乙型肝炎病毒C基因启动子和前C基因变异与HBeAg含量和肝炎病情的临床研究

研究乙型肝炎病毒(HBV)C基因启动子(CP)和前C基因变异对HBeAg表达和病情的影响。通过DNA扩增、基因序列分析检测48例慢性乙肝和12例慢性重型乙肝患者血清的HBV CP和前C基因序列,及通过微粒子发光法定量检测血清中HBeAg的含量。(1)前C终止变异(nt1896G→A)在重型乙型肝炎病例中的发生率显著升高(66.7％);CP双变异(nt1762A→T和1764G→A)则在慢性乙型肝炎中度和重度的病例中的发生率显著升高(分别为52.6％和54.5％)。(2)双变异组和终止变异组的HBeAg含量均显著下降,P<0.01。但终止变异组HBeAg含量的下降较双变异组更为明显,P<0.05,且eAb阳性率也显著升高,P<O.05。终止变异联合双变异组的HBeAg含量及eAb阳性率同终止变异组相近。前C终止变异对HBeAg表达的影响较CP双变异更大,对肝炎病情的影响也更明显。

乙型肝炎病毒C基因启动子双变异患者中医证型特点研究

目的:探讨HBVC基因启动子(BCP)双变异慢性乙型肝炎患者的中医证型特点。方法:选择HBsAg阳性慢性乙型肝炎患者168例进行观察。中医证型分为湿热中阻、肝郁脾虚、肝肾阴虚、瘀血阻络、脾肾阳虚5型;BCP双变异检测,采用微板核酸杂交法。结果:BCP双变异的总检出率为36·31%(61/168),其中,湿热中阻型BCP双变异检出率最高(54·24%),与其他各型比较差异均有显著性意义(P<0·052);肝郁脾虚型BCP双变异检出率(36·36%)虽低于湿热中阻型(P<0·025),但却明显高于肝肾阴虚型(13·04%)及瘀血阻络型(10·53%),且差异有显著性意义(P<0·05);肝肾阴虚与瘀血阻络两型BCP双变异检出率均较低,两者比较差异有显著性意义(P>0·05)。结论:HBVBCP双变异的慢性乙型肝炎患者中医证型特点以湿热中阻为主,肝郁脾虚居次,临床治疗要重视清热利湿,舒肝健脾治法或方药的选用。

乙型肝炎病毒C基因启动子区异质性检测初步研究

目的 以乙型肝炎病毒 (HBV)C基因启动子 (CP)变异来探讨HBV准种的存在意义。方法 设计特异性多聚酶链反应 (PCR)引物 ,自 9例慢性HBV感染患者外周血血清中扩增HBVCP序列 ,克隆入pGEMTeasy质粒 ,随机挑选 37个克隆进行DNA测序以确定病毒的变异程度。结果 测序发现HBVCP序列是变异的高发区 ,在直接重复序列 (DR)I上游存有一缺失突变高发 (48 7% ,18/37)区 ,缺失突变与替换突变在TATA样盒TA2、TA3区发生率较高 ,而TA4极为保守。结论 CP区内有一缺失高变区 ,TA2、TA3的变异影响前C蛋白的表达 ,但该区的变异不影响前基因组RNA的转录。结果提示 。

慢性肝炎病毒C基因启动子(BCP)变异与干扰素应答的关系

为了探讨干扰素治疗慢性乙型肝炎的疗效与慢性乙型肝炎病毒C区启动子 (BCP)变异之间的关系 ,对 89例HBVDNA阳性的慢性乙型肝炎患者 ,应用错配PCR -RFLP分析技术结合直接序列分析 ,共检出 47例BCP变异株 ,其中 2 4例曾应用干扰素治疗 ,野生株 2 1/4 2例应用干扰素治疗。 2 4例HBVC区启动子变异株对干扰素治疗有效 12例 ;野生株 2 1例 ,对干扰素有效 18例 ,二组相比差异有显著性。野生株组的ALT复常 ,HBVDNA阴转率高于变异株组 (p <0 .0 5 )。而治疗组中变异株组的野生株转化率为 38 9%明显高于对照组 (5 0 % ) ,差异显著 (p <0 .0 5 )。混合感染的病例 ,干扰素治疗后有变异株去优势化积累趋势。提示干扰素治疗不会诱发BCP变异的发生 ,但有BCP变异的病例可降低干扰素的疗效 ,同时也说明变异株对干扰素治疗有反应 。

慢性重型乙型肝炎患者的乙型肝炎病毒C基因启动子和前C基因变异及与e抗原系统的关系

目的 研究慢性重型乙型肝炎患者血清的HBVC基因启动子 (CP)和前C基因变异情况。方法 通过DNA扩增、基因序列分析检测 75例慢性乙型肝炎 (CHB)和 14例慢性重型乙肝 (CSH)患者血清的HBVCP和前C基因序列 ,通过微粒子发光法定量检测血清中HBeAg的含量及通过荧光定量PCR技术定量检测血清中的HBVDNA。结果 (1)前C终止变异 (nt1896G→A)在CSH组中的发生率显著高于CHB组 (71 4 %和 2 6 7% ) ;CP双变异 (nt 176 2A→T和 176 4G→A)则在CSH组和CHB组的发生率无显著差异 (4 2 9%和 4 8 0 % )。 (2 )CSH组的HBeAg含量显著低于CHB组 ;CSH组的HBeAb阳性率则显著高于CHB组 (71 4 %和 32 0 % )。 (3)CSH组和CHB组的HBVDNA定量则无明显差异。结论 前C终止变异 ,对e系统有明显影响 ,与CSH的发病有关。

乙型肝炎病毒C基因启动子和前C基因变异对HBeAg表达及病情的影响

目的研究乙型肝炎病毒 (HBV)C基因启动子 (CP)和前C基因变异对HBeAg表达和病情的影响。方法通过DNA扩增、测序检测乙型肝炎患者的HBVCP和前C基因序列 ,通过微粒子发光法和荧光定量PCR技术定量检测血清中的HBeAg和HBVDNA。结果 (1 )前C终止变异在重型乙型肝炎病例中的发生率显著升高 ;CP双变异在慢性乙型肝炎中度和重度病例中的发生率显著升高。 (2 )双变异组和终止变异组的HBeAg含量均显著下降 ,而后者下降更明显 ,且e抗体阳性率显著升高 ;而终止变异联合双变异组的HBeAg含量及e抗体阳性率与终止变异组相似。(3)双变异组、终止变异组和对照组之间的HBVDNA定量无明显差异。结论前C终止变异对HBeAg表达的影响较CP双变异更大 。

乙型肝炎病毒c基因启动子变异与血清HBeAg及HBV DNA的关系

目的 :研究乙型肝炎病毒 (HBV ) c基因启动子 (BCP)变异与 e抗原及 HBV DNA含量的关系。方法 :采用错配引物聚合酶链反应 (PCR) -限制性片段长度多态性 (RFL P)分析及荧光定量 PCR(FQ- PCR)对 10 5例血清 HBV DNA阳性 HBV感染者进行 HBV BCP基因变异及 HBV DNA定量测定。结果 :BCP变异组 HBe Ag阴性率为 84 .4 % (5 4 / 6 4 ) ,非 BCP变异组为2 6 .8% (11/ 4 1)。 BCP变异组 HBV DNA含量在 HBe Ag+ 病例 (10 8.79± 0 .85vs 10 7.4 8± 0 .39copy/ ml,P <0 .0 1)及 HBe Ag- 病例(10 8.0 5± 1 .1 6 vs10 6 .55± 0 .91 copy/ ml,P<0 .0 1)中均较非 BCP变异组高。结论 :HBV BCP变异在下调前 c/ c基因表达的同时可能促进 HBV复制 ,对 HBs Ag+ / HBe Ag- 患者需要进一步检测 HBV DNA,以免由于基因变异导致将 HBe

抗-HBe阳性乙型肝炎病毒C基因启动子和前C基因变异

研究抗 -HBe阳性乙型肝炎病毒C基因启动子 (CP)和前C基因变异。用基因序列分析检测基因变异。(1)抗 -HBe阳性患者的前C终止变异 (nt1896G→A)的发生率显著高于抗 -HBe阴性组 (P <0 0 0 1) ;而CP双变异(nt176 2A→T和 176 4G→A)则在两组中无明显差异。 (2 )同抗 -HBe阳性慢性乙肝组比较 ,抗 -HBe阳性重型乙肝患者的前C终止变异和CP双变异发生率无明显差异 ,而CPnt175 2A→G变异发生率则显著增高 (P <0 0 5 )。前C终止变异与抗 -HBe阳性乙型肝炎密切相关 ;而CPnt175 2变异则可能与抗

乙型肝炎病毒C基因启动子变异与白细胞介素10与12、肿瘤坏死因子α、γ-干扰素及病毒含量的关系

目的探讨慢性肝病患者乙型肝炎病毒C基因启动子变异(HBV BCP)与血清白细胞介素10(IL-10)、12(IL-12)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)及病毒含量(HBV DNA)的关系。方法采用PCR微板核酸杂交结合ELISA检测显示技术,对176例HBV慢性感染者(慢性乙型病毒性肝炎轻、中、重度,肝炎肝硬化,慢性重型肝炎和原发性肝癌)血清进行检测HBV BCP区核苷酸(nt)1762碱基A→T和1764碱基G→A联合突变;采用双抗体夹心ELISA检测技术,检测患者血清细胞因子(IL-10、IL-12、TNF-α和IFN-γ)水平。结果HBVBCP变异阳性组、阴性组间对细胞因子(IL-10、IL-12、TNF-α和IFN-γ)及HBV DNA复制水平的影响差异有统计学意义(P<0.05),BCP变异阳性组的血清IL-10(80.96±30.86vs72.11±24.19 mg/L)I、L-12(41.33±15.10vs35.98±14.47 mg/L)、TNF-α(56.04±27.05vs38.01±10.49 mg/L)、IFN-γ(19.81±12.29vs16.55±8.99mg/L)和HBV DNA(108.2478±0.9826vs105.8876±1.4822拷贝/ml)的水平明显高于BCP变异阴性组。结论HBV BCP变异可导致血清IL-10I、L-12、TNF-α、IFN-γ和病毒复制水平增高。

乙型肝炎病毒前C区基因及核心启动子双变异临床研究

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)前C区基因及基本核心启动子(BCP)变异在慢性肝病中出现的规律。揭示HBV前C基因变异及BCP双变异与慢性肝病的病情进展及预后的相关性。方法通过DNA扩增、基因序列分析检测21例慢性乙型肝炎(CHB)、18例肝硬化(LC)和15例肝癌(HCC)血清的HBV前C区和BCP的基因序列。结果前C区终止变异(nt1896G→A)在慢性乙肝重度、中度组中的发生率显著高于慢性乙肝轻度组、肝硬化和肝癌组(75%、42·86%和10%、22·22%、20%)(P<0·01);BCP双变异(nt1762A→T和nt1764G→A)则在肝硬化和肝癌组中的发生率显著高于慢性乙肝组(55·56%、60%和10%、28·57%、25%)(P<0·05)。结论前C区终止变异与慢性肝病病情进展密切相关,BCP双变异促进肝硬化和肝癌的产生。

慢性肝病患者乙型肝炎病毒C基因启动子变异对病毒复制水平及肝功能损害的影响

目的 :探讨乙型肝炎病毒慢性感染 C基因启动子 (BCP)变异对病毒复制水平及肝功能损害程度的影响。方法 :采用PCR微板核酸杂交结合 EL ISA检测显示技术 ,检测 74例乙型肝炎病毒慢性感染者 BCP区核苷酸 (nt) 176 2碱基 A→ T和176 4碱基 G→ A联合突变。结果 :在 74例乙型肝炎病毒慢性感染者中检出 BCP区 T176 2 A 176 4突变 2 4例 (32 .4 % ) ,BCP变异阳性组的 HBVDNA水平 (10 8.2 992± 0 .86 6 5拷贝 / m l)显著高于 BCP变异阴性组的水平 (10 7.1 737± 1 .1 539拷贝 / ml) (P <0 .0 0 1) ;BCP变异组的肝功能损害程度较非变异组明显。结论 :BCP变异可引起 HBV致病力增强 ,复制水平提高 。

乙型肝炎病毒C基因启动子区域T1762 A1764变异的临床及干扰素应答

目的 研究乙型肝炎病毒 (HBV)C基因启动子 (CP)区域T176 2A176 4变异与慢性乙型肝炎病情严重性及干扰素应答的关系。方法 通过聚合酶链反应 (PCR)及其产物直接测序 ,检测 4例无症状慢性HBV携带者 (AsC)、2 7例慢性乙肝病人血清的HBVCP序列 ,并定量检测病人血清的HBVDNA水平。结果 CPT176 2A176 4变异在慢性乙肝病人的发生率为 5 1.9% ( 14 2 7) ,更多的是在病情较重 (肝损害中度以上 )的病例中出现 (P <0 .0 5 ) ,且该变异株具有生存优势。干扰素治疗 3个月后 ,感染该优势变异株的慢性乙肝病人血清HBVDNA拷贝数下降 36 .6± 2 5 .1倍 ,显著高于非变异株病人 ( 2 .5± 2 .1倍 ) ;HBeAg阴转率 ( 75 % )及HBVDNA(斑点法 )阴转率 ( 77.8% )也显著高于对照组 ( 16 .7% ,16 .7% ) ;对 4例变异干扰素组病人 3个月后再次测序 ,有 3例其变异株的生存优势被野生株 (WT)替代。结论 HBVCPT176 2A176

我国常见乙型肝炎病毒基因型与基本核心启动子及前C区突变关系的初步研究

收集81份HBV DNA阳性血清标本,经PCR扩增和序列测定确定其中有50份属于基因型C,31份属于基因型B;C基因型的基本核心启动子BCP T1762/A1764的突变率(38%)明显高于B基因型(12.9%,P<0.05);前C区A1896的突变在B、C两基因型间无显著性差异,B基因型为9.7%,C基因型为12%,P>0.05;HBeAg的表达与否与BCP双突变或前C区A1896突变均无明显相关性。经定量PCR检测证明,HBeAg阳性组中的HBV DNA含量明显高于抗-HBe阳性组,P<0.05。组内BCP双突变株和野生株及前C1896突变株和野生株的HBV DNA含量无显著性差异。

乙型肝炎病毒C基因启动子变异的意义

目的了解Ｃ基因启动子区Ｔ１７６２Ａ１７６４变异对其启动子的影响。方法ＰＣＲ产物直接测序，检测重症乙型肝炎患者乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｃ和Ｃ基因调节序列的Ｔ１７６２Ａ１７６４变异；并将该调节序列插入到氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）表达质粒中，转染ＨｅｐＧ２细胞并瞬时表达，比较Ｔ１７６２Ａ１７６４野株及变异株的Ｃ基因启动小区序列及ＣＡＴ表达水平。结果Ｔ１７６２Ａ１７６４变异在使ＣＡＴ表达下调中起主要作用。结论Ｔ１７６２Ａ１７６４变异使Ｃ基因启动子活性下调中起重要作用。

乙型肝炎病毒C基因启动子变异、HBV DNA及细胞因子与原发性肝癌的关系

目的:探讨乙型肝炎病毒C基因启动子(HBV BCP)变异、HBV DNA及细胞因子与原发性肝癌(HCC)的关系。方法:将176例HBV慢性感染者分为慢性肝病组(156例)和HCC组(20例)。采用PCR微板核酸杂交结合ELISA检测显示技术检测HBV BCP区核苷酸(nt)1762碱基A→T和1764碱基G→A联合突变。并检测两组患者的血清HBV DNA含量及细胞因子白细胞介素-10(IL-10)、IL-12、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)水平。结果:HBV BCP变异在HCC组的阳性率(70.0%)显著高于慢性肝病组(37.8%,P<0.01)。HCC组的血清HBV DNA含量、TNF-α水平均显著高于慢性肝病组(P<0.05,P<0.01),而血清IL-10、IL-12和IFN-γ水平与慢性肝病组无显著性差异(均P>0.05)。结论:HBV BCP变异与原发性肝癌关系密切,且血清TNF-α及HBV DNA复制水平在原发性肝癌的发生中可能也起到主要的作用。

乙型肝炎病毒C基因启动子及前C变异的动态研究

目的：明确乙型肝炎病毒C基因启动子(BCP)与前C变异株在慢性乙型肝炎患者中的动态消长，及与HBeAg血清学状态的关系。方法：对32例慢性乙型肝炎患者的105份系列血清进行错配PCR-限制性片段长度多态性分析。并对其中15例患者系列血清标本的PCR产物进行直接测序。结果：BCP和A83变异株感染率均明显增高(62．5％>46．9％；31．3%>12.5％)；BCP变异株更多地(14／16)表现为优势积累且先于HBeAg血清阴转；BCP野株／变异株比例变化影响HBeAg血清学的稳定性。结论：两种类型的变异株在炎症活动中均具有选择优势，最终造成HBeAg阴性的HBV感染；可能与HBV感染持续有关。

乙型肝炎病毒基本核心启动子和前C基因序列分析

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)基本核心启动子(BCP)区及前C(PreC)区基因的变异情况,并且分析其发生频率、分布规律及其与临床病情的关系。方法应用套式PCR扩增nt1660-1935的HBV DNA片段及PCR产物直接测序的方法检测BCP区及Pre-C区基因的变异情况。结果130例乙型肝炎患者标本中,BCP区nt1762/nt1764发生双突变者75例(57.69%),Pre-C区nt1896发生突变者20例(15.38%),并且这两种突变在重型肝炎组(75.00%)及肝硬化组(72.22%)所占比例均明显高于慢性肝炎组(52.56%);此外,在BCP区及Pre-C/C区还发现了一些突变频率较高的其他突变位点(如nt1753,nt1766,nt1846,nt1899,nt1915),其中nt1753突变仅发生于有nt1762/1764双突变的患者,与重型肝炎及肝硬化的发生有一定关系;在BCP区有4处核苷酸突变共存者10例,其中重型肝炎组(12.50%)及肝硬化组(13.88%)所占比例明显高于慢性肝炎组(5.12%)。结论HBV BCP区nt1762/nt1764双突变和Pre-C区nt1896突变与肝炎的活动、重型化及肝硬化的发生有关;BCP区其他位点的突变共存对肝炎病情的进展也有重要影响。

乙型肝炎病毒C基因及其启动子变异研究进展

本文对近年来导致HBeAs阴性的HBV C基因及其启动子变异的研究进行综述。在发现前C1896G→A变异的基础上发现C区启动子变异。此外,尚有前C起始密码变异,第二密码子变异以及前C 24～27位碱基插入变异。前C/C变异发生率可能与病毒基因型有关,干扰素治疗是否促进前C/C变异发生尚难定论。前C/C及C区启动子变异可能使病毒致病力加强,但并非肝病加重的唯一原因,发生前C/C变异的病毒对干扰素的反应性可能降低。