样本中收集HBsAb同时阳性的样本作为研究组,利用HBsAg和HBsAb体外血清学中和反应为同时阳性的样本寻找配对的样本作为配对组,对筛选出的每一对样本进行乙型肝炎病毒（HBV）分型、HBV-DNA病毒载量测定、HBsAg亚型分析、HBV-S基因测序,记录结果.同时,收集HBsAg阳性并且HBsAb阴性的样本血清作为对照组,同步分析,记录结果.结果 20例研究组的血清学标志物中,乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）均为阳性,基因型均为B型,HBV-DNA病毒载量均大于105 copies/ml,HBsAg亚型均为adw,有7例样本HBV-S基因有突变;20例配对组的HBcAb均为阳性,基因型均为C型,HBV-DNA病毒载量均大于105 copies/ml,HBsAg亚型均为adr,有6例样本HBV-S基因有突变.25例对照组样本的HBcAb均为阳性,HBV-DNA均大于105 copies/ml,其中12例样本基因型为B型,11例样本基因型为C型,2例样本基因型为B＋C型;HBsAg亚型16例为adr,7例为adw,2例为ayw;有8例样本HBV-S基因有突变.结论 HBsAg和HBsAb双阳性样本的产生机制可能由于机体在一定时期内感染了两种基因型和HBsAg亚型均不同的HBV而引起.

乙型肝炎表面抗原/抗体同时存在的血清学模式与病毒血症的关系

目的分析乙型肝炎病毒(HBV)感染者乙肝表面抗原(HBsAg)与乙肝表面抗体(HBsAb)同时阳性的模式,与HBV DNA的关系,以及其产生的原因及临床意义。方法采用化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)检测样本的HBV血清标志物,从中选出HBsAg和HBsAb同时阳性的样本,采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测其HBV DNA定量值。结果在选取的HBsAg和HBsAb同时阳性的37例样本中,出现3种HBV模式:(1)HBsAg、HBsAb、HBeAb、HBcAb阳性,阳性率46%,HBV DNA阳性率22%;(2)HBsAg、HBsAb、HBeAb、HBcAb阳性,阳性率30%,HBV DNA阳性率30%;(3)HBsAg、HBsAb、HBeAb、HBcAb阳性,阳性率24%,HBV DNA阳性率5%。37例样本中,有21例血清HBV DNA检测阳性,阳性率为57%。结论 HBsAg和HBsAb同时阳性并不代表疾病真正好转,部分感染者仍存在病毒血症,应当引起重视。

乙型肝炎病毒表面抗原单链抗体细胞内免疫抗乙型肝炎病毒基因治疗研究

目的 :研究乙型肝炎病毒表面抗原 (HBsAg)人源单链可变区抗体 (ScFv)细胞内免疫抗乙型肝炎病毒(HBV)基因治疗的作用。方法 :用噬菌体表面展示技术筛选特异性的HBsAg人源单链可变区抗体 ,聚合酶链反应(PCR)法扩增HBsAg单链抗体基因 ,并构建表达HBsAgScFv基因的重组逆转录病毒载体pLXSN HBsAgScFv,转染PA317细胞 ,将转染细胞分泌的假病毒颗粒感染 2 2 15细胞 ,酶联免疫吸附法 (ELISA)检测其上清HBsAg和HBeAg ,定量检测HBVDNA。结果 :成功筛选出HBsAgScFv ,PCR扩增出 75 0bp的全基因 ,构建HBsAgScFv基因的逆转录病毒载体 ,转染PA317细胞 ,在上清中检测出含HBsAgScFv假病毒颗粒的存在 ,上清感染 2 2 15细胞后第 3、5、7、14天 ,HBsAg、HBeAg逐渐下降 ,到第 14天时HBsAg已变为阴性 ,DNA定量检测无明显变化。结论 :HBsAgScFv能成功地在逆转录病毒载体中表达 ,并有抑制HBsAg。

采用基因拼接方法构建人源特异性抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab噬菌体抗体库

目的 构建人源特异性抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab噬菌体抗体库。方法 从抗乙型肝炎病毒表面抗体高滴度 (1:10 2 4 )的人全血中分离外周血单个核细胞 (PBMC) ,经RT PCR分别扩增出轻链可变区和重链可变区 ,再以噬菌体质粒为模板分别扩增出轻链恒定区 (Cκ)和重链恒定区 (CH1) ,将轻链可变区和轻链恒定区 (Cκ)及重链可变区和重链恒定区 (CH1)进行第 1次基因拼接 ,分别形成κ轻链和Fd重链 ,再以κ轻链和Fd重链作为模板进行第 2次基因拼接 ,形成完整的Fab基因 ,与pComb3H SS噬菌体质粒连接后 ,电穿孔转化大肠杆菌XL1 Blue。结果 通过多次电穿孔转化 ,获得总容量为 4× 10 5库容的噬菌体抗体库。

抗乙型肝炎病毒表面抗原抗体国产ELISA试剂评价

目的 评价 6种国产抗乙型肝炎病毒表面抗原抗体 (抗 HBs)酶联免疫吸附试验 (ELISA)试剂盒。方法 将RocheElecsys 2 0 10电化学发光免疫分析系统上检测余留的抗 HBs标本 ,用 6种国产抗 HBsELISA试剂盒进行检测 ,评价 6种试剂盒的敏感度、检测范围、精密度和特异性。结果 6种国产试剂盒的敏感度相差较大 ,10～ 4 0IU/L不等。 5 0IU/L以下时 ,浓度与吸光度呈直线关系 ,但吸光度数值较低 ;未发现高浓度时的钩状效应。 5 0IU/L的标本 ,A、B 2种试剂的批内变异系数 (CV)分别为 10 .1%和 13.7% ;日间CV分别为 14 .1%和2 4 .8% ;阴性标本在 6种试剂盒中出现了不同程度的假阳性。结论 国产抗 HBsELISA试剂的部分性能应改进和提高。

抗乙型肝炎病毒表面抗原T7噬菌体抗体库的构建

构建T7噬菌体单链抗体(scFv)库筛选抗乙型肝炎病毒表面抗原抗体。从抗-HBs阳性患者外周血淋巴细胞中提取总RNA,反转录合成cDNA第1条链,PCR分别扩增抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),经重叠延伸拼接(SOE)PCR组成scFv基因,并将其与T7噬菌体载体的2个臂相连接。体外包装后,在宿主菌BLT5403中,扩增重组噬菌体抗体库。以乙型肝炎病毒表面抗原进行4轮"吸附-洗脱-扩增"的筛选,酶免疫实验检测抗体活性。所建抗体库库容为1.53×107,扩增后初级库滴度为2.42×1010pfu/mL。以乙型肝炎病毒表面抗原筛选后抗体出现特异性富集,经酶免疫实验鉴定,得到2株与HBsAg抗原特异结合的噬菌体抗体,成功构建了抗HBsAg蛋白T7噬菌体抗体库。

对乙型肝炎病毒表面抗原及抗体同时存在的模式分析

目的分析乙型肝炎病毒(HBV)感染者乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)与乙型肝炎病毒表面抗体(抗-HBs)同时阳性的模式,以及与HBVDNA的关系,探讨其产生的原因和临床意义。方法采用化学发光微粒子免疫分析技术检测样本的HBV血清标志物,从中选出HBsAg和抗-HBs同时阳性的样本,采用荧光定量聚合酶链反应检测其HBV DNA定量值。结果 HBsAg与抗-HBs同时阳性的37例患者中,出现3种HBV模式。37例阳性样本中,有21例血清HBV DNA检测结果阳性,阳性率57%。结论 HBV患者出现HBsAg和抗-HBs同时阳性,原因复杂,并不代表疾病真正好转。而且,仍有HBVDNA复制,预后较差,应当引起重视。

不同检测系统间乙型肝炎病毒表面抗体结果一致性及影响因素分析

目的探讨乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)单独阳性及乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)与HBsAb同时阳性这两种不同乙肝标志物结果模式下,两种不同化学发光法检测系统HBsAb检测结果的一致性及可能影响一致性的原因。方法①选取在A系统行乙型肝炎病毒感染标志物检测样本64例,其中HBsAb单独阳性35例为模式一样本;HBsAg与HBsAb同时阳性29例为模式二样本,所有样本同时在B系统行HBsAb检测并比较A/B系统结果。②模式二样本经聚乙二醇6000(PEG6000)处理后,分别经A/B系统再次检测HBsAb,并比较其结果。结果(1)模式一样本,A/B系统HBsAb阳性符合率为91.4%(32/35)(≥10IU/L),其中10~100IU/L浓度范围符合率为90.9%(20/22);大于100IU/L浓度范围符合率为92.3%(12/13)。A/B系统HBsAb定量检测结果差异有统计学意义[68.01(26.15,270.60)vs 50.65(28.86,246.79),P<0.05]。(2)模式二样本,A/B系统HBsAb阳性符合率为37.9%(11/29)(≥10IU/L),其中10~100IU/L浓度范围符合率为40%(10/25),大于100IU/L浓度范围符合率为25%(1/4)。A/B系统间HBsAb定量检测结果差异有统计学意义[25.45(15.98,66.01)vs 5.81(2.82,22.70),P<0.001]。经PEG处理后,A系统HBsAb检测结果较处理前差异有统计学意义[17.88(8.75,49.61)vs 25.45(15.98,66.01),P<0.001];而B系统两者间差异无统计学意义[8.09(1.93,32.52)vs 5.81(2.82,22.70),P>0.05]。A/B系统结果比较,小于10IU/L浓度范围内符合率为72.7%(8/11),10~100IU/L浓度范围内符合率为43.7%(7/16),大于100IU/L浓度范围内的符合率为50%(1/2)。A/B系统HBsAb定量检测结果差异仍有统计学意义[17.88(8.75,49.61)vs 8.09(1.93,32.52),P<0.001]。结论(1)溯源性不同的A/B检测系统对于单独HBsAb阳性样本结果阳性符合率较高,但定量结果存在一定差异;(2)HBsAg-HBsAb免疫复合物的存在可能是影响A/B系统HBsAb检测结果一致性的重要因素。(3)对于HBsAg和HBsAb同时阳性患者,B系统检测结果可能更能反映个体的真实免疫状态。

人源抗乙型肝炎病毒表面抗原基因工程IgG全抗体的表达、纯化及初步鉴定

目的对人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的基因工程IgG全抗体进行表达、纯化及初步鉴定。方法用含Fc片段抗-HBsAg Fab抗体基因的载体pAC-HBs-Fc,与杆状病毒线性DNA共转染昆虫细胞sf9,产生重组抗-HBsAg的全抗体。以不同浓度的HBsAg包被酶标板孔,用间接ELISA法检测培养上清中抗体的表达及特异性;用蛋白G亲和层析柱进行抗体的纯化,并对纯化的抗体进行SDS-PAGE、Western blot和竞争性ELISA分析。结果上清中表达的重组IgG抗体仅与HBsAg呈阳性反应,特异性良好,纯化后其纯度达97.1%。经SDS-PAGE和Western blot分析可见,IgG抗体轻链和重链的相对分子质量分别约为27000和55000,为人源IgG抗体。CHO表达的HBsAg和血源性HBsAg能竞争性抑制该重组IgG抗体与E.coli表达的HBsAg反应,其抑制率分别为55.9%和81.9%。结论人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的基因工程IgG全抗体可在杆状病毒载体表达系统中成功表达。

抗乙型肝炎病毒表面抗原的IgG全抗体表达载体的构建

目的构建抗乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的IgG全抗体杆状病毒表达载体。方法用PCR方法扩增抗HBsAg抗体Fab片段的轻链(L)及重链Fd段(VH+CH1)基因片段,将杆状病毒载体pAC-k-Fc与L基因连接,重组为过渡表达载体pAC-k-L-Fc,再与Fd基因连接,构建重组表达载体pAC-HBs-Fc,并进行酶切鉴定及DNA测序分析。确定正确后,转染昆虫细胞sf9,用免疫荧光检测IgG的表达。结果PCR扩增的片段约650bp,与预期值一致。载体pAC-k-L-Fc和pAC-HBs-Fc的酶切片段和DNA序列与预期结果一致。转染sf9细胞呈阳性荧光反应,未转染细胞呈阴性荧光反应。结论已成功构建表达载体pAC-HBs-Fc,为表达抗人HBsAg的IgG全抗体奠定了基础。

乙型肝炎病毒表面抗体两种检测方法的一致性研究

目的：研究外周血乙肝病毒表面抗体定量和定性检测结果之间的一致性。方法采用微粒子酶免疫分析法定量检测，酶联免疫吸附法定性检测。结果以 CMIA 为参考实验，ELISA 法检测 anti-HBs 的 Se 、Sp 、J 、PV ＋、PV －分别为0.95、0.53、0.48、0.74、0.88，k ＝0.51；吸光度为0.4009时 Se 、Sp 、J 、PV ＋、PV －分别为0.50、0.95、0.45、0.93、0.43；对吸光度0.1043～0.4009范围外样本分析，ELISA 定性检测的 Se 、Sp 、J 、PV＋、PV－分别为0.90、0.91、0.81、0.93、0.88，k ＝0.81。结论吸光度值0.105为 ELISA 检测结果判定的 Cut-off 值具有良好的检测灵敏度（Se ＝0.95）和较好的阴性预测值（PV－＝0.88），ELISA 检测 Anti-HBs 阴性可认为 Anti-HBs 浓度小于10 mIU／mL 而不具有保护价值；当样本吸光度大于或等于0.4009时可认为 Anti-HBs 浓度大于或等于10 mIU／mL，具有保护意义；ELISA 检测 Anti-HBs 灰区范围主要是吸光度0.105～0.4009，应定量检测以判定 Anti-HBs 真实水平。

乙型肝炎病毒表面抗体定性与定量检测分析

我国是乙型肝炎的高流行区,乙型肝炎病毒（HBV）的感染率较高,接种乙肝疫苗是预防的主要手段。乙型肝炎表面抗体（HBsAb）是判断机体对HBV免疫状态及乙肝疫苗免疫效果的评价指标。2011年9～12月,我们采用时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）两种方法对乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阴性的标本进行HBsAb测定,

乙型肝炎病毒表面抗原和表面抗体同时阳性样本的体外中和反应特性分析

目的研究同时阳性样本的乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎病毒表面抗体(抗-HBs)的体外中和反应特性。方法运用化学发光定量检测技术在HBsAg阳性样本中收集抗-HBs同时阳性的样本血清作为研究对象;选择单纯HBsAg阳性的样本和单纯抗-HBs阳性的样本分别与同时阳性的研究组样本中的抗-HBs和HBsAg进行体外血清学中和反应,测定中和物中的HBsAg和抗-HBs含量;测定HBsAg单阳性样本的基因型和HBsAg亚型,记录各测定结果。结果获取1例HBsAg(130.21ng/mL)和抗-HBs(50.6U/L)双阳性样本,HBV基因型为B型,HBsAg亚型为adw;20例HBsAg单阳性样本中有6例能中和研究组样本中的抗-HBs(中和物抗-HBs≤6.5 U/L);20例抗-HBs单阳性样本均能中和研究组样本中的HBsAg(中和物HBsAg≤0.06ng/mL)。结论同时阳性样本中的抗-HBs不是与其共存的HBsAg的特异性抗体。

用反向被动血凝抑制试验进行乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体的位阻分析

本文报告获得28株分泌抗HBsAg单克隆抗体的杂交瘤细胞系,均为抗HBsAg“a”决定簇抗体。产生鼠IgM抗体的有一个细胞系;IgG1 18个系;IgG 2a 1个系;IgG 2b 6个系;IgG 3两个系。采用反向被动血凝抑制法测定了其中24种McAb的交互抑制现象。24种McAb可分为10个不同的抑制群。并对这种简单易行的位阻分析方法在实用中的价值做了讨论。

ELISA法检测乙型肝炎病毒表面抗体具有保护效果的临界值探讨

目的：探讨ELISA法检测乙型肝炎病毒表面抗体（ HBsAb）具有保护作用的临界值。方法对ELISA法检测HBsAb 吸光度值（OD值）0．105～0．525的224份血清标本按OD值分为A组（OD值0．105～0．210）58份、B组（OD值0．211～0．315）58份、C组（OD值0．316～0．420）51份、D组（OD值0．421～0．525）57份。同时用化学发光法（CLIA）定量检测各组HBsAb水平。结果224份标本中136份（60．7％）CLIA HBsAb 定量检测结果＞10 mIU/mL，抗体有保护作用。以上述136份标本ELISA的结果为Y轴、CLIA结果为X轴进行直线回归，得回归方程Y＝0．0086X＋0．1726。将WHO标准样本CLIA结果＞12 mIU/mL为抗体阳性代入回归方程得ELISA检测HB-sAb具有保护作用临界OD值为0．2758。结论 ELISA检测乙型肝炎病毒表面抗体具有保护作用临界OD值为0．2758。

2607名青少年乙型肝炎病毒表面抗体检测结果分析

目的了解本公司2607名青少年接种乙型肝炎(下简称乙肝)疫苗后,乙肝病毒表面抗体的产生情况。方法采用酶联免疫法对1992年9月1日后出生的青少年进行乙肝病毒表面抗体检测。结果接种乙肝疫苗后,乙肝病毒表面抗体阳性率随年龄的增大而逐渐降低。结论为了有效地预防和控制乙肝的传播,接种乙肝疫苗是最有效的措施。接种乙肝疫苗3年后乙肝病毒表面抗体阳性率会逐渐下降。应及时检查乙肝病毒表面抗体并根据检查结果加强免疫。

重组人抗乙型肝炎病毒表面抗体的筛选及序列分析

目的克隆、筛选人抗乙型肝炎病毒表面抗体(抗-HBs),并对其基因序列进行分析。方法从抗-HBs抗体阳性血液中分离淋巴细胞,提取总RNA,合成cDNA,以此为模板,PCR扩增轻链和重链抗体可变区基因;应用已构建的抗体支架载体,构建重组表达载体,转化毕赤酵母X33,建立相应的酵母表达文库;甲醇诱导表达,Westernblot及ELISA筛选抗-HBs抗体阳性菌株;PCR扩增DNA片段,进行测序及Blastn比对,并与已发表的抗-HBs抗体序列进行同源性分析。结果重链及轻链抗体重组表达载体经双酶切鉴定,证明构建正确;经Westernblot及ELISA筛选,获得了具有HBsAg结合活性的完整轻重链抗体;轻链可变区与已发表序列核苷酸同源性为93%,而氨基酸同源性仅为88%,尤其CDR3变异较大;重链可变区与已发表序列同源性较低,CDR3区基因长度及序列均有较大差别。结论应用毕赤酵母表达体系筛选,获得了新的抗-HBs抗体。