乙型肝炎病毒C基因型可增加肝细胞癌的风险

据10月《肠》杂志(Gut，2004；53：1494-1498)上的一项报告，感染了乙型肝炎病毒(HBV)C基因型的病人发展为肝细胞癌(HCC)的风险比感染了HBVB基因型的病人更大。

乙型肝炎病毒基因B型及基因C型两种国家标准品研制

目的研制乙型肝炎病毒(HBV)基因B型及基因C型两种国家标准品。方法收集我国不同地区的HBV感染者血浆样品,经HBV五项、DNA病毒检测,从中筛选出11份基因分型标准品候选品样品。经HBV序列测定,进化树分析,初步确定2份样品分别为HBV B型及C型标准品候选品。分别将2份候选品离心、分装后,进行HBV基因分型验证测定,并进行定量的协作标定测定。结果确认筛选出HBV基因B型及基因C型标准品,其HBV DNA浓度分别为4.67×10~7IU/mL(CV为3.6%)及3.66×10^(8)IU/mL(CV为2.9%)。装量检查,大于0.5 mL/支,符合规定。均匀性检查,两者P值分别为0.428(F值为1.140)及0.420(F值为1.173),分装的标准品支与支之间浓度均匀无差异。将两种标准品在不同方式保存(反复冻融、4℃保存、室温及37℃放置)后,测定结果与-80℃保存样品测定结果相比较,绝对偏差均在±0.2的范围内,方差分析P值均大于0.1;另外,-20℃保存12个月后与-80℃保存样品两者测定数据分析,B型P值为0.237(F值为1.934)、C型P值为0.173(F值为2.737),P值均大于0.1,稳定性验证符合规定。结论制备了HBV基因B型及基因C型两种国家标准品,为我国HBV基因分型试剂的质量控制和标准化提供了依据。

兰州地区乙型及丙型病毒性肝炎基因型分布研究

目的探讨兰州地区乙型肝炎病毒(HBV)与丙型肝炎病毒(HCV)基因型分布特点。方法采用PCR-荧光探针法对2018年1月至2023年8月在该院就诊的1130例HBV感染者、1781例HCV感染者进行基因型检测。采用SPSS26.0统计学软件进行数据分析。结果HBV感染者基因型分布以C型最多,为925例(82.0%),其次为B型124例(11.0%);B、C、D基因型间患者性别分布比较,差异无统计学意义(χ^(2)=3.66,P=0.09),而在各年龄段患者中比较,差异有统计学意义(χ^(2)=33.88,P=0.01)。HCV感染者基因型分布主要为2a型930例(52.2%),其次为1b型737例(41.4%);各基因型间患者性别分布比较,差异有统计学意义(χ^(2)=46.31,P=0.01);各年龄段患者1b、2a基因型分布比较,差异有统计学意义(χ^(2)=18.36,P=0.01)。结论在兰州地区病毒性肝炎患者中,HBV C型与HCV 2a型为主要感染基因型;HBV B、C、D型分布与年龄有关;HCV各基因型分布与性别有关,HCV 1b、2a型分布因年龄不同而有差异。

甘肃地区乙型肝炎病毒分型和耐药突变分析

目的 探讨甘肃地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布特征及耐药情况,为乙型肝炎患者抗病毒用药提供指导依据。方法 选择2018年1月至2019年8月于该院就诊的131例乙型肝炎患者,通过Sanger测序法分析患者HBV基因型和耐药突变位点分布情况。结果 131例乙型肝炎患者共检出B、C、D 3种基因型。其中B型2例(1.53%),C型126例(96.18%),D型3例(2.29%)。检出51例核苷酸类似物耐药,总耐药率为38.93%,其中B型1例,C型49例,D型1例。耐药突变位点最多见于M204V/I,多位点突变以M204V/I+M204V联合突变多见,常在此基础上发生3位点、4位点甚至5位点突变。与阿德福韦酯相关的A181V/T、N236T、A181V/T+N236T耐单药突变最常见,共15例(29.41%)。耐多药突变36例(70.59%),主要以拉米夫定和替比夫定联合耐药为主,在此基础上多有恩替卡韦联合耐药发生。结论 甘肃地区HBV患者基因型以C型为主,耐药形势严峻,突变组合模式复杂多样,应及时检测患者HBV基因型及耐药突变位点,以评价乙型肝炎患者临床疗效,并指导临床抗病毒治疗合理用药。

不同基因型牛病毒性腹泻病毒对BALB/c小鼠致病性研究

牛病毒性腹泻病毒(BVDV)是危害养牛业的重要病原。2021年本实验室从患有肺炎的牛肺中分离出1株BVDV(毒株编号为JS2201),经鉴定为1b亚型。为了评价该分离株的毒力与致病性,分别建立了分离株与参考株BVDV-1型Oregon C24V株、BVDV-2型C1602株BVDV感染BALB/c小鼠模型,通过检测攻毒后小鼠临床症状、体重变化、病毒血症情况、血液中白细胞与淋巴细胞的变化、组织器官的病理组织学变化及病毒载量,比较了分离株JS2201与1型和2型参考株的致病性差异。结果显示:BVDV分离株JS2201与参考株均能够成功感染BALB/c小鼠,攻毒BALB/c小鼠均形成病毒血症,导致血液中白细胞数量、淋巴细胞数量以及淋巴细胞百分比短暂下降;BVDV分离株JS2201株攻毒组小鼠肝脏、肾脏、肺脏、脾脏中BVDV载量要高于C24V、C1602株攻毒组;攻毒组小鼠均表现为间质性肺炎病变,JS2201株攻毒组与1型参考株C24V株攻毒组小鼠肺脏病理组织学变化相似,BVDV-2型参考株C1602株攻毒组小鼠肺脏病变更为严重。综上,本研究成功建立了不同亚型BVDV急性感染BALB/c小鼠的模型,且比较分析了分离株与参考株之间的致病性差异,为BVDV疫苗的研制以及致病机制的研究奠定了基础。

基因Ⅳ型禽呼肠孤病毒σC蛋白单克隆抗体的制备及功能鉴定

为制备基因Ⅳ型(GCⅣ)禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)σC蛋白单克隆抗体,构建了重组原核表达质粒pCold-I-ARV-GCⅣ-σC,将重组质粒导入感受态细胞BL21(DE3)中进行蛋白诱导表达;随后将纯化后的σC蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,利用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选获得阳性杂交瘤细胞;以间接免疫荧光(IFA)和蛋白免疫印迹(Western blot)试验鉴定杂交瘤细胞后,将杂交瘤细胞株通过腹腔注射小鼠制备单克隆抗体腹水,以ELISA测定腹水效价。结果显示:成功筛选出一株分泌ARV GCⅣσC蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株(1H4);制备的单克隆抗体能与ARV GCⅣσC蛋白发生反应,同时与感染不同基因型ARV的鸡肝癌细胞(LMH)均有良好的反应性;该单克隆抗体识别重链为IgG1,其腹水ELISA效价为1:256000。结果表明,成功制备ARV GCⅣσC蛋白单克隆抗体,其效价高,反应性良好,为进一步研究σC蛋白功能、ARV致病机理以及建立临床诊断方法奠定了基础。

西藏地区CHB抗病毒初治患者乙肝病毒基因分型及基因突变情况的分析

目的 分析西藏地区CHB抗病毒初治患者乙肝病毒基因型及其突变情况。方法 选取2021年12月~2022年12月在我院感染门诊就诊的慢性乙型肝炎(CHB)初始抗病毒治疗患者共48例,采用Sanger测序法检测HBV的9个基因型(即A-I),同时检测HBV核苷类似物耐药相关的22个位点,比较不同基因型组HBV-DNA定量水平、HBeAg阳性率、肝硬化或肝癌发生率、基因突变率的情况,根据基因突变情况指导临床抗病毒药物选择及预测疾病预后。结果HBV基因分型:HBV B基因型2例(4.2%),C基因型33例(68.7%),D基因型13例(27.1%);B型均为HBeAg阴性感染且基因突变率100%,C型与D型HBeAg阳性率分别为78.8%、84.6%,基因突变率为18.2%、30.8%;C型肝硬化或肝癌发生率为9.1%,D型为15.4%。结论 通过CHB患者的HBV基因分型及耐药突变检测分析,为临床抗病毒治疗药物选择提供参考依据,可预测患者的预后。

乙型肝炎病毒C基因启动子和前C基因变异与HBeAg含量和肝炎病情的临床研究

研究乙型肝炎病毒(HBV)C基因启动子(CP)和前C基因变异对HBeAg表达和病情的影响。通过DNA扩增、基因序列分析检测48例慢性乙肝和12例慢性重型乙肝患者血清的HBV CP和前C基因序列,及通过微粒子发光法定量检测血清中HBeAg的含量。(1)前C终止变异(nt1896G→A)在重型乙型肝炎病例中的发生率显著升高(66.7％);CP双变异(nt1762A→T和1764G→A)则在慢性乙型肝炎中度和重度的病例中的发生率显著升高(分别为52.6％和54.5％)。(2)双变异组和终止变异组的HBeAg含量均显著下降,P<0.01。但终止变异组HBeAg含量的下降较双变异组更为明显,P<0.05,且eAb阳性率也显著升高,P<O.05。终止变异联合双变异组的HBeAg含量及eAb阳性率同终止变异组相近。前C终止变异对HBeAg表达的影响较CP双变异更大,对肝炎病情的影响也更明显。

乙型肝炎病毒前C/C基因准种与变异特点的研究

以乙型肝炎病毒 (HBV)前C/C基因异质性来探讨在慢性感染者体内是否存在HBV准种。以中国株HBV基因序列为依据 ,设计特异性多聚酶链反应 (PCR)引物 ,自 4例慢性HBV感染患者血清中扩增HBV前C/C基因序列 ,克隆入pGEMTeasy载体 ,每例患者挑选 5个克隆测序以比较病毒的变异程度。测序结果发现同一患者前C/C基因碱基序列之间的同源性大于 98% ,但存有G83→A替换、C抗原内部缺失、移框突变等多种变异类型。结果提示 ,HBV长期携带者体内有HBV准种共存 ,推测前C/C区的多种变异可能与感染慢性化有关。

乙型肝炎病毒C基因启动子区异质性检测初步研究

目的 以乙型肝炎病毒 (HBV)C基因启动子 (CP)变异来探讨HBV准种的存在意义。方法 设计特异性多聚酶链反应 (PCR)引物 ,自 9例慢性HBV感染患者外周血血清中扩增HBVCP序列 ,克隆入pGEMTeasy质粒 ,随机挑选 37个克隆进行DNA测序以确定病毒的变异程度。结果 测序发现HBVCP序列是变异的高发区 ,在直接重复序列 (DR)I上游存有一缺失突变高发 (48 7% ,18/37)区 ,缺失突变与替换突变在TATA样盒TA2、TA3区发生率较高 ,而TA4极为保守。结论 CP区内有一缺失高变区 ,TA2、TA3的变异影响前C蛋白的表达 ,但该区的变异不影响前基因组RNA的转录。结果提示 。

中国乙型肝炎病毒B基因型、C基因型与干扰素疗效的关系

探讨中国乙型肝炎病毒基因型与干扰素α疗效的关系。用PCR -限制性酶切片段长度多态性方法分析乙型肝炎病毒基因型 ,并研究 1998 1～ 2 0 0 2 4南方医院门诊和住院慢性乙型肝炎患者的一般人口学、ALT、HBVDNA、肝脏活检组织病理以及干扰素治疗效果。B基因型 70例 ,C基因型 6 0例 ,两基因型间一般人口学、ALT、HBVDNA、肝脏活检组织病理无统计学差异 ,干扰素治疗效果同样没有显著性差异。HBVB、C基因型感染的慢性乙型肝炎患者临床无统计学差异 。

慢性重型乙型肝炎患者的乙型肝炎病毒C基因启动子和前C基因变异及与e抗原系统的关系

目的 研究慢性重型乙型肝炎患者血清的HBVC基因启动子 (CP)和前C基因变异情况。方法 通过DNA扩增、基因序列分析检测 75例慢性乙型肝炎 (CHB)和 14例慢性重型乙肝 (CSH)患者血清的HBVCP和前C基因序列 ,通过微粒子发光法定量检测血清中HBeAg的含量及通过荧光定量PCR技术定量检测血清中的HBVDNA。结果 (1)前C终止变异 (nt1896G→A)在CSH组中的发生率显著高于CHB组 (71 4 %和 2 6 7% ) ;CP双变异 (nt 176 2A→T和 176 4G→A)则在CSH组和CHB组的发生率无显著差异 (4 2 9%和 4 8 0 % )。 (2 )CSH组的HBeAg含量显著低于CHB组 ;CSH组的HBeAb阳性率则显著高于CHB组 (71 4 %和 32 0 % )。 (3)CSH组和CHB组的HBVDNA定量则无明显差异。结论 前C终止变异 ,对e系统有明显影响 ,与CSH的发病有关。

乙型肝炎病毒c基因启动子变异与血清HBeAg及HBV DNA的关系

目的 :研究乙型肝炎病毒 (HBV ) c基因启动子 (BCP)变异与 e抗原及 HBV DNA含量的关系。方法 :采用错配引物聚合酶链反应 (PCR) -限制性片段长度多态性 (RFL P)分析及荧光定量 PCR(FQ- PCR)对 10 5例血清 HBV DNA阳性 HBV感染者进行 HBV BCP基因变异及 HBV DNA定量测定。结果 :BCP变异组 HBe Ag阴性率为 84 .4 % (5 4 / 6 4 ) ,非 BCP变异组为2 6 .8% (11/ 4 1)。 BCP变异组 HBV DNA含量在 HBe Ag+ 病例 (10 8.79± 0 .85vs 10 7.4 8± 0 .39copy/ ml,P <0 .0 1)及 HBe Ag- 病例(10 8.0 5± 1 .1 6 vs10 6 .55± 0 .91 copy/ ml,P<0 .0 1)中均较非 BCP变异组高。结论 :HBV BCP变异在下调前 c/ c基因表达的同时可能促进 HBV复制 ,对 HBs Ag+ / HBe Ag- 患者需要进一步检测 HBV DNA,以免由于基因变异导致将 HBe

乙型肝炎病毒B、C基因型与乙肝临床特征的相关性

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)B、C基因型与乙肝临床表现与转归的关系。方法对300例乙肝患者进行B、C基因型检测,比较这两种基因型的临床差异,并对影响乙肝的各种因素进行Logistic回归分析。结果在肝硬化、肝癌组中C基因型构成比和HBeAg阳性率显著高于B型(P分别为0、0.01);两种基因型在患者年龄、性别、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平及HBV含量上的差异无统计学意义(P>0.05);Logistic回归分析表明,C基因型肝癌的发生率是B型的5.43倍(OR=5.43,P=0.01)。结论 HBV基因型是乙肝临床转归的重要因素之一。与B基因型比较,C型HBeAg阴转率较低,更容易导致严重的肝病。

乙型肝炎病毒C基因启动子和前C基因变异对HBeAg表达及病情的影响

目的研究乙型肝炎病毒 (HBV)C基因启动子 (CP)和前C基因变异对HBeAg表达和病情的影响。方法通过DNA扩增、测序检测乙型肝炎患者的HBVCP和前C基因序列 ,通过微粒子发光法和荧光定量PCR技术定量检测血清中的HBeAg和HBVDNA。结果 (1 )前C终止变异在重型乙型肝炎病例中的发生率显著升高 ;CP双变异在慢性乙型肝炎中度和重度病例中的发生率显著升高。 (2 )双变异组和终止变异组的HBeAg含量均显著下降 ,而后者下降更明显 ,且e抗体阳性率显著升高 ;而终止变异联合双变异组的HBeAg含量及e抗体阳性率与终止变异组相似。(3)双变异组、终止变异组和对照组之间的HBVDNA定量无明显差异。结论前C终止变异对HBeAg表达的影响较CP双变异更大 。

肝细胞癌患者B和C基因型乙型肝炎病毒X蛋白的变异特点

背景与目的X蛋白是乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)最重要的致病因子之一,它在HBV相关性肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)的发生发展中起着重要作用。目前已知B、C基因型HBV相关性HCC的临床及病理表现不尽相同,但目前尚不清楚这种差别是否与B、C基因型HBVX基因之间的差别有关。因此本实验拟研究B、C基因型间HBVX蛋白氨基酸差异及其在HCC患者中的变异及特点,初步探讨其与HCC发生、发展的关系。方法PCR扩增22份乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性HCC患者血清HBVX基因,克隆、测序并以VectorNTI6.0软件分析其基因型。以DNAMAN软件对标准HBV及HCC来源的HBVX蛋白进行氨基酸同源分析。结果检测的22个HBVX基因片段均属于B或C基因型。B、C基因型HBVX蛋白之间存在14个氨基酸的差异,HCC患者来源的B、C型HBVX蛋白存在4个氨基酸的共有变异,C型HBVX蛋白尚有6个型特异性变异。这些差异或变异氨基酸均位于X蛋白B、T细胞表位或反式激活区及调节区内。结论B、C基因型HBVX蛋白之间存在氨基酸差异,且在HCC中发生基因型特异性变异,这些差异或变异氨基酸可能导致X蛋白免疫学功能及反式激活功能的不同。

抗-HBe阳性乙型肝炎病毒C基因启动子和前C基因变异

研究抗 -HBe阳性乙型肝炎病毒C基因启动子 (CP)和前C基因变异。用基因序列分析检测基因变异。(1)抗 -HBe阳性患者的前C终止变异 (nt1896G→A)的发生率显著高于抗 -HBe阴性组 (P <0 0 0 1) ;而CP双变异(nt176 2A→T和 176 4G→A)则在两组中无明显差异。 (2 )同抗 -HBe阳性慢性乙肝组比较 ,抗 -HBe阳性重型乙肝患者的前C终止变异和CP双变异发生率无明显差异 ,而CPnt175 2A→G变异发生率则显著增高 (P <0 0 5 )。前C终止变异与抗 -HBe阳性乙型肝炎密切相关 ;而CPnt175 2变异则可能与抗

慢性乙型肝炎病毒基因型与BCP区变异的临床研究

为了研究乙型肝炎病毒 (HBV)基因型与C基因启动子 (BCP)基因变异的关系 ,对 6 9例慢性乙型肝炎患者分别用聚合酶链反应 (PCR)—限制性片段长度多态性 (RFLP)技术和PCR微板核酸分子杂交技术 ,进行基因分型及HBVBCP基因变异检测。在 6 9例慢性乙型肝炎患者中 ,各基因型发生的BCP区A176 2T/G176 4A双突变分别为C型 18例 (4 3 9% )B型 3例 (16 7% )D型 2例 (2 0 % )。C型的BCP双突变率明显高于B型 ,两者相比有显著性差异(P <0 0 5 )。故可以认为乙型肝炎病毒基因型与BCP区双突变存在有一定的相关性。推测A176 2T/G176

乙型肝炎病毒中国流行株B、C、D/C及A基因型的全基因克隆与序列分析

目的:扩增克隆乙型肝炎病毒(HBV)B,C,D/C及A基因型的全基因组,构建不同基因型的全基因序列克隆.方法:从中国慢性乙型肝炎患者血清提取DNA以L-PCR技术对3.2kb的HBVDNA进行扩增,纯化后克隆到TA载体.对于HBV不同基因型的全基因序列利用Simplot、DNAStar(ClustalW方法的MegAlign和Phylogenetictree)等生物软件进行分析.结果:克隆出我国主要存在的几种HBVDNA全基因序列:B、C、D/C和A基因型,包括:adr、adw、ayw血清型.B基因型(adw血清型)全基因序列长度为3215bp,C基因型(adrq+血清型)为3215bp,D/C基因型(ayw2血清型)为3215bp,A基因型(adw血清型)为3182bp,均递交GenBank.在H3样品中的4个全基因克隆中存在一个同时含有2853-2885nt缺失突变和核心区的1762A-T、1764G-A双位点突变的变异株,表明同一个体中同时存在突变株和野生株,可能是耐抗病毒药物的分子基础.结论:本研究克隆了我国有报道存在的主要基因型、血清型的HBV全基因序列,为全面了解我国HBV基因型和血清型提供了序列资料.

乙型肝炎病毒C基因启动子双变异患者中医证型特点研究

目的:探讨HBVC基因启动子(BCP)双变异慢性乙型肝炎患者的中医证型特点。方法:选择HBsAg阳性慢性乙型肝炎患者168例进行观察。中医证型分为湿热中阻、肝郁脾虚、肝肾阴虚、瘀血阻络、脾肾阳虚5型;BCP双变异检测,采用微板核酸杂交法。结果:BCP双变异的总检出率为36·31%(61/168),其中,湿热中阻型BCP双变异检出率最高(54·24%),与其他各型比较差异均有显著性意义(P<0·052);肝郁脾虚型BCP双变异检出率(36·36%)虽低于湿热中阻型(P<0·025),但却明显高于肝肾阴虚型(13·04%)及瘀血阻络型(10·53%),且差异有显著性意义(P<0·05);肝肾阴虚与瘀血阻络两型BCP双变异检出率均较低,两者比较差异有显著性意义(P>0·05)。结论:HBVBCP双变异的慢性乙型肝炎患者中医证型特点以湿热中阻为主,肝郁脾虚居次,临床治疗要重视清热利湿,舒肝健脾治法或方药的选用。