IKBKE在乙型肝炎病毒相关肝癌组织中的表达及临床意义

目的探究IKBKE在乙型肝炎病毒相关肝癌(HBV-HCC)组织中的表达及其与临床特征和预后的相关性。方法通过组织芯片免疫组织化学染色方法来检测HBV-HCC患者的癌组织和癌旁组织中B细胞编码κ轻链多肽基因抑制激酶E(IKBKE)的蛋白表达;整理并分析患者的一般资料、临床体征及病理报告结果,检测相关的血液指标;使用Pearson相关性分析比较IKBKE在肝细胞肝癌组织中的表达及其与患者的一般临床资料、临床体征、血液指标、病理结果和预后的相关性。结果该研究发现,在HBV相关的肝癌患者中,IKBKE的蛋白表达在癌组织中的表达水平显著高于正常组织,高表达组的生存时间明显低于低表达组。此外,IKBKE表达与肝硬化程度呈负相关,与TFF3、pCEA和Ki67等指标呈正相关。结论IKBKE、TFF3、pCEA和Ki67的联合检测有助于预测HBV相关肝癌的预后。

六种常用血清学诊断模型对成人乙型肝炎e抗原阳性患者肝纤维化的诊断价值比较

目的比较六种常用血清学诊断模型对成人乙型肝炎e抗原阳性患者肝纤维化的诊断价值。方法选取山东省淄博市中心医院和中国人民解放军总医院第六医学中心2018年1月至2023年6月诊断为慢性乙型肝炎并行肝病理组织活检的265例患者为研究对象。采集临床常用的球蛋白与血小板比值(GPR)、纤维化4因子指数(FIB-4)、天冬氨酸转氨酶-血小板比率指数(APRI)、天冬氨酸转氨酶与丙氨酸转氨酶比值(AAR)、纤维化硬化指数(FCI)、S指数(S-index)六种血清学诊断模型的相关指标,以肝组织穿刺活检结果为“金标准”,应用受试者操作特征曲线评估六种模型的诊断效能。结果F1~F4期年龄、血小板计数、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转肽酶、白蛋白、APRI、FIB-4、GPR、S-index和FCI比较,差异有统计学意义(P<0.05)。区分F_(1)~F_(4)时,GPR、APRI、FIB-4、FCI和S-index模型的曲线下面积均>0.70,AAR模型曲线下面积的95%CI为0.50。区分F_(1)与F_(2)~F_(4)、F_(1)~F_(2)与F_(3)~F_(4)、F_(1)~F_(3)与F_(4)时,GPR、APRI、FIB-4、FCI和S-index模型的曲线下面积均大于AAR模型(P<0.05)。结论FIB-4、GPR、S-index和FCI均能较好地区分乙型肝炎e抗原阳性慢性乙型肝炎患者肝纤维化的严重程度,APRI区分效能则按F_(1)~F_(4)的顺序呈逐渐降低趋势,AAR基本不能对肝纤维化的严重程度作出判断。

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的真核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

为建立检测牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体的间接ELISA方法,利用昆虫细胞真核表达系统成功表达E2蛋白,将纯化后的E2蛋白作为包被抗原,用方阵滴定方法对影响ELISA的各个因素进行优化,并进行特异性、敏感性和重复性试验。结果表明,在昆虫细胞中表达了BVDV E2蛋白,Western blot证实目的蛋白可与BVDV阳性血清发生特异性反应。ELISA优化结果显示,E2蛋白最佳包被浓度为0.5μg/mL,最佳封闭液为1%明胶,最佳血清稀释度为1∶400,最佳血清作用方式为37℃作用30 min,酶标抗体的最佳作用方式为1∶2000稀释、37℃作用30 min,最佳底物作用时间为室温20 min,阳性临界值为OD 450≥0.423。与血清中和试验法进行比较,总符合率为97.8%,板内和板间重复性试验的变异系数均小于10%。该方法与牛常见病毒阳性血清均无交叉反应。说明建立的间接ELISA抗体检测方法特异性、敏感性和重复性良好,可用于大批量样本的临床检测和流行病学研究。

新型冠状病毒E蛋白的结构特征及抗原表位分析

目的 基于生物信息学分析新型冠状病毒E蛋白的结构特征,并筛选出潜在的B细胞、T细胞抗原表位。方法 通过多种生物信息软件分析SARS-CoV-2 E蛋白的一级结构、跨膜区域、二级结构,B细胞表位、T细胞相关表位并计算其人口覆盖率。结果 SARS-CoV-2 E蛋白含有75个氨基酸残基,脂溶性高,是疏水性蛋白,存在一个跨膜结构区域12-34aa,二级结构主要以α螺旋和无规则卷曲为主。筛选出一个可能的B细胞抗原表位,并发现与MHC Ⅰ类和MHC Ⅱ类结合的10种肽是疫苗设计的有希望的候选者,这些候选表位可分别覆盖世界88.5%和99.99%的人群。结论 通过生物信息学分析了新型冠状病毒E蛋白的结构特征;筛选出潜在的B细胞、T细胞抗原表位,其中多个T细胞表位人群覆盖率较高,有希望成为疫苗候选表位。

非洲猪瘟病毒pE248R蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备

本研究利用PCR方法从非洲猪瘟病毒的灭活样品中扩增出747 bp的E248R基因全长序列,利用同源重组法构建原核表达质粒pCold I-pE248R,经1 mmol/L的IPTG诱导1 h后,利用SDS-PAGE对重组蛋白进行表达鉴定和反应原性分析,表达蛋白的分子量约为32 kDa,利用纯化后得到pE248R重组蛋白作为免疫原经过4次免疫后制备鼠源抗pE248R多克隆抗体。利用该多克隆抗体检测实验室构建并拯救的已证明能够稳定表达ASFV pE248R蛋白的重组病毒rPRRSV-E248R,结果显示制备的抗pE248R的多克隆抗体能够与rPRRSV-E248R发生特异性结合反应,证明利用本试验中原核表达的pE248R蛋白制备的多克隆抗体具有抗pE248R蛋白的特异性,为进一步针对ASFV E248R基因建立快速,特异性的血清学检测方法奠定了基础,也为针对pE248R蛋白的功能性研究提供了研究基础。

血清IL-10对慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗后e抗原转阴的预测作用

目的观察慢性乙型肝炎病毒感染引起血清IL-10变化,探讨血清IL-10对慢性乙型肝炎(CHB)患者抗病毒治疗后e抗原(HBeAg)转阴的预测作用。方法纳入2008年5月—2013年9月于江苏省苏北人民医院和南京鼓楼医院就诊的90例CHB患者,包括6例非活动携带者(IC)、22例免疫耐受患者(IT)、44例HBeAg阳性患者(EPH)和18例HBeAg阴性患者(ENH)。同时,纳入11名健康人(HC)作为对照。对比健康人与CHB患者血清IL-10含量以及不同免疫状态的CHB患者IL-10血清含量。并对EPH患者中30例接受抗病毒治疗的患者进行随访,共5年。检测其抗病毒治疗后第0周、第4周、第12周、第24周和第48周血清ALT、HBV DNA和IL-10水平。观察抗病毒治疗后2年、3年和5年血清HBeAg是否转阴,并将其分为HBeAg转阴组和HBeAg仍阳性组,比较两组基线血清HBeAg和IL-10水平。结果CHB患者血清IL-10水平显著高于健康献血者。同时在CHB患者中,IT组、EPH组和ENH组患者血清IL-10含量明显高于IC组患者。抗病毒治疗后,血清ALT、HBV DNA、IL-10水平逐渐下降。通过随访发现,在抗病毒治疗后的2年、3年和5年内,分别有9人、10人、13人实现了HBeAg转阴。进一步分析发现,与HBeAg仍阳性组患者相比,在2年、3年和5年内实现HBeAg转阴的患者基线IL-10水平明显更高[(6.49±2.16)vs(3.33±1.22)pg/mL,P=0.062;(5.88±1.99)vs(2.27±1.36)pg/mL,P=0.026;(6.01±1.91)vs(1.15±0.63)pg/mL,P=0.027]。结论慢性乙型肝炎病毒感染可引起患者血清IL-10含量升高,抗病毒治疗可以降低血清IL-10含量,同时抗病毒治疗前血清IL-10含量较高的患者往往能够获得更好的治疗结局。

猪瘟病毒中和抗体与E2蛋白抗体相关性分析

旨在探索猪瘟病毒中和抗体与E2蛋白抗体的关系,本研究对289份猪血清进行中和抗体效价和E2抗体测定,比较分析二者的相关性;同时从中选取15份血清,测定血清对不同猪瘟病毒流行野毒株的中和效价。结果表明,从整体上说E2抗体水平与中和效价呈正相关。当群体中所有个体E2抗体阻断率均大于60%时,才能保证群体70%以上免疫猪的中和抗体达到保护标准。本研究的结果有助于基层兽医工作者更好地评估临床中猪瘟疫苗的免疫保护状况,降低猪瘟疫情发生风险。

坦布苏病毒囊膜蛋白(E蛋白)的截短表达及其抗体间接ELISA方法的建立与应用

为了大量表达坦布苏病毒囊膜蛋白(E蛋白)并建立一种可检测坦布苏病毒抗体的间接ELISA方法,试验首先将去除跨膜域的截短坦布苏病毒E基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)上并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG诱导表达重组蛋白,利用His标签对表达的重组蛋白进行纯化;然后以重组蛋白为包被抗原、鸭待测血清为一抗、HRP标记兔抗鸭IgG为二抗,通过反应条件[抗原包被质量浓度、抗原包被条件、封闭液、封闭时间、一抗(待测血清样品)稀释液、一抗(待测血清样品)稀释度、一抗(待测血清样品)孵育条件、二抗稀释度、二抗孵育条件和显色条件]的优化和临界值的确定建立间接ELISA方法;最后进行特异性、敏感性和重复性试验,并通过临床样品检测比较该方法与Western-blot方法的符合性。结果表明:PCR扩增得到大小为1227 bp的坦布苏病毒截短E基因,经双酶切与测序验证后,成功构建重组表达质粒pET28a-E-tr。诱导后的重组蛋白分子量大小为49 ku并以包涵体的形式表达,纯化后的重组蛋白条带单一,可与鸭源坦布苏病毒阳性血清发生特异性结合。建立的ELISA方法优化后的抗原包被质量浓度为5μg/mL,抗原包被条件为4℃过夜,封闭液为2%BSA,封闭时间为60 min,一抗(待测血清样品)稀释液为1%BSA,一抗(待测血清样品)稀释度为1∶800,一抗(待测血清样品)孵育条件为37℃、30 min,二抗稀释度为1∶7500,二抗孵育条件为37℃、90 min,显色条件为37℃、10 min,阴阳临界值为0.368;仅可检测出鸭源坦布苏病毒阳性血清,无法检测出鸭源鸭疫里默氏杆菌、新城疫病毒、禽腺病毒、禽流感病毒、细小病毒阳性血清;待测血清最高稀释度为1∶3200(Western-blot方法待测血清最高稀释度仅为1∶1600);批次内重复变异系数(CV)为1.7%~4.7%,批次间重复CV为1.4%~5.7%;对137份临床鸭血清样品进行检测,阳性率为81.7%,与Western-blot方法比较样品阳性率较高,两种方法的符合率为87.6%。说明成功表达了坦布苏病毒截短E蛋白,并建立了一种特异性良好、敏感性较高、重复性较好的可检测坦布苏病毒抗体的间接ELISA方法。

HBeAg诱导的免疫激活和免疫抑制在慢性乙型肝炎中的作用

HBV感染诱导的慢性乙型肝炎是导致肝硬化和肝癌的重要危险因素。半个世纪前,HBeAg在HBV感染者血清中首次被发现,尽管HBeAg并不参与HBV在肝细胞中的感染或复制,但其已被证实可干扰宿主先天性和适应性免疫反应,在慢性HBV感染的过程中发挥着重要的免疫激活和免疫抑制作用。HBV对于感染的肝细胞并没有细胞毒性,免疫应答介导的抗病毒作用和炎症反应决定HBV是否被清除或者诱导肝脏炎症相关疾病。因此,本文对HBeAg的形成及其在慢性HBV感染中引起的免疫激活和免疫抑制机制进行综述,重点论述HBeAg对先天免疫和适应性免疫细胞所引起的不同免疫效应,阐述了其诱导免疫反应的两面性,并探讨HBeAg在慢性HBV感染不同阶段间的转换作用。

基线HBV血清标志物联合评分对核苷(酸)类似物抗病毒治疗慢性乙型肝炎患者HBeAg血清学转换的预测价值

目的评估基线血清指标HBV DNA、HBV RNA、HBsAg和HBcrAg联合对HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者(CHB)核苷(酸)类似物治疗过程中HBeAg血清学转换的预测能力。方法以2007年6月—2008年7月首都医科大学附属北京佑安医院疑难肝病及人工肝中心组建的CHB前瞻性随访队列中83例HBeAg阳性患者为研究对象,回顾性分析基线血清HBV DNA、HBV RNA、HBsAg和HBcrAg水平。计量资料两组间比较采用成组t检验或Mann-Whitney U检验。计数资料两组间比较采用χ^(2)检验。采用Spearman法进行相关性分析。构建Cox回归模型并计算HBeAg转换预测评分,时间依赖性受试者工作特征曲线评估病毒学标志物联合对HBeAg血清学转换的预测能力。不同组别累积转换率的计算使用Kaplan-Meier分析,差异比较采用Log-rank检验。结果83例HBeAg阳性患者中位随访108个月,其中44.58%(37/83)的患者发生HBeAg血清学转换。HBeAg转换组患者基线血清HBV DNA[6.23(1.99~9.28)log 10 IU/mL vs 7.69(2.05~8.96)log 10 IU/mL,Z=-2.345,P=0.019]和HBV RNA[4.81(1.40~7.53)log 10拷贝/mL vs 6.22(2.00~8.49)log 10拷贝/mL,Z=-1.702,P=0.010]水平显著低于未转换组;HBsAg和HBcrAg水平两组间比较,差异均无统计意义(P值均>0.05)。基于以上血清标志物构建Cox回归方程,计算联合预测HBeAg血清学转换评分中位数为0.95(范围0.37~3.45)。在总体患者中,联合评分与HBsAg、HBV DNA、HBV RNA和HBcrAg呈负相关,相关系数分别为-0.697、-0.787、-0.990和-0.819(P值均<0.001)。基于联合预测评分中位值,将患者分为高HBeAg转换组和低HBeAg转换组,预测36个月、60个月及84个月时HBeAg血清学转换率,高HBeAg转换组分别为43.90%、51.20%和63.10%,低HBeAg转换组分别为9.60%、17.00%和19.80%,两组间差异有统计学意义(χ^(2)=11.6,P<0.001)。结论基于基线血清HBV标志物构建的联合预测评分可以预测CHB患者核苷(酸)类似物治疗过程中HBeAg的血清学转换。

抗乙型肝炎病毒表面抗原抗体国产ELISA试剂评价

目的 评价 6种国产抗乙型肝炎病毒表面抗原抗体 (抗 HBs)酶联免疫吸附试验 (ELISA)试剂盒。方法 将RocheElecsys 2 0 10电化学发光免疫分析系统上检测余留的抗 HBs标本 ,用 6种国产抗 HBsELISA试剂盒进行检测 ,评价 6种试剂盒的敏感度、检测范围、精密度和特异性。结果 6种国产试剂盒的敏感度相差较大 ,10～ 4 0IU/L不等。 5 0IU/L以下时 ,浓度与吸光度呈直线关系 ,但吸光度数值较低 ;未发现高浓度时的钩状效应。 5 0IU/L的标本 ,A、B 2种试剂的批内变异系数 (CV)分别为 10 .1%和 13.7% ;日间CV分别为 14 .1%和2 4 .8% ;阴性标本在 6种试剂盒中出现了不同程度的假阳性。结论 国产抗 HBsELISA试剂的部分性能应改进和提高。

乙型肝炎病毒前基因组RNA评估恩替卡韦治疗乙型肝炎E抗原阳性慢性乙型肝炎疗效的价值

目的探讨恩替卡韦(ETV)对乙型肝炎E抗原(HBeAg)阳性慢性乙型肝炎(CHB)患者疗效,并观察血清乙型肝炎病毒(HBV)前基因组RNA(pgRNA)水平、评估其疗效价值。方法选取2019年1月至2021年6月东莞广济医院收治的确诊为HBeAg阳性的78例CHB患者为研究对象进行回顾性分析。根据患者ETV治疗12个月后HBeAg是否获得完全应答分为获得组(35例)和未获得组(43例)。两组患者均采用ETV治疗12个月,观察患者治疗过程中血清HBV pgRNA水平及谷丙转氨酶(ALT)各时间点动态变化,并探讨ETV治疗后患者获得应答情况与HBV pgRNA水平及ALT水平的相关性。结果两组患者治疗3、6、12个月的血清HBV pgRNA水平显著低于入组时,且获得组低于未获得组(P<0.05);血清HBV pgRNA水平与获得完全应答呈负相关(P<0.05)。两组患者治疗3、6、12个月的ALT水平显著低于入组时,且获得组低于未获得组(P<0.05);ALT水平与获得完全应答呈负相关(P<0.05)。结论血清HBV pgRNA、ALT水平与HBeAg阳性CHB患者ETV的疗效具有相关性,可用于评估疗效。

无创方法诊断HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者肝内炎症反应程度

目的建立由简单常规实验数据组成的模型,以预测HBeAg阳性且丙氨酸氨基转移酶(ALT)≤2倍正常上限的慢性乙型肝炎(CHB)患者的肝脏炎症反应程度。方法选取2019年4月1日至2021年5月8日151例HBeAg阳性且ALT≤2倍正常上限的CHB患者作为研究对象,根据肝脏病理检查结果分为轻度炎症反应[肝组织炎症分级(G)G0~1]组和中度炎症反应(G≥2)组,采用多因素Logistic回归分析CHB患者发生中度炎症反应的独立危险因素并建立诊断模型。结果53.0%(80/151例)的研究对象出现G≥2。G≥2组ALT、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平均明显高于G0~1组,胆碱酯酶(ChE)、前蛋白比(PA)、HBsAg均明显低于G0~1组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ALT、AST与G分级均呈弱正相关(r=0.212、0.303,P<0.05),ChE、PA、HBsAg与G分级均呈弱负相关(r=-0.371、-0.330、-0.173,P<0.05)。高水平AST、低水平PA、低水平logChE为CHB患者发生中度炎症反应的独立危险因素(P<0.05)。模型CPA对预测发生G≥2的受试者工作特征曲线下面积为0.842(95%CI:0.741~0.935)。当CPA≤0.3,其排除G≥2的阴性预测值为84.21%;当CPA≥0.6时,CPA诊断发生G≥2的阳性预测值为84.00%。结论AST、PA和logChE与HBsAg阳性且ALT≤2倍正常上限的CHB患者的肝内炎症反应程度相关。CPA对发生G≥2具有较好的诊断效能,且该模型涉及的指标简单易得,适合临床推广使用。

乙型肝炎病毒e抗原转成e抗体与血清转氨酶水平相关分析初探

观察100例慢性乙型肝炎病人（慢乙肝组），经用纯中药治疗后，60例HBeAg阴转，HBeAb阳转，肝功能恢复正常。同期收治的另外100例HBsAg携带病人，仅25例HBeAg阴转，HBeAb阳转。结果提示治疗前转氨酶水平的高低是能否取得疗效的重要指标。

小鼠抗西方马脑炎病毒E2蛋白胞外区(E2ecto)单克隆抗体的制备

目的制备针对西方马脑炎病毒(WEEV)E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto)的小鼠特异性单克隆抗体(mAb)。方法构建表达WEEV E2ecto的原核表达质粒pET-28a-WEEV E2ecto,转化BL21(DE3)感受态细胞后,IPTG诱导表达,主要为包涵体形式。包涵体纯化后,通过变性、复性、超滤等制备得到E2ecto蛋白;以QuickAntibody-Mouse5W为佐剂,将E2ecto蛋白肌肉免疫BALB/c小鼠,间隔21 d加强1次。免疫后35 d,取效价超过1×104的小鼠腹腔接种1次E2ecto蛋白,3 d后取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。通过有限稀释法筛选稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞,接种小鼠腹腔后制备腹水;利用ELISA检测抗体亚型及腹水中抗体效价的水平;将真核表达质粒pCAGGS-WEEV-CE3E2E1转染BHK-21细胞,通过免疫荧光法(IFA)鉴定上述mAb的生物学活性;利用东方马脑炎病毒(EEEV)、委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)的E2ecto蛋白进行ELISA鉴定上述抗体的特异性。结果成功表达及复性获得了纯化的WEEV E2ecto蛋白;制备了3G6G10、3D7G2、3B9E8、3D5B7四株mAb,其亚型分别为IgG2c(κ)、IgM(κ)、IgM(κ)、IgG1(κ);3G6G10、3B9E8、3D7G2腹水抗体效价均为105,3D5B7达到107;该4株抗体与VEEV和EEEV等其他脑炎甲病毒无交叉反应。结论成功制备了4株特异性结合WEEVE2ecto的小鼠mAb。

乙型肝炎病毒PreS2抗原及抗-PreS2抗体检测的意义

目的分析乙型肝炎(下称乙肝)病毒PreS2抗原及抗-PreS2抗体检测的临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对乙肝病毒PreS2抗原及抗-PreS2抗体进行检测。结果PreS2抗原在乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、HBeAg、抗-HBc阳性组和HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性组的检出率分别为100%和83.3%,两组分别与抗-HBs、抗-HBc阳性或抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc阳性组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。抗-PreS2抗体在抗-HBs、抗-HBc阳性或抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc阳性组的检出率为33.3%,与HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性组和HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论将PreS2抗原与抗-PreS2抗体作为常规检测,在观察乙型肝炎病毒的早期感染及患者预后判断方面有重要价值。

两种方法检测慢性乙型肝炎患者E抗原/E抗体双阳性的情况分析

目的 分析化学发光微粒子免疫分析(CMIA)法与酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测慢性乙型肝炎(CHB)患者E抗原(HBeAg)/E抗体(Anti-HBe)双阳性情况。方法 回顾性分析2017年7月至2021年6月诊断为CHB患者的资料,经CMIA、ELISA法检测为HBeAg/Anti-HBe双阳性分别为350、84例。比较CMIA法检测的350例样本中Anti-HBs在10~100 mIU/ml水平下的HBeAg、Anti-HBe水平,HBV-DNA在2~8水平下的HBeAg、Anti-HBe水平差异,并分析两种方法检测HBV-M双阳性的情况。结果 不同Anti-HBs水平下的HBe Ag、Anti-HBe水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);Anti-HBs>100 mIU/ml的HBe Ag、Anti-HBe高于Anti-HBs 10~100 mIU/ml和Anti-HBs <10 mIU/ml,差异有统计学意义(P<0.05);Anti-HBs<10 mIU/ml与Anti-HBs 10~100 mIU/ml水平下的HBe Ag、Anti-HBe水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。350例患者中有263例行HBVDNA测定,HBV-DNA在2~8水平下的HBe Ag、Anti-HBe水平比较,差异有统计意义(P<0.05);其中不同HBV-DNA水平下的HBe Ag水平:[(6~8)>(2~)>(<2)],差异有统计学意义(P<0.05);不同HBV-DNA水平下的Anti-HBe水平:[(6~8)<(2~)<(<2)],差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA法初检HBV-M双阳性84例,ELISA法复检双阳性45例,再行CMIA法检出双阳性3例(6.67%),其他结果:HBe Ag(+)/Anti-HBe(-)、HBe Ag(-)/Anti-HBe(+)、HBe Ag(-)/Anti-HBe(-)分别为36例(80.00%)、4例(8.89%)、2例(4.44%);CMIA检测双阳性中有47例行ELISA法复检,检出双阳性2例(4.26%),其他结果:HBeAg(+)/AntiHBe(-)、HBeAg(-)/Anti-HBe(+)、HBeAg(-)/Anti-HBe(-)分别为5例(10.64%)、2例(4.26%)、38例(80.84%)。结论 不同HBV-DNA水平下的HBV-M呈现多样性,且不同方法检测HBeAg、Anti-HBe的结果间存在明显差异,其中CMIA法较ELISA法的假阳性更少。

抗乙型肝炎病毒e抗原和核心抗原双特异性单克隆抗体的建立与应用

用基因工程技术在大肠杆菌中高效表达的乙型肝炎病毒核心抗原(内含高滴度的e抗原)免疫Balb/C小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(Sp2/0)融合,获得两株分泌高滴度既抗-HBe又抗-HBc的双特异性杂交瘤细胞系。细胞培养上清液中抗体滴度为100～1000以上;免疫腹水中的抗体滴度为8万至10万以上,均属IgG2a亚类。细胞在实验室连续传代二年多,仍保持高效分泌抗体能力。此单克隆抗体与HBeAg或HBcAg的结合可被抗-HBc或抗-HBc阳性血清所抑制,竞争抑制率在85.9％～96.8％之间。用此单克隆抗体与HBe的β型单克隆抗体和抗HBc的α型单克隆抗体配对,可组装成检测HBeAg/抗-HBe和抗-HBc的诊断试剂,具有重要的应用价值。

H9N2亚型禽流感病毒多拷贝M2e蛋白单克隆抗体的制备

为制备H9N2亚型禽流感病毒(AIV)多拷贝M2e蛋白单克隆抗体,试验将纯化的3M2e重组蛋白免疫BALB/c小鼠;取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA筛选出分泌抗体的杂交瘤细胞株;将获得的杂交瘤细胞株腹腔注射BALB/c小鼠制备腹水;采用间接ELISA测定腹水效价,鼠源单克隆抗体亚类鉴定试剂盒检测单克隆抗体腹水,三株单克隆抗体重链亚型均为IgG1;Westernblot鉴定单克隆抗体的特异性;使用IFA鉴定3M2e蛋白在Sf9细胞的表达和检测H9N2亚型AIV在MDCK细胞的感染。结果显示:获得了3株分泌多拷贝M2e抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为4C7-B11、4E10-A10和5A12-B5;获得腹水的效价均为1∶1000000;三株单克隆抗体重链亚型均为IgG1;Westernblot鉴定三株单克隆抗体均能与2M2e、3M2e和4M2e原核重组蛋白及在Sf9细胞表达的3M2e发生特异性反应;IFA鉴定结果也显示三株单克隆抗体均能检测3M2e蛋白在Sf9细胞的表达,并且能检测到H9N2亚型AIV在MDCK细胞上的感染,出现特异性的绿色荧光;三株单克隆抗体重链亚型均为IgG1。研究获得了H9N2亚型AIV多拷贝M2e单克隆抗体,可用于Westernblot和IFA鉴定,为靶向M2e蛋白H9N2亚型禽流感疫苗的研究提供特异性的检测工具。

血清HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者接受核苷(酸)类似物治疗疗效和检测血清HBV RNA的意义

目的探讨血清HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者接受核苷(酸)类似物治疗疗效和检测血清HBV RNA的意义。方法选取2018年3月—2021年1月期间山东省文登整骨医院收治的HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者58例,采用核苷(酸)类似物治疗24周,比较治疗前后临床特征,分析血清ALT和HBV RNA对快速病毒学应答的预测价值。结果比较治疗前后临床特征可知,治疗后患者总胆红素、ALT、HBV DNA和HBV RNA水平分别为(0.2±0.1)mg/dL、(121.5±59.0)U/L、0.8(0.5,0.3)log 10拷贝/mL和1.4(1.1,1.7)log 10拷贝/mL,显著低于治疗前患者的(0.8±0.3)mg/dL、(168.3±134.6)U/L、8.4(5.1,10.6)log 10拷贝/mL和7.2(5.0,9.9)log 10拷贝/mL,血清HBV DNA阴性率和血清HBV RNA阴性率分别为94.8%和70.7%,显著高于治疗前患者的0.0%和0.0%(P<0.05);分析血清ALT和HBV RNA对快速病毒学应答的预测价值可知,ALT、HBV RNA单独预测快速病毒学应答的AUC分别为0.629、0.831,最佳截断值分别为≥142、≥1.9,灵敏度分别为59.0%、82.0%,特异度分别为72.1%、80.0%,阳性预测值分别为74.8%、86.6%,阴性预测值分别为58.2%、83.0%。结论核苷(酸)类似物对于血清HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者具有良好的疗效,血清HBV RNA是快速病毒学应答的良好预测指标。