脂血、高胆红素和溶血标本对乙型肝炎病毒DNA荧光定量测定结果的影响

目的:探讨脂血、高胆红素、溶血标本对乙型肝炎(乙肝)病毒DNA荧光定量测定结果产生的影响。方法:通过分组实验,观察对比正常血清与高血脂血清、未溶血血清与溶血血清、无黄疸血清与黄疸血清标本乙肝病毒DNA荧光定量测定结果,分析其对测量结果的影响程度。结果:不同浓度脂血对乙肝病毒DNA荧光测定结果影响明显,差异有统计学意义(P<0.05);血清是否溶血以及存在黄疸对乙肝病毒DNA荧光测定结果基本无影响,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:脂血会影响乙肝病毒DNA荧光测定结果,高胆红素与溶血则不会。

乙型肝炎病毒DNA实时荧光定量研究进展

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒感染所引起的急慢性传染性疾病,病原体是一种DNA病毒,所以乙型肝炎病毒DNA定量的检测是乙肝的核酸检测,也是一种量化的检测方式。病毒DNA定量的高低和体内病毒含量的多少呈正相关,同时也可反映乙肝的传染性强弱,病毒DNA定量越高,病毒复制越活跃,传染性越强。乙型肝炎病毒DNA定量的检测一般采用PCR(实时荧光定量)的方法,不同的疾病状态下,病毒定量的水平高低不相同,本文通过综述实时荧光定量检测乙肝病毒的情况,并了解后续诊断与预后。

高血脂、肝素对乙型肝炎病毒DNA实时荧光定量PCR测定干扰机制的探讨

目的探讨高血脂、肝素对乙型肝炎病毒基因实时荧光定量PCR(HBVDNA-FQ-PCR)测定的干扰机制。方法将己经确诊的乙肝大三阳志愿者的高脂血和非脂血、肝素抗凝血和未抗凝血用实时荧光定量PCR做HBVDNA定量测定并同时做定性测定,另外将同一份乙肝大三阳标本五种不同浓度肝素抗凝,另一份不抗凝,然后分别用HBVDNA-FQ-PCR和琼脂糖凝胶电泳-溴乙锭显色法做HBVDNA定量和定性测定。结果5份非脂血和相应的高脂血HBVDNA定量结果有非常显著性差异(P<0.01),定性结果两者没有差异全部为阳性(5/5)。5份用1 500 U/ml肝素抗凝血HBVDNA定量结果都为0,定性结果都为阴性,而相应未抗凝血定量结果分别为6.35E+8,5.21E+6,7.05E+8,2.98E+7,6.33E+6,定性结果肝素抗凝和未抗凝标本都为阳性(5/5)。五种不同浓度肝素抗凝标本的HBVDNA定量结果,当肝素浓度大于1 000 U/ml时定量结果为0,肝素浓度小于100 U/ml对HBVDNA-FQ-PCR测定结果影响不大,相应的对照HBVDNA拷贝数为7.32+8E,不同浓度肝素抗凝标本的HBVDNA定性结果,当肝素浓度大于500 U/ml为阴性,小于100 U/ml为阳性。结论高血脂对HBVDNA实时荧光定量PCR的干扰机制主要是血液中的低密度脂肪(乳糜微粒等)对荧光的屏蔽或吸收作用,肝素对HBVDNA实时荧光定量PCR的干扰机制是肝素对Taq酶的抑制作用。

乙型肝炎病毒DNA荧光定量PCR的建立与应用

目的 建立血浆 (血清 )HBVDNA荧光定量PCR检测方法 ,探讨其临床应用价值。方法 用PUCm T载体和PCR纯化产物连接 ,转染DH5α菌 ,筛选阳性菌落 ,提取质粒 ,制作外标准品 ;在HBV基因组S区设计一对引物和TaqMan探针 ,严格优化反应物的组成和扩增条件 ,并对该方法进行评价。结果 建立的HBVDNA荧光定量PCR最低可检出 80 0拷贝 /ml;批内误差为 1 8%～ 6 5% ,批间误差为 2 6 %～ 9 1 % ;在 1 0 4 ～ 1 0 11拷贝 /ml之间与Ct值具有很好的线性 (Ct =- 1 .391 1ln(X) +4 1 .6 5,r =- 0 .9958) ;外周血HBVDNA临床定量检测发现 ,HBeAg阳性的 1 30例中 ,HBVDNA阳性率为 1 0 0 % ,含量为1 0 6 89± 1.6 9拷贝 /ml,抗HBe阳性的 96例中HBVDNA阳性率为 55 2 % ( 53/ 96 ) ,含量为 1 0 4 .0 9± 1.19拷贝 /ml;6 2例献血员未检出HBVDNA。乙肝临床治疗监测发现 ,外周血中HBVDNA含量检测可有效反映治疗效果 ,指导临床用药。结论 荧光定量PCR检测方法是一种相对准确、灵敏度高、特异性较强和较简便的HBVDNA定量检测技术 ,对乙肝诊断。

不同状态乙型肝炎病毒感染患者血清中HBV DNA定量聚合酶链反应测定

目的 :采用荧光定量聚合酶链反应 (FQ -PCR)测定不同状态乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒 (HBV)的载量 ,为乙型肝炎的临床诊断、病程判断和治疗提供参考。方法 :采用实时定量PCR方法 ,检测不同病程状态的乙肝患者血清样本 1 90份 ,其中HBeAg阳性的慢性乙型肝炎 (CHB)患者 2 5例 4 7份样品 ,HBeAg阴性的 4例CHB患者 4份样品 ,接受α-干扰素治疗后发生HBeAg血清学转归的患者 5例 4 0份样品 ,非活动性HBV携带者 37例 5 7份样品。由CHB康复患者 2 1例 4 2份样品。结果 :HBeAg阳性的CHB血清中HBVDNA水平为 8.3× 1 0 8拷贝 /ml,明显高于HBeAg阴性的CHB患者 (7.0× 1 0 6拷贝 /ml)和HBeAg血清转归患者HBVDNA水平 (6 .2× 1 0 3 拷贝 /ml)以及非活动性HBsAg携带者HBVDNA水平 (5 .6× 1 0 3 拷贝 /ml)。乙型肝炎康复者中未检出HBVDNA。结论

荧光定量PCR检测HBV DNA与乙型肝炎病毒标志物的关系

目的 :探讨乙型肝炎病毒DNA(HBVDNA)的检出情况及与乙型肝炎病毒标志物的关系。方法 :采用荧光定量 -聚合酶链反应 (FQ -PCR)技术检测 2 73例患者血清中HBVDNA含量 ,同时用ELISA法检测乙型肝炎病毒五项标志物。结果 :2 73例患者血清中 ,HBVDNA的阳性率与乙型肝炎病毒标志物不同组合之间有差异。HBsAg +/HBeAg +/HBcAb +和HBsAg +/HBeAg +组的阳性率明显高于其它组 ,分别达 97.5 2 %( 118/ 12 1)和 10 0 % ( 9/ 9) ;HBsAg +/HBeAb +/HBcAb +组的阳性率为 6 1.33 % ( 46 / 75 ) ;HBsAg +/HBcAb +组的阳性率为 6 6 .6 7% ( 2 0 / 30 ) ;其它组也有HBVDNA检出 ,其中HBsAb +组的阳性率达 15 .38% ( 2 / 13)。结论 :用ELISA法检测乙型肝炎病毒五项标志物来判断肝脏中HBV是否复制及有无传染性是不够的 ,容易造成漏诊 ,应同时用荧光定量PCR检测HBVDNA才能更准确地反映体内HBV复制的情况。

荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的临床价值

目的:探讨荧光定量PCR(FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒(HBV)-DNA的临床意义。方法:采用FQ-PCR检测265例乙型肝炎(乙肝)患者和150名健康体检者的血清HBV-DNA,并将结果与酶联免疫吸附试验测定的乙肝血清标志物进行比较。结果:不同血清标志物模式的各组均可检出HBV-DNA阳性,其中HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性组和HBsAg、HBeAg阳性组的HBV-DNA阳性率和病毒拷贝数均显著高于其他血清标志物模式组和对照组(P<0.01)。HBV所致不同疾病类型的HBVDNA阳性率差异均无统计学意义(P>0.05),但急性乙肝病毒拷贝数均明显高于其他疾病(P<0.01)。结论:FQ-PCR检测HBV-DNA可以直接反映是否存在HBV感染,判断病毒的复制能力和传染性,指导临床用药和观察疗效,具有重要的临床意义。

实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的临床应用价值

目的 :探讨实时荧光定量PCR(FQ PCR)检测乙型肝炎病毒DNA的临床应用价值。方法 :采用FQ PCR方法检测1 96例患者血清中HBV DNA。结果 :1 1 2例HBeAg(+) /HBeAb(- )标本中FQ PCR均阳性 ,HBV DNA拷贝数 1 .0 8× 1 0 7/ml;6 8例HBeAg(- ) /HBeAb(+)标本中 ,平均拷贝数 6 .1 2× 1 0 5/ml,其阳性率为 6 6 .2 % ;1 6例HBeAg(- ) /HBeAb(- )标本中 ,平均拷贝数为 2 .72× 1 0 4/ml。结论 :实时FQ PCR可以实现准确定量 。

应用竞争性荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA

目的:建立竞争性荧光定量聚合酶链反应(CFQ-PCR),并探讨CFQ-PCR在乙型肝炎病毒(HBV)临床检测中的意义.方法:根据HBV病毒adr亚型基因组序列合成一对HBV特异的引物,和一条特异的TaqMan探针;根据上述引物序列,采用分子克隆技术制备内对照DNA;再根据内对照序列合成一条内对照DNA特异的与上述TaqMan探针不同标记的TaqMan探针;将适量的内对照DNA加入到PCR反应体系中,使其与HBV靶序列共扩增.结果:在30μL CFQ-PCR反应体系中,加入约20拷贝内对照DNA能够稳定地获得共扩增曲线;经琼脂糖凝胶电泳分析,加入约100-500拷贝内对照DNA能够有效地获得共扩增产物条带信号;在210个临床HBsAg阳性血清标本的CFQ-PCR扩增中识别出8个未能有效扩增的标本,60份HBsAg阴性血清标本中识别出2个内对照未能有效扩增的标本,后经DNA纯化处理,上述全部标本的内对照均获得阳性扩增结果,其中有7个HBsAg阳性血清标本获得HBV DNA扩增阳性结果.结论:CFQ-PCR能够有效地提示临床标本HBV DNA体外扩增时由于扩增失败导致的假阴性,适合临床推广应用.

实时跟踪荧光PCR定量检测乙型肝炎病毒DNA的临床意义

目的探讨实时跟踪荧光PCR定量检测乙型肝炎病毒DNA临床价值。方法对2 367例临床血清标本用FQ-PCR方法进行HBV-DNA定量测定,并和ELISA两对半以及ALT结果进行比较。结果HBV-DNA阳性率为60.9%(1 442/2 367),其中大三阳HBV-DNA检出率为89.04%(845/949)、ALT升高47.84%(454/949)、小三阳HBV-DNA检出率为39.08%(408/1 044)、ALT升高33.42%(349/1 044)、单HBSAg63.8%(185/290);单抗HBe HBV-DNA检出率4.54%(1/22)。结论实时跟踪定量检测的荧光定量PCR技术可以检测HBV的真实感染和复制情况是乙型肝炎病毒复制和传染性的直接病原学依据。

荧光定量PCR法检测乙型肝炎病毒DNA

目的 :了解不同乙型肝炎病毒 (HBV)感染患者血清HBV -DNA含量与乙肝血清免疫标志物的关系并探讨其临床意义。方法 :用荧光定量聚合酶链反应 (FQ -PCR)方法定量检测 375例不同临床类型HBV感染者及 70例正常人血清HBV -DNA含量。结果 :血清HBsAg阳性组与HBeAg阳性组HBV -DNA的检出率及含量均明显高于HBsAg阴性组和HBeAg阴性组 ,且HBeAg即使阴性 ,不论HBeAb阳性组或阴性组均仍有较高的HBV -DNA检出率。不同临床类型HBV感染者中均有HBV -DNA的检出。结论 :定量PCR可真实反映HBV感染、复制及病程变化 ,对乙型肝炎临床诊断及治疗均有一定的临床意义。

实时荧光PCR检测乙型肝炎病毒DNA的临床应用价值探讨

目的分析临床乙型肝炎病毒DNA检测中应用实时荧光PCR的价值。方法选择2021年10月至2022年6月67例乙型肝炎病毒感染患者,均实施实时荧光PCR检测,分析诊断情况。结果经67例乙型肝炎病毒感染患者检测,确诊数量为50例(74.62%),其中误诊为10例(14.92%),漏诊7例(10.44%)。在影响肝炎DNA实时荧光PCR检测的因素中,样本的抗凝状态作用最大,其次是样本储存、实验室条件、溶血和血脂以及核酸分离方法。结论实时荧光PCR检测乙型肝炎病毒DNA的临床应用价值高,但可能面对一定的误诊和漏诊情况,临床需要在多角度给予预防和管理。

荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的临床意义

乙型肝炎病毒（HBV）引起的传染病称为乙型肝炎.我国是乙型肝炎高发国家,人群累计感染率〉10%[1].HBV血清标志物检测是常用的方法之一,而酶联免疫吸附试验（ELISA）只能提供阴、阳性判断结果,不能提供病毒的具体载量.而对HBV-DNA进行定量检测能直接了解HBV在体内的复制情况及传染性程度,并能对治疗效果、耐药性及是否复发进行动态监测.笔者对538份血清标本的HBV-DNA检测结果与其HBV血清标志物检测结果进行了对比分析,现报道如下.

实时荧光定量PCR检查在献血者乙型肝炎病毒核酸检测中的应用

目的探究献血者乙型肝炎病毒(HBV)核酸检测中,实时荧光定量PCR检查的应用价值。方法选取2022年10月至2023年9月宁德市中心血站10403份献血者标本,对其进行乙型肝炎病毒检测。ELISA检测用A、B两种不同试剂进行初检、复检,对检测阴性的血液标本进一步行核酸检测。结果经ELISA检测,A试剂初检乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性率为0.57%(59/10403);B试剂复检HBsAg阳性率为0.65%(68/10403)。对阴性血液标本进一步核酸检测,A试剂初检HBsAg阴性标本的阳性率为0.261%(27/10344);B试剂复检HBsAg阴性标本的阳性率为0.174%(18/10335)。结论献血者HBV检测使用核酸检测有助于提高血液筛查的准确性,保障用血安全。

酶联免疫吸附测定法和实时荧光定量PCR法对乙型肝炎的诊断价值比较

目的比较酶联免疫吸附测定法和实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法在乙型肝炎诊断中的应用价值。方法选取120例疑似乙型肝炎患者作为本次研究对象,分别进行酶联免疫吸附测定法以及实时荧光定量PCR法检验。以病理检查为金标准,分析酶联免疫吸附测定法和实时荧光定量PCR法的检查结果,对比两种检查方法的诊断效能,包括特异度、灵敏度以及准确度。结果120例疑似患者经病理检查确诊75例为乙型肝炎。酶联免疫吸附测定法检出阳性74例,阴性46例;实时荧光定量PCR法检出阳性75例,阴性45例。实时荧光定量PCR法检测乙型肝炎的特异度、灵敏度以及准确度分别为93.33%、96.00%、95.00%,均明显高于酶联免疫吸附测定法的73.33%、82.67%、79.17%,差异有统计学意义(χ^(2)=6.4800、6.9963、13.3724,P<0.05)。结论采用实时荧光定量PCR法进行乙型肝炎的检测具有较高的准确率,可以为医生诊断和治疗方案的制定及调整提供良好的依据。

FQ-PCR检测乙型肝炎病毒DNA与时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项在乙肝诊断中的应用价值

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒(HBV)-DNA与时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项在乙肝诊断中的应用价值。方法选择2021年1月至2023年10月本院接收的82例疑似乙肝患者作为研究对象,均通过FQ-PCR实施HBV-DNA检测,同时予以时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项[乙肝病毒核心抗体(HBcAb)、乙肝病毒e抗体(HBeAb)、乙肝病毒e抗原(HBeAg)、乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体(HBsAb)],并分析检测结果。结果82例患者中,HBV-DNA阳性率为70.73%(58/82)。82例患者中,组合A(HBcAb+HBeAg+HBsAg阳性)占比91.46%(75/82),组合B(HBeAb+HBsAg阳性)占比63.41%(52/82),组合C(HBcAb+HBeAb+HBsAg阳性)占比37.80%(31/82),组合D(HBcAb+HBeAb+HBsAb阳性)占比6.10%(5/82),组合E(HBeAg+HBsAg阳性)占比64.63%(53/82)。组合A、组合B、组合C、组合D、组合E中HBV-DNA阳性率分别为53.33%(40/75)、7.69%(4/52)、29.03%(9/31)、40.00%(2/5)、5.66%(3/53),组合A中HBV-DNA阳性率均高于其他各项组合,差异具有统计学意义(P<0.05)。FQ-PCR检测HBV-DNA联合时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项诊断乙肝的准确度、灵敏度高于单独FQ-PCR检测HBV-DNA及时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论在乙肝诊断中,FQ-PCR检测HBV-DNA与时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项各具优势,积极联合应用有助于进一步提升诊断效能。

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA及其与血清标志物的关系探讨

目的 用荧光定量聚合酶链反应 (fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ- PCR)方法定量检测血清中乙型肝炎病毒 (hepatitis B virus,HBV)的数量及探讨其与 HBV标志物 (HBV M)表现模式的关系 ,以指导临床。方法 共 2 4 4份临床血清标本 ,HBV DNA定量采用荧光定量 PCR分析系统 ,HBV M采用 EL ISA法。结果 经 FQ- PCR检测 ,99例 HBs Ag(+) / HBe Ag(+) / HBc Ab(+)的标本 ,其血清标本 HBV DNA亦全部阳性 ,平均 HBV DNA拷贝数为 1.82× 10 7copies/ ml;96例 HBs Ag (+) / HBe Ab (+) / HBc Ab (+)的标本 ,其 HBV DNA检出率为 6 6 .7% (6 4例 ) ,平均拷贝数为 1.82× 10 4 copies/ m l;11例 HBs Ag (+) / HBc Ab (+)的标本其 HBV DNA检出率为 6 3.6 % (7例 ) ,平均拷贝数为 7.94× 10 4 copies/ ml。结论 血清 HBV DNA水平与 HBV M表现模式有关 ,HBs Ag (+) / HBe Ag (+) / HBc Ab (+)的标本 HBV DHA值显著高于 HBs Ag (+) / HBe Ab (+) / HBc Ab (+)的标本和 HBs Ag (+) / HBc Ab (+)的标本 ,提示 HBs Ag与 HBe Ag的存在影响 HBV DNA水平。 FQ- PCR能实现准确定量 ,可以检测 HBV的真实感染和复制情况 ,对于乙型肝炎的临床诊断。

荧光定量PCR检测HBV DNA与乙型肝炎病毒标志物的关系探讨

目的用FQ-PCR的方法检测血清中HBV DNA的载量,探讨其与HBV-M的关系及临床意义。方法采用FQ-PCR技术检测254例患者血清中HBV DNA载量,同时用ELISA法检测乙型肝炎病毒五项标志物。结果血清HBV DNA载量与HBV-M有关。第1组(HBsAg阳性、HBeAg阳性、HBcAb阳性)与其它各组(HBeAg阴性)比较,阳性率、HBV DNA载量差异均有显著性(P<0.01)。结论HBV DNA载量与HBV-M检测相结合,才能准确了解乙型肝炎患者的病情,以指导临床诊治。

荧光定量PCR检测358例乙型肝炎病毒DNA结果分析

目的用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)定量检测血清中乙型肝炎病毒的数量以研究其临床价值。方法采用一种完全闭管式的PCR和荧光探针杂交技术相结合的实时检测定量PCR方法来检测358份临床血清标本。结果123份HBsAg,HBeAg,HBcAb阳性的标本,阳性率为96.7%(120例),平均拷贝数为1.8×108/ml;108份HBsAg,HBeAg,HBcAb阳性的标本其阳性率为39.8%(43例),平均拷贝数为6.6×105/ml;11份HBsAg,HBcAb阳性的标本,其阳性率为36.4%(4例),平均拷贝数为5.7×105/ml。结论FQ-PCR能够准确定量及有效避免假阳性。FQ-PCR可以真实反应HBV的感染和复制情况,对乙型肝炎的诊断,治疗方案的选择和疗效观察有较大的指导意义。